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刘慧: 作品数：23 被引量：34H指数：2; 供职机构：深圳市疾病预防控制中心更多>>; 发文基金：深圳市科技计划项目国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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H7N9流感病毒感染神经系统相关细胞特征分析被引量：2: 2020年; H7N9流感病毒感染人类不仅可以侵犯呼吸系统,偶尔还会侵犯中枢神经系统引发流感病毒性脑病(Influenza-associated encephalopathy,IAE)。IAE是引起H7N9感染者死亡的重要因素,但其致病机制尚未阐明。为研究H7N9流感病毒引发IAE的致病机制,本研究以小鼠小胶质细胞(Bv2)以及小鼠神经瘤母细胞(N2a)为研究对象,细胞免疫荧光激光共聚焦显微镜观察Bv2、N2a细胞上流感病毒相关受体SA-α2,6-Gal、SA-α2,3-Gal分布;微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测H7N9感染Bv2、N2a细胞扩增情况;液相芯片法检测H7N9感染Bv2、N2a细胞后细胞因子分泌情况。结果显示,Bv2、N2a细胞上都有流感病毒感染相关受体SA-α2,6-Gal、SA-α2,3-Gal的分布。H7N9流感病毒可以成功感染Bv2、N2a细胞,且病毒在Bv2细胞内的扩增效率明显高于N2a细胞。H7N9感染Bv2细胞后出现部分细胞因子分泌量升高现象,而感染N2a细胞后未出现。本研究成功建立了H7N9流感病毒感染Bv2以及N2a细胞模型,为探讨H7N9引发IAE致病机制研究奠定了基础。; 丁小满雷雨璇杨国樑王昕武伟华吕燕刘慧孙颖彭博刘岚铮房师松; 关键词：小鼠小胶质细胞

H7N9流感病毒感染A549细胞蛋白质组学的初步研究被引量：1: 2016年; 通过建立H7N9和H1N1流感病毒(H1N1pdm09)感染人肺癌上皮细胞(A549)模型,研究病毒感染细胞后细胞蛋白质组学差异变化,探讨H7N9流感病毒感染人类致病机制。将感染复数(MOI)为0.001的H7N9、H1N1pdm09流感病毒感染A549细胞24h、48h、72h后提取细胞总蛋白进行荧光双向差异凝胶电泳(2D-DIGE)和基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析鉴定差异蛋白。质谱共鉴定出H7N9和H1N1pdm09流感病毒感染A549细胞24h、48h、72h上调或下调的差异蛋白分别为11、12、33个。对差异蛋白进行功能分析发现与H1N1pdm09感染组相比,(纤)丝状肌动蛋白成帽蛋白α1(F-actin-capping protein subunit alpha-1,CapZ-α1)、鸟氨酸氨基转移酶(Ornithine aminotransferase,OAT)、Poly(rC)-binding protein 1(PCBP1)、真核翻译起始因子5A-1(Eukaryotic translation initiation factor 5A-1,eIF5A)在H7N9感染A549细胞后表达量的下调加速了致细胞病变效应。血小板活化因子乙酰水解酶Ⅰb亚基β(Platelet-activating factor acetylhydrolaseIb subunit beta,PAFAH1B2)在H7N9感染A549细胞后期表达量显著降低可能与该病毒感染患者的临床症状相关。; 丁小满俞若曦王昕武伟华彭博刘慧耿一介董方圆陆家海俞慕华房师松; 关键词：A549细胞蛋白质组学

H7N9流感病毒NA基因5'UTR可变区A27G突变可增强NA基因转录与翻译: 2019年; 目的探讨H7N9流感病毒神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因非翻译区(untranslated region,UTR)可变区碱基多态性对NA基因转录与翻译的影响.方法通过生物信息学方法分析H7N9流感病毒NA基因UTR的可变区碱基多态性位点,人工合成N9-UTR可变区随机突变文库.利用自主构建的RNA聚合酶I eGFP报告系统,构建N9-3'UTR-eGFP-5'UTR RNA聚合酶I随机突变荧光报告文库.从N9-UTR突变荧光报告文库中随机挑选克隆转染H1N1流感病毒辅助感染的MDCK细胞,荧光显微镜观察eGFP的荧光表达,同时用多功能酶标仪定量检测eGFP的相对荧光强度;利用β-actin作为内参,采用实时荧光RT-PCR定量检测eGFP基因的转录变化.测序鉴定eGFP上调或下调的N9-UTR克隆并分析导致eGFP表达变化的UTR可变区SNP特征.结果随机筛选了6个N9-UTR可变区随机突变荧光报告克隆,发现N9-2克隆的eGFP下调,而N9-7克隆eGFP上调.测序分析发现突变核苷酸位点位于5'UTR的27位,eGFP上调表现为A27G.结论H7N9流感病毒NA基因的5'UTR可变区A27G突变可增强NA基因转录与翻译.; 唐秀娟王昕彭博武伟华刘慧孙颖房师松; 关键词：EGFP

