李然
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金四川省科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 禽传染性支气管炎病毒H52反向遗传株的构建被引量：2
- 2016年
- IBV H52基因组全长27.6kb,分13个1.3～2.9kb的片段扩增H52全长cDNA,额外扩增N-3′片段,并克隆到载体PMD19-T上.利用No see′m技术在每个片段中引入BsaⅠ或BsmBⅠ酶切位点,D1片段中引入沉默突变位点,在5′UTR端和N-3′引入T7启动子,3′UTR端引入Poly（A）尾.将克隆好的13个片段酶切,纯化,体外无缝连接为全长cDNA.将全长cDNA及N-3′体外转录获得它们的转录体,将转录体共转染BHK-21细胞,48h后收获细胞液,将细胞液接种10日龄SPF鸡胚获得反向遗传株H52-R.在鸡胚中盲传5代后,通过RT-PCR对无义突变位点进行扩增及序列分析,在反向株H52-R中发现引入的无义突变位点.对反向株H52-R的一些生物学特性如HA、EID50等测定发现,H52-R的这些生物学特性与亲本株H52相似.
- 许记刚王红宁杨鑫李然姬高升
- 关键词：IBV
- 禽传染性支气管炎病毒M_(41)株反向遗传株的构建被引量：1
- 2015年
- 禽传染性支气管炎病毒是目前危害禽养殖业的重大传染病之一。由于病毒基因组大、操作困难,给研究其基因组结构开发有效的疫苗带来了困难。本研究在对IBV M41毒株全基因组序列测序的基础上用DNAStar软件的Map Draw程序分析酶切位点的分布情况,将全基因组分为14段分段扩增。采用Primer6设计含No See’m酶切位点,在5’端引入T7启动子核心序列的引物,分段克隆于PMD19-T载体,通过引入的"No See’m式"Bsa I和BsmB I酶切位点,将亚克隆体外拼接成基因组全长cDNA。再通过5’端引入的T7启动子核心序列对基因组全长cDNA进行体外转录,使用电击的方法将全长转录物转染BHK-21细胞,转染后转入SPF鸡胚培养,鉴定成功获得了IBV M41拯救株。为研究IBV强毒株的致病机理、毒力位点及IBV新型疫苗的研究提供了参考,奠定了基础。
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- 关键词：IBV
- 2012-2013年蛋鸡J亚群禽白血病流行病学调查被引量：4
- 2015年
- 为了解J亚群禽白血病在蛋鸡中的流行情况，采用ELISA试剂盒对2012-2013年采至7个蛋鸡场的1735份泄殖腔拭子和57份疫苗样品进行了P27抗原检测，1512份血清进行了ALV—J亚群抗体的检测．结果显示：（1）此次调查的蛋鸡场均有不同程度的白血病病毒感染，其中两个疑似发病的鸡场P27抗原阳性率均较高，分别为9．89％和11．83％；（2）不同代次蛋鸡的AL阳性率均有所差异．祖代、父母代、商品代蛋鸡P27抗原检出率分别为3．16％、6．49％、8．87％，ALV—J抗体检出率分别为3．36％、4．63％、7．13％．商品代蛋鸡的感染情况比父母和祖代种鸡严重，提示存在垂直感染的情况；（3）不同日龄蛋鸡的AL阳性率有明显差异，以产蛋初期和产蛋高峰期阳性检出率较高；（4）AL阳性率在不同品种的蛋鸡中也有差异，尼克粉蛋鸡的P27抗原阳性率最高，海兰褐蛋鸡的ALV—J抗体阳性率最高；（5）57份弱毒疫苗中，有一份检出P27抗原，可能受到白血病病毒的污染．
- 李鑫王红宁杨鑫李然
- 关键词：J亚群禽白血病蛋鸡流行病学调查
