焦杨
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：西安交通大学医学院更多>>
- 发文基金：陕西省社会发展科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 神经营养素4前导序列介导Exendin-4表达质粒的构建及鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:构建神经营养素4前导序列介导的可分泌表达Exendin-4的重组腺伴病毒载体,为探究Exendin-4用于2型糖尿病临床治疗提供实验基础。方法:使用互补引物/模板法及T载体克隆法扩增Exendin-4的cDNA克隆,连接于NT4前导肽序列的3′端,融合基因NT4-Exendin-4亚克隆于穿梭质粒pSSHG,转染HEK-293细胞,包装病毒,斑点杂交方法测定重组病毒滴度。结果:经酶切、测序证实克隆出Exendin-4 cDNA,成功构建同一开放读码框ORF的NT4前导肽Exendin-4 cDNA克隆,得到高滴度(2.5×109pfu·L-1)的重组腺相关病毒。结论:通过分子克隆技术成功制备了Exendin-4的重组腺伴病毒载体pSSHG/NT4-Exendin-4并成功包装了较高浓度的重组病毒,为进一步研究Exendin-4功能及应用于临床打下基础。
- 王俊红郭永红焦杨张静徐静谢璇杨广笑王全颖王枫
- 关键词：质粒构建EXENDIN-4
- 重组双链及单链腺相关病毒介导Exendin-4表达效率的比较
- 2015年
- 比较双链腺相关病毒(Double-stranded adeno-associated virus,ds AAV)及单链AAV(Singlestranded adeno-associated virus,ss AAV)介导Exendin-4分泌表达效率。应用基因工程方法构建ds AAV/p SSHG/Exendin-4,与重组ss AAV比较转染NIH3T3细胞效率及转染后细胞上清Exendin-4浓度,免疫组化检测Exendin-4表达。经限制性内切酶及测序证实载体构建成功,测定重组ds AAV p SSHG/Exendin-4滴度为2.5×1011pfu,较重组ss AA滴度高(2.5×109pfu);ds AAV/p SSHG/GFP转染NIH3T3细胞表达绿色荧光强;ELISA法检测感染重组ds AAV的NIH3T3细胞上清中Exendin-4的浓度为181.1±8.75pmol/ml,较重组ss AAV分泌浓度(133.81±8.09pmol/ml)升高(P<0.05);重组ds AAV及ss AAV转染NIH3T3细胞Exendin-4表达均为阳性。重组ds AAV可分泌表达Exendin-4并较ss AAV具有更高效转染能力,为研究Exendin-4功能及应用于临床打下基础。
- 王俊红问姣董鹏张静焦杨郭永红
- 关键词：EXENDIN-4腺相关病毒