深圳市H5N6、H7N9流感病毒HA-UTR基因分子特征分析: 2017年; 目的了解深圳市H5N6、H7 N9流感病毒HA基因非翻译区（Untranslated region,UTR）的分子特征.方法使用MEGA7.0、DNAStar7.1.0等生物信息学分析软件对全球及深圳H5N6、H7N9流感病毒HA基因的UTR进行核苷酸序列同源性分析及基因多态性分析.结果 3株2014-2015年深圳市H5N6病毒与其他H5NX病毒株比较,HA-3＇UTR核苷酸同源性为77.4％-100％,H5N6-HA-3＇UTR未见明显突变位点;HA-5＇UTR核苷酸同源性为91.7％ - 100％,H5N6-HA-5＇UTR第24、31位发生突变.11株2013-2014年深圳市H7N9病毒与其他H7NX病毒株比较,HA-5＇UTR核苷酸同源性为81.2％ -100％,H7N9-HA-5＇UTR在第2-6、9、10、12及15 - 17位发生多位点突变.结论深圳市人感染H5N6及H7N9病毒HA的UTR保守区高度同源性及其可变区具有基因多态性.; 陈燕慈王昕彭博武伟华刘慧耿艺介郑青房师松; 关键词：血凝素非翻译区同源性

两种不同水域中藁杆双脐螺的生长状况及生态学研究: 2018年; 目的研究对比两种不同水域中,藁杆双脐螺的生长状况及其生态学特征。方法选择代表水域,采集螺体进行形态学鉴定;同时采集水样标本,进行实验室检测,分析氨氮、硝氮,以及几种重金属含量。结果水质较差处的螺体平均直径和壳高均大于水质较好处,且水质较差处发现两种形态的螺体;两处水样检测结果表明,水质差组中的氮含量及Mn、Fe元素均高于水质良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论藁杆双脐螺生存适应能力强,在两种不同水域均能生长,且在水质较差处生长更优。; 武伟华张仁利高世同彭博黄达娜房师松刘慧; 关键词：生态学研究

2016年4月-2022年3月深圳市和济南市流感病原学监测及流行特征被引量：1: 2023年; 目的分析在新型冠状病毒肺炎流行背景下,2016年4月-2022年3月国内深圳市和济南市流感流行特点,了解我国南北方地区流感流行差异。方法使用深圳市和济南市国家级哨点医院2016-2022监测年度流感样病例(ILI)和流感病原学监测资料,分析流感流行特征和趋势。结果 2016-2022监测年度深圳市和济南市国家级哨点医院的门急诊病例中流感样病例百分比(ILI%)分别为2.25%、3.45%。两地区ILI%最高的年份均为2021-2022监测年度。ILl年龄构成均以0~4岁为主(分别占40%、46%)。按月分析两地区流感病毒分离阳性率与ILI%变化的相关性,两者趋势均存在正相关(r=0.238,P<0.05;r=0.425,P<0.001)。两地区不同监测年度流感优势毒株型别均不相同,呈交替变化,但每年流行的型别及高峰期的优势毒株型别基本一致。结论 2020—2021监测年度即新型冠状病毒肺炎流行初期,深圳市和济南市流感活跃程度明显低于往年平均水平且流行毒株型别单一,其余监测年度基本符合我国南、北方地区流感流行特征。; 丁小满刘慧亓娜王昕武伟华孙颖吕燕赵怀龙赵红赵红赵红房师松焦海涛; 关键词：流感病毒流感样病例病毒亚型

