张亚平
- 作品数：6 被引量：13H指数：1
- 供职机构：新乡医学院生命科学技术学院更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 含PR结构域的锌指蛋白5特异性小干扰RNA载体构建及干扰效果评价
- 2016年
- 目的构建含PR结构域的锌指蛋白5(PRDM5)特异性小干扰RNA(siRNA)干扰载体并鉴定其干扰效果。方法根据小鼠PRDM5基因全长c DNA序列,设计合成6条siRNA干扰片段(si PRDM5-1、si PRDM5-2、si PRDM5-3、si PRDM5-4、si PRDM5-5和si PRDM5-6)和2条对照序列(si CTL-1和si CTL-2),并将前3条干扰片断和si CTL-1克隆插入p Silencer3.1-U6,另3条干扰片断和si CTL-2插入p Silencer4.1-CMV干扰载体中,构建小鼠PRDM5基因的siRNA真核表达载体si PRDM5-1、si PRDM5-2、si PRDM5-3、si PRDM5-4、si PRDM5-5和si PRDM5-6,2个对照序列si CTL-1和si CTL-2,并通过双酶切和测序进行验证,构建成功后转染小鼠黑色素瘤细胞B16F10并采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测其干扰效率。结果成功构建真核siRNA表达载体,并且所构建的6个干扰载体均可降低小鼠黑色素瘤细胞中PRDM5基因mRNA表达(P<0.05)。其中si PRDM5-2和si PRDM5-6载体干扰效果最好。结论成功筛选出PRDM5特异性siRNA载体,为之后研究锌指蛋白基因PRDM5在小鼠黑色素瘤转移过程中功能及分子机制打下基础。
- 丁琼琼张彬彬张亚平杨海杰王磊冯志伟
- microRNAs在恶性黑色素瘤B16F0和B16F10细胞中的差异表达被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨及分析黑色素瘤细胞B16F0和B16F10中microRNAs(miRNAs)表达差异性,筛选与恶性黑色素瘤增殖、迁移和侵袭相关的miRNAs。方法:通过体内和体外实验分别验证B16F0和B16F10细胞的差异,并通过Ribo Array TMmi DETECTTMMouse Array分析小鼠黑色素瘤B16F0和B16F10细胞中miRNAs表达的差异性,筛选出与恶性黑色素瘤相关的miRNAs,并应用real-time PCR验证筛选结果的可信性。结果:B16F10细胞比B16F0具有更强的迁移和增殖能力,芯片结果显示,与黑色素瘤B16F0细胞相比,在B16F10细胞中有38个miRNAs存在表达差异,其中15个miRNAs表达上调,23个miRNAs表达下调,差异均具有统计学意义。Real-time PCR对部分miRNAs进行验证,结果与芯片分析一致,其中miR-26a-1-3p、miR-28b、miR-29b-3p、miR-24-2-5p表达显著上调,而miR-763、miR-431-5p、miR-205-5p、let-7c-2-3p表达显著下调。结论:差异表达的miRNAs与恶性黑色素瘤的发生、发展可能存在密切相关,可能为恶性黑色素瘤的早期诊断及治疗提供有力的靶向依据。
- 张彬彬张亚平丁琼琼杨海杰马建冯志伟王磊
- 关键词：恶性黑色素瘤MICRORNAS表达谱REAL-TIMEPCR
- 蛋白激酶CβⅡ负调控小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
- 2015年
- 目的观察蛋白激酶C(PKC)各亚型在小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的作用。方法Western blot检测小鼠BMSCs成骨分化中PKC各亚型的活化情况;利用PKC阻断剂GFX分析PKC在BMSCs体外成骨分化中的作用;碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测成骨早期分化指标ALP的活性;茜素红染色检测BMSCs体外矿化能力;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测成骨分化相关基因Runx2、Ⅰ型骨胶原a1(ColⅠa1)和ALP的表达情况。结果小鼠BMSCs成骨分化过程中,仅检测到PKCβⅡ亚型活化,其他亚型均无明显活化。利用PKC阻断剂GFX抑制PKCβⅡ活化后,茜素红染色结果显示BMSCs的成骨分化过程受到促进;PCR结果显示成骨分化相关基因Runx2、ColⅠa1和ALP的mRNA水平均有不同程度增加;ALP活性检测结果也显示BMSCs的成骨分化过程受到促进。结论PKCβⅡ可负调控小鼠BMSCs的成骨分化。
