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利用骨髓间充质干细胞膜片原位构建“三明治”样组织工程牙周膜的实验研究被引量：1: 2016年; 目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSC细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4和12周取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察牙周膜的再生情况。结果相比单纯胶原膜组和空白对照组,实验组在牙根与牙槽骨间形成了清晰的软组织间隙,且有类Sharpey纤维存在,即形成了功能性牙周膜。结论细胞膜片-胶原膜-细胞膜片的"三明治"样夹层结构可较好地促进牙周膜再生。; 刘翠朱彪张欣然刘东华赵刚郭希民郭红延; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞外基质

肿瘤坏死因子-α诱导骨髓间充质干细胞凋亡作用的研究被引量：6: 2015年; 目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡的影响。方法:分离培养大鼠BMSCs,经成骨、成脂诱导分化鉴定后,分别用浓度为0、20、40μg/L的TNF-α对其进行刺激。24 h后,通过细胞活性检测观察不同浓度TNF-α对BMSCs的活性影响;Tunel染色观察不同浓度TNF-α对BMSCs凋亡的影响;Western blot检测不同浓度TNF-α刺激后,BMSCs中Bax、Bcl-2蛋白的表达量。结果:BMSCs经体外培养扩增后,成骨、成脂鉴定均为阳性。台盼蓝染色、Tunel染色结果显示,随TNF-α浓度增高,BMSCs的死亡率增高,细胞凋亡率则呈浓度依赖性增高(P<0.05);Western blot结果显示,随TNF-α浓度增高,BMSCs中Bax表达逐渐增加,Bcl-2表达逐渐降低(P<0.05)。结论:TNF-α可诱导BMSCs的凋亡。; 张欣然刘翠朱彪张玉成郭希民郭红延; 关键词：BMSCS 肿瘤坏死因子 BAX BCL-2

人β-防御素3与结缔组织生长因子共表达重组慢病毒载体的构建及表达: 2017年; 目的体外构建共表达人β-防御素3(hBD3)与结缔组织生长因子(CTGF)的重组慢病毒,并检测其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的转染效率及表达情况。方法体外构建携带hBD3、CTGF和增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒表达载体,测定病毒滴度。转染BMSC,确定最适感染倍数(MOI)值。采用荧光显微镜和流式细胞仪检测病毒的转染效率及传代稳定性。Western印迹检测目的蛋白的表达。结果经PCR和测序分析鉴定,成功构建了携带hBD3和CTGF基因的重组慢病毒载体Lenti-CTGF-hBD3-EGFP、Lenti-hBD3-EGFP和Lenti-EGFP,检测病毒滴度分别为3.21×10~8、5.80×10~8和1.16×10~9。病毒转染BMSC最适MOI值为150。荧光显微镜下,转染后BMSC绿色荧光效率高;流式细胞仪检测病毒的转染效率,Lenti-CTGF-hBD3-EGFP为79.72%,Lenti-hBD3-EGFP为83.08%,Lenti-EGFP为84.43%,且都稳定遗传。Western印迹显示目的蛋白表达成功。结论成功构建了共表达hBD3、CTGF的重组慢病毒载体,并能在BMSC中高效、稳定表达,为进一步研究hBD3与CTGF的应用奠定了基础。; 孙洁钱智勇刘静张欣然刘翠刘东华郭红延郭希民; 关键词：重组慢病毒结缔组织生长因子骨髓间充质干细胞

PAA-CS超吸水海绵应用于喂服华法林大鼠拔牙创模型的止血效果被引量：3: 2015年; 目的探讨PAA-CS超吸水海绵应用于口腔拔牙创的优势。方法建立对照组(A组)SD大鼠拔牙创模型和华法林组(B组)SD大鼠凝血功能异常拔牙创模型,以纱布棉球做阴性对照对拔牙创进行止血,比较PAA-CS超吸水海绵与纱布棉球的止血效果。结果 B组凝血酶原时间(s)较A组显著延长[(19.73±2.74)vs(10.04±0.95),P<0.05],INR值增大(3.49 vs 1)。A、B两组中,PAA-CS超吸水海绵止血时间均少于纱布棉球,差异有统计学意义(P<0.05);A组止血后无继发出血;B组应用纱布棉球止血后有4只继发出血。结论成功建立了因喂服华法林而导致凝血功能异常的大鼠拔牙创模型,PAA-CS超吸水海绵的止血效果明显优于纱布棉球。; 张玉成张欣然刘翠朱彪钱智勇郭希民郭红延; 关键词：华法林

以ADSCs替代BMMSCs构建组织工程骨修复种植区骨缺损的实验研究被引量：9: 2015年; 目的:探讨以脂肪来源干细胞(ADSCs)构建组织工程骨修复种植体周围骨缺损的成骨效果。方法:拔除6只Beagle犬下颌双侧前磨牙。3个月后,在每侧下颌拔牙区植入2个种植体,并在每个种植体的远中制备5 mm×5 mm×5 mm的骨缺损,分别随机植入ADSCs复合富血小板血浆(PRP)(ADSCs-PRP)凝胶(n=12)和骨髓间充质干细胞(BMMSCs)复合富血小板血浆(BMMSCs-PRP)凝胶(n=12)。移植后1、3个月取材,行大体及组织学观察,影像学方法检测植骨区骨密度。结果:ADSCs组和BMSCs组术后即刻植骨区骨密度分别为75±9和77±10(P>0.05),术后1个月为102±13和101±9(P>0.05),术后3个月为109±14和111±12(P>0.05)。结论:ADSCs可以作为一种替代的间充质谱系来源细胞构建组织工程骨修复种植体周围骨缺损。; 朱彪张欣然赵刚郭希民郭红延; 关键词：脂肪来源干细胞组织工程骨口腔种植