深圳市H7N9禽流感病毒神经氨酸酶基因演化分析: 2016年; 目的掌握深圳市从禽类市场外环境及人感病例中分离到的H7N9禽流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的演化,以及病毒对神经氨酸酶抑制剂(NAI)的耐药情况,为人感染H7N9病例的临床救治方案提供参考。方法将深圳市11份人感染H7N9禽流感病例鼻咽拭子标本以及3份活禽市场的环境拭子样本,经分离培养后对其NA片段进行全长测序。并选取国内外的H7N9病毒株序列作为参考,运用Mega软件进行种系发生树的构建、耐药相关位点及糖基化位点的分析。结果对NA片段的序列分析发现,所有深圳株NA基因的蛋白抗原位点和糖基化位点都相对保守,并且未出现R294K耐药位点。但发现三株未出现H7N9特征性蛋白柄部氨基酸的缺失株。结论深圳市分离到的H7N9病毒株与中国其它省份的流行株高度同源,对NAI仍然敏感。蛋白柄部氨基酸变异提示还需要对其进行进一步的研究和监测。; 吕星房师松王昕彭博武伟华刘慧; 关键词：神经氨酸酶耐药

稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白的Hela细胞株的建立被引量：1: 2016年; 目的构建稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白的Hela细胞株,为抗病毒药物筛选提供细胞模型。方法利用基因重组技术构建四种重组真核表达载体pc DNA3.1/Zeo-PB1、pc DNA3.1/Hygro-PB2、pc DNA3.1/Neo-PA、p EF6/V5-His A-NP,进行PCR和DNA测序鉴定;使用Hela细胞依次进行四种抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin(G418)、Blasticidin S HCl最小致死浓度实验,获得其最佳筛选浓度;利用Lipofectamine 2000将四种重组真核表达载体依次转染Hela细胞,并添加相应抗生素筛选稳定表达核糖核蛋白细胞株;RT-PCR以及POL I系统鉴定Hela细胞株是否稳定表达H1N1流感病毒核糖核蛋白。结果 RT-PCR初步鉴定流感病毒核糖核蛋白基因片段稳定整合在宿主基因组中,POL I系统证实核糖核蛋白在Hela细胞中已经获得了功能性表达。结论成功构建了Hela-核糖核蛋白细胞株,为以流感病毒RNA聚合酶复合体为靶点的抗流感病毒药物的研究提供了细胞模型。; 丁小满王昕俞若曦彭博武伟华刘慧耿一介董方圆俞慕华房师松; 关键词：HELA细胞甲型流感病毒核糖核蛋白细胞模型

流感病毒两种反向遗传学操作系统的初步构建被引量：2: 2015年; 目的构建依赖辅助病毒和宿主细胞内合成病毒核糖核蛋白复合体(vRNPs)的反向遗传学系统,利用上述两系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)。方法将EGFP cDNA精确插入人RNA聚合酶I启动子和小鼠终止子序列之间,构建RNA POLI系统,此系统被克隆入pBluescript II sk(+),获得重组质粒pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh;基于辅助病毒H1N1,pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh转染MDCK细胞,观察荧光。来源于甲型流感病毒H1N1分离株A/Puerto Rico/8/34的PB2、PB1、PA、NP 4个基因片段cDNA克隆入载体pcDNA3.1(+),获得pcDNA3.1-PB2、pcDNA3.1-PB1、pcDNA3.1-PA、pcDNA3.1-NP,将pBluescript II sk(+)-tI-EGFP-PIh与4个表达质粒共转染293T细胞,观察荧光。结果所构建的载体均经菌液PCR及测序验证正确;两种转染体系均可观察到绿色荧光。结论所构建的依赖辅助病毒和宿主细胞内合成vRNPs的反向遗传学系统均可使绿色荧光蛋白表达。; 连孟洋王昕彭博武伟华刘慧董方圆丁小满房师松郑青; 关键词：反向遗传学绿色荧光蛋白转染

2015—2019年深圳市禽流感外环境病原学监测分析被引量：7: 2019年; 目的了解深圳市2015—2019年禽流感病毒在外环境中的病原学构成及流行特征.方法对深圳市2015—2019年禽流感外环境样本利用实时荧光RT-PCR方法进行禽流感病毒(FluA)核酸检测,其中阳性样本再进一步做H5、H7、H9亚型鉴定.另外,将数据建库并进行统计分析.结果 2015年12月至2019年5月共采集外环境样品4674份,Flu A阳性样本2243份,其阳性率为48.0%,其中H5、H7、H9阳性样本分别为673份、283份、799份,阳性率分别为14.4%、6.1%、17.1%),另外,H5和H9亚型混合感染367份,阳性率7.9%,FluA阳性未分型121份,约占2.6%.结论目前深圳市禽流感外环境主要以H5和H9亚型禽流感病毒污染为主.H5和H9亚型禽流感病毒的混合存在,为禽流感病毒的基因重配提供了可能,需要进行持续监测.; 武伟华王昕孙颖刘慧彭博房师松; 关键词：禽流感病毒核酸检测

刘慧

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