- 崔阳阳杨海杰刘世饶张亚平马双平丰慧根
- 关键词：蛋白激酶C骨髓间充质干细胞成骨分化碱性磷酸酶
- 齐墩果酸对IL-1β诱导的SW982细胞炎症反应的抑制作用被引量：11
- 2016年
- 在SW982细胞中,研究齐墩果酸对白细胞介素(interleukin,IL)-1β刺激的炎症因子表达的作用,并探讨其抗炎作用机制。采用MTT的方法检测齐墩果酸对SW982细胞的毒性作用;酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和实时荧光定量PCR(real-time PCR)实验在蛋白及m RNA水平上检测不同浓度的齐墩果酸(5、10、20μmol·L^(-1))对IL-1β刺激炎症因子IL-6、IL-8和基质金属蛋白酶-1(matrix metallopeptidase-1,MMP-1)表达水平的影响;免疫印迹实验分析齐墩果酸对丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)、磷脂酰肌醇(-3)激酶/Akt(phosphatidylinositol-3-kinase/Akt,PI3K/Akt)和核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果显示,不同浓度的齐墩果酸(≤40μmol·L^(-1))对SW982细胞几乎无毒性;对IL-6、IL-8和MMP-1等炎症因子的表达有明显的抑制作用;能明显地抑制细胞外信号调节激酶(extracellular signal-related kinase,ERK)、p38、c-jun N末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)和Akt蛋白的磷酸化,并且抑制IκB-α蛋白的降解。齐墩果酸可能是通过MAPK、PI3K/Akt和NF-κB信号通路而抑制IL-1β刺激的炎症因子的表达。
- 连俊江程彬峰高尧鑫张亚平马双平张彬彬郭丹丹薛寒冯志伟
- 关键词：齐墩果酸抗炎作用信号通路炎症因子
- 含MYND结构域的锌指蛋白10的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2015年
- 目的表达纯化含MYND结构域的锌指蛋白10(ZMYND10)的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体。方法全基因合成ZMYND10基因的开放阅读框,构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10。在大肠杆菌中诱导表达HisZMYND10,利用His标签镍柱纯化His-ZMYND10重组蛋白,并用泛素样蛋白酶1除去重组蛋白的His标签。用纯化蛋白免疫大鼠,蛋白A/G混合琼脂糖纯化血清得到抗体。通过Western blot和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性。结果成功构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10,并获得可溶性表达。利用His柱得到高纯度的重组ZMYND10抗原,免疫大鼠后纯化得到的ZMYND10多克隆抗体可以检测到B16F10细胞中过表达及内源性表达的ZMYND10蛋白,并可用于免疫沉淀实验。结论本实验成功制备了ZMYND10的多克隆抗体,为后续探索ZMYND10在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。
- 王磊张亚平杨海杰谢云飞丁琼琼张彬彬冯志伟
- 关键词：多克隆抗体纯化
- 一种新的人Beclin1转录本的克隆、原核表达和纯化
- 2017年
- 目的克隆新的人Beclin1转录本DEL-E8-E10并对其所编码的蛋白质进行表达和纯化。方法以SiHa细胞的cDNA作为模板进行聚合酶链式反应(PCR)扩增DEL-E8-E10基因,构建原核表达载体pET32a-DEL-E8-E10。在大肠杆菌中诱导表达His-DEL-E8-E10融合蛋白,利用镍柱亲和层析纯化His-DEL-E8-E10融合蛋白。结果克隆到DEL-E8-E10基因,成功构建原核表达载体pET32a-DEL-E8-E10,并获得可溶性表达。利用镍柱亲和层析纯化HisDEL-E8-E10融合蛋白。结论纯化出His-DEL-E8-E10融合蛋白,为进一步研究新的转录本DEL-E8-E10编码蛋白质与宫颈癌之间的关系提供了实验基础。
- 杨秀林张亚平何全中谢云飞潘莹
- 关键词：转录本纯化