人β-防御素3与杀菌/通透性增加蛋白重组腺病毒载体及其转染C3H10T1/2细胞的构建: 2015年; 目的构建人β-防御素3(h BD3)与杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的重组腺病毒载体p Adxsi-BPIBD3,并转染鼠胚胎间充质干细胞系(C3H10T1/2),观察融合蛋白的表达。方法酶切原始质粒,得到BPI-BD3片段,连接到p Shuttle-CMV得到p Shuttle-BPI-BD3,验证后将插入片段转移至p Adxsi载体构建重组腺病毒质粒,线性化后转染HEK293细胞,扩增纯化后,TCID50测定重组腺病毒滴液。p Adxsi-BPI-BD3及空载体p Adxsi(作为对照组)转染C3H10T1/2。RT-PCR、Western blot检测BPI-BD的表达;MTT法检测其对细胞增殖的影响。结果成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,纯化后病毒滴度达1.2×1010pfu/ml。p AdxsiBPI-BD3转染C3H10T1/2后,RT-PCR、Western blot结果显示,BPI-BD3融合蛋白表达成功。MTT结果显示,转染的C3H10T1/2生长无明显影响(P>0.05)。结论成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,且转染C3H10T1/2后可稳定表达BPI-BD3融合蛋白,为进一步研究应用抗菌肽BPI-BD3奠定基础。; 张欣然刘翠钱智勇翟羽郭希民郭红延; 关键词：腺病毒载体

维生素C对兔骨髓间充质干细胞成脂分化的影响被引量：1: 2016年; 目的探讨维生素C（vitamin C,Vc）对兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成脂分化能力的影响。方法以兔BMSCs为实验对象,添加0~150μg/ml不同浓度的Vc处理后,进行成脂诱导,镜下观察诱导4 d、7 d、10 d、14 d、21 d的脂肪形成情况,并利用油红-O染色提取法检测其脂肪含量,实时荧光定量PCR（q PCR）法检测成脂相关转录因子PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA表达的变化。结果相比未添加Vc组,不同浓度的Vc均能增加BMSCs成脂量和成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达。其中50μg/ml Vc处理组OD值高达1.373±0.099,高于其他组（0.720±0.011、0.879±0.023、0.915±0.159、1.088±0.066、0.908±0.162）,差异有统计学意义（P〈0.01）,而该组PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达最高水平分别为5.82±0.24、5.41±0.42、5.14±0.54,与其他组差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 Vc可以促进MSCs的成脂分化且最佳浓度为50μg/ml。; 刘翠张欣然刘东华周勇翟羽郭希民郭红延; 关键词：维生素C 间充质干细胞成脂分化

兔骨髓间充质干细胞膜片特性及优势研究被引量：1: 2015年; 目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(r BMMSCs)膜片的基本生物学特性及其在组织工程应用中的优势。方法:从日本大耳白兔提取原代骨髓培养r BMMSCs,采用简单制备方法构建r BMMSCs细胞膜片,大体、HE染色观察,MTT、成骨成脂诱导检测膜片增殖分化能力,RT-PCR检测膜片相关优势基因的表达情况。结果:成功分离r BMMSCs,诱导10-14d后获得白色膜状细胞膜片,并可用无菌眼科镊提拉。镜下观察细胞呈梭形重叠生长,HE染色显示细胞间紧密连接并有大量细胞外基质(ECM)分泌;MTT显示膜片细胞密度随时间增加;成骨成脂诱导结果显示其分化能力明显优于普通培养的r BMMSCs;RT-PCR结果显示,与r BMMSCs相比,细胞膜片高表达ColⅠ和Fn。结论:r BMMSCs细胞膜片相比普通培养的r BMMSCs,在组织工程应用中更具优势。; 刘翠张欣然刘东华翟羽郭希民郭红延; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞外基质

BPI-BD3融合抗菌肽修饰C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响被引量：6: 2015年; 目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡萄球菌制造感染创面。造模后,随机均分为3组每组10只,T组尾静脉注射p Adxsi-BPIBD3转染后的C3H10T1/2细胞,C组注射未转染的C3H10T1/2细胞,N组注射等量PBS。通过大体观察、痂下细菌计数、测定创面残留面积、HE染色等来评价BPI-BD3修饰的C3H10T1/2的促愈效果。结果与其余两组相比,T组痂下菌量较少(P<0.05),且T组愈合较快,7、14d时,创面残留面积与其余两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与其余两组相比,T组炎症较轻、表皮生长较快。结论 BPI-BD3修饰的C3H10T1/2可以促进金黄色葡萄球菌所致的小鼠感染创面的愈合。; 张欣然刘翠钱智勇徐红梅郭希民郭红延; 关键词：C3H10T1/2细胞 Β防御素伤口感染

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张欣然

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