张晓慧
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人三阴性乳腺癌细胞耐药株的建立及特性研究
- 2016年
- 目的建立人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的多西紫杉醇(Doc)耐药模型(MDA-MB-231/Doc)和表阿霉素(Epi)耐药模型(MDA-MB-231/Epi),探讨其生物学特性。方法采用Doc和EPi低浓度逐步加量诱导法历时12个月分别建立MDA-MB-231/Doc和MDA-MB-231/Epi耐药细胞株。通过细胞形态学观察、MTT法和流式细胞术分析、比较其生物学特性,实时荧光定量PCR检测多药耐药基因(MDR1)mRNA表达,Western Blot法检测P糖蛋白(P-gp)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her-2)的表达状况。结果所构建的MDA-MB-231/Doc和MDA-MB-231/Epi耐药株可分别在12nmol/L Doc和800nmol/L Epi中稳定生长,在相同的药物浓度下,耐药细胞株的生长增殖率明显高于亲代细胞,其耐药指数分别为亲代敏感细胞的8.32倍和64.93倍,且相互呈交叉耐药状态。与亲代细胞相比,两株耐药细胞处于G1期和G2期的细胞增加、处于S期的细胞减少,随撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快。两株耐药株的MDR1基因表达水平增高,分别为亲代细胞的4.05倍和5.96倍,P-gp表达为阳性。与MCF-7细胞株相比,MDA-MB-231细胞株ER、PR、HER2表达阴性,是典型的三阴性乳腺癌细胞株。结论成功建立MDA-MB-231/Doc和MDA-MB-231/Epi的耐药细胞株,其生长及耐药性稳定。
- 吴月琴钟山亮张晓慧唐金海赵建华
- 关键词：乳腺癌细胞多西紫杉醇表阿霉素多药耐药
- 5-Aza-CdR对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响被引量：6
- 2015年
- 目的研究5-氮-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对乳腺癌MCF-7细胞增殖及抑癌基因RASSF2A表达的影响。方法用不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7细胞12-96h,四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法和流式细胞仪分别检测药物处理前后细胞的增殖活性和凋亡率;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各阶段RASSF2A mRNA的表达水平,甲基化特异性PCR（MSP）观察该基因甲基化的改变。结果用1、5、10μmol/L 5-Aza-CdR处理MCF-7细胞24、48、72和96h后,细胞生长均受到抑制,呈时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,3种药物浓度处理细胞72h后凋亡率增加,5和10μmol/L组凋亡率分别为（25.5±3.5）%和（58.2±3.2）%,与对照组（13.4±2.0）%相比差异有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR检测显示,不同浓度药物处理MCF-7细胞后,RASSF2A mRNA表达水平随着药物浓度的增加而逐步上调;进一步MSP检测发现这些癌细胞中RASSF2A甲基化状态得到了不同程度的逆转。结论 5-Aza-CdR可通过逆转RASSF2A基因异常甲基化导致该基因表达上调来抑制MCF-7细胞增殖,RASSF2A是一个乳腺癌相关抑癌基因。
- 马腾飞韦达钟山亮张晓慧赵建华
- 关键词：甲基化5-AZA-CDR乳腺癌
- miR-21靶向调节MARCKS基因影响人乳腺癌细胞多西紫杉醇敏感性的研究被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨miR-21对MARCKS基因表达的调控及其与乳腺癌MDA-MB-231细胞株多西紫杉醇耐药的关系。方法:通过基因芯片筛选到miR-21在亲代敏感细胞株(MDA-MB-231/S)与多西紫杉醇耐药细胞株(MDA-MB-231/Doc)中存在差异表达,应用实时荧光定量(RT-qPCR)方法验证此差异,同时分别检测MDA-MB-231/S细胞和MDA-MB-231/Doc细胞转染miR-21模拟物和抑制物后的表达变化;通过靶基因预测软件预测miR-21与MARCKS基因的关系;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术、RT-qPCR和蛋白质印迹法检测miR-21表达变化对三阴性乳腺癌细胞多西紫杉醇耐药性的影响,并探讨其与MARCKS基因表达的关系。结果:与MDA-MB-231/S相比,miR-21在MDA-MB-231/Doc中的表达水平明显升高(2.03±0.06)倍(P<0.05)。与阴性对照组比,MDA-MB-231/S细胞转染miR-21 mimics后miR-21表达水平明显增高(2.26±0.07)倍(P<0.05),而MARCKS基因在mRNA和蛋白水平上均明显下调。MDA-MB-231/Doc细胞转染miR-21 inhibitors后,miR-21表达水平是阴性对照组的(0.36±0.03)倍(P<0.05),MARCKS基因的mRNA和蛋白水平高于其阴性对照组。转染miR-21 mimics后的MDA-MB-231/S细胞IC50显著高于其阴性对照组(P<0.05),相反,与阴性对照组相比,MDA-MB-231/Doc细胞转染miR-21 inhibitors后,其IC50显著降低(P<0.05)。MDA-MB-231/S转染miR-21 mimics后,miR-21表达量明显上调,MARCKS基因分别是阴性对照组的(3.564±0.336)倍和(2.019±0.268)倍(P<0.05)。结论:miR-21可能通过靶向调节MARCKS基因增强乳腺癌细胞对多西紫杉醇的耐药性。
- 赵杨钟山亮钟山亮张晓慧赵建华
- 关键词：乳腺癌MIR-21耐药多西紫杉醇
- Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌发生、转移及耐药形成中的作用被引量：4
- 2015年
- 乳腺癌是全球女性中最常见的恶性肿瘤之一，随着其发病率及病死率的升高，已成为女性健康的最大威胁。近年来，信号通路在肿瘤的发生、发展、转移及药物耐药中的作用已受到关注，其中 Wnt 信号通路与肿瘤尤其是乳腺癌的关系一直是肿瘤学领域研究的焦点。Wnt/β-catenin 是目前研究最多的Wnt 信号通路之一，是一类在生物体进化过程中高度保守的信号转导途径，众多生命活动过程均受其调节控制。它主要参与了细胞的增殖、分化、极化、凋亡与抗凋亡等过程，该信号通路的异常与细胞无限制恶性生长和癌变密切相关。近年来已有不少国内外学者对 Wnt/β-catenin 信号通路在乳腺癌中的作用进行了研究，现综述如下。
- 张晓慧赵建华唐金海
- 关键词：信号通路乳腺癌耐药
- 微RNA-99b靶向调节mTOR基因表达可逆转人乳腺癌细胞对多柔比星的耐药性被引量：3
- 2016年
- 目的:探讨微RNA-99b(microRNA-99b,miR-99b)通过靶向调节哺乳动物雷帕霉素靶分子(mammalian target of rapamycin,mTOR)基因的表达,在人乳腺癌细胞对多柔比星(doxorubicin,DOX)耐药过程中的作用及其可能的分子机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测miR-99b在亲本敏感细胞株MCF-7/S和DOX耐药细胞株MCF-7/DOX中的表达水平。应用生物信息学软件预测miR-99b的潜在靶基因,选取mTOR作为研究靶基因。将miR-99b模拟物和miR-99b抑制子分别转染MCF-7/S和MCF-7/DOX细胞(以转染阴性对照序列作为阴性对照组),然后采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测备组细胞中miR-99b和mTOR的表达变化,并采用MTT法和FCM法分别检测miR-99b抑制表达或过表达后MCF-7/S和MCF-7/DOX细胞对DOX的敏感性以及细胞凋亡变化。同时,MTT法检测mTOR抑制剂雷帕霉素处理后MCF-7/DOX细胞对DOX的敏感性变化。结果:耐药细胞MCF-7/DOX中miR-99b的相对表达水平比敏感细胞MCF-7/S明显降低(P<0.001)。与阴性对照组或未转染对照组相比,miR-99b模拟物转染MCF-7/DOX细胞后,miR-99b的相对表达水平明显升高(P<0.001),DOX对细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))明显降低(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),而且mTOR的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01,P<0.001)。当MCF-7/S细胞转染miR-99b抑制子后,miR-99b的相对表达水平比阴性对照组明显降低(P<0.05),DOX的IC_(50)值明显升高(P<0.001),mTOR的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P值均<0.001),而细胞凋亡率比未转染对照组明显降低(P=0.001)。在MCF-7/DOX细胞中分别加入100、400和1 600 nmol/L的mTOR抑制剂雷帕霉素处理后,DOX对细胞的IC_(50)值均明显降低(P值均<0.001)。结论:miR-99b可以靶向下调mTOR基因的表达,从而增加人乳腺癌细胞对DOX作用的敏感性。
- 陈琳钟山亮张磊张晓慧于丹丹赵建华唐金海
- 关键词：基因表达MTOR多柔比星
- 冠状动脉血流信号的计算机测量与分析被引量：2
- 2000年
- 本文介绍在药效学研究的实验中,应用计算机技术测量,处理血流信号的新方法,通过分离实验动物左冠状动脉的旋支,接入电磁流量计探头,直接引出血流波形,经计算机采集,得到与左室压,动脉压,心电图等同步的血流信号,再由计算机对血流信号的基本参数进行计算分析,为深入进行有关药效学研究提供了新手段。
- 黄小平丁建华张晓慧李勇胡刚
- 关键词：冠状动脉血流信号血液循环
- 食管癌组织体外药敏与疗效相关基因表达水平的相关性研究
- 目的:探索食管癌术后新鲜肿瘤组织中疗效相关基因表达与体外组织药敏的相关性。方法:(1)通过组织培养药物敏感性检测技术(Histoculture Drug Response Assay,HDRA)检测食管癌术后肿瘤组织对顺...
- 张晓慧
- 关键词：食管鳞状细胞癌化疗敏感性分子标志物
- 文献传递
