丁琼琼
- 作品数：5 被引量：6H指数：1
- 供职机构：新乡医学院生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- microRNAs在恶性黑色素瘤B16F0和B16F10细胞中的差异表达被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨及分析黑色素瘤细胞B16F0和B16F10中microRNAs(miRNAs)表达差异性,筛选与恶性黑色素瘤增殖、迁移和侵袭相关的miRNAs。方法:通过体内和体外实验分别验证B16F0和B16F10细胞的差异,并通过Ribo Array TMmi DETECTTMMouse Array分析小鼠黑色素瘤B16F0和B16F10细胞中miRNAs表达的差异性,筛选出与恶性黑色素瘤相关的miRNAs,并应用real-time PCR验证筛选结果的可信性。结果:B16F10细胞比B16F0具有更强的迁移和增殖能力,芯片结果显示,与黑色素瘤B16F0细胞相比,在B16F10细胞中有38个miRNAs存在表达差异,其中15个miRNAs表达上调,23个miRNAs表达下调,差异均具有统计学意义。Real-time PCR对部分miRNAs进行验证,结果与芯片分析一致,其中miR-26a-1-3p、miR-28b、miR-29b-3p、miR-24-2-5p表达显著上调,而miR-763、miR-431-5p、miR-205-5p、let-7c-2-3p表达显著下调。结论:差异表达的miRNAs与恶性黑色素瘤的发生、发展可能存在密切相关,可能为恶性黑色素瘤的早期诊断及治疗提供有力的靶向依据。
- 张彬彬张亚平丁琼琼杨海杰马建冯志伟王磊
- 关键词：恶性黑色素瘤MICRORNAS表达谱REAL-TIMEPCR
- 含MYND结构域的锌指蛋白10的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：1
- 2015年
- 目的表达纯化含MYND结构域的锌指蛋白10(ZMYND10)的重组蛋白并制备其大鼠多克隆抗体。方法全基因合成ZMYND10基因的开放阅读框,构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10。在大肠杆菌中诱导表达HisZMYND10,利用His标签镍柱纯化His-ZMYND10重组蛋白,并用泛素样蛋白酶1除去重组蛋白的His标签。用纯化蛋白免疫大鼠,蛋白A/G混合琼脂糖纯化血清得到抗体。通过Western blot和免疫沉淀方法鉴定抗体的特异性。结果成功构建原核表达载体p ET-28m-ZMYND10,并获得可溶性表达。利用His柱得到高纯度的重组ZMYND10抗原,免疫大鼠后纯化得到的ZMYND10多克隆抗体可以检测到B16F10细胞中过表达及内源性表达的ZMYND10蛋白,并可用于免疫沉淀实验。结论本实验成功制备了ZMYND10的多克隆抗体,为后续探索ZMYND10在肿瘤细胞中的功能奠定了基础。
- 王磊张亚平杨海杰谢云飞丁琼琼张彬彬冯志伟
- 关键词：多克隆抗体纯化
- 锌指蛋白PRDM5在黑色素瘤细胞增殖和转移中的作用及分子机制
- 恶性黑色素瘤多发于皮肤，转移性很高，是人类皮肤癌中致死率最高的肿瘤，严重威胁人类健康，因此进一步研究黑色素瘤转移的分子机制，寻找新的分子治疗靶点，对于提高黑色素瘤的治疗效率有重要意义。PR区域蛋白家族(PRDI-BF1a...
- 丁琼琼
- 关键词：黑色素瘤细胞增殖分子机制
- 神经细胞黏附分子对小鼠骨髓间充质干细胞黏附、迁移及细胞形态的影响被引量：4
- 2017年
- 目的探讨神经细胞黏附分子(NCAM)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)黏附、迁移及细胞形态的影响。方法从野生型小鼠和NCAM基因敲除小鼠中分离、培养BMSCs,Western blot和免疫荧光标记检测NCAM的表达;划痕实验和黏附实验分别检测细胞迁移和黏附能力;倒置显微镜下观察细胞形态;Western blot检测β1整联蛋白、E-cadherin、β-catenin和N-cadherin的表达。结果 NCAM基因敲除后细胞的迁移能力和黏附能力明显降低,β1整联蛋白的表达下调(P<0.01),BMSCs形态由不规则形变为扁平形,且成簇增殖,上皮细胞标记蛋白E-cadherin和β-catenin的表达显著上调(P<0.05),而间质细胞标记蛋白N-cadherin的表达下调(P<0.01)。结论NCAM通过调控β1整联蛋白的表达影响BMSCs的黏附和迁移,同时NCAM可能对BMSCs的间质上皮转化起负调控作用。
- 毕佳佳王磊李静丁琼琼冯志伟
- 关键词：神经细胞黏附分子骨髓间充质干细胞迁移
- 含PR结构域的锌指蛋白5特异性小干扰RNA载体构建及干扰效果评价
- 2016年
- 目的构建含PR结构域的锌指蛋白5(PRDM5)特异性小干扰RNA(siRNA)干扰载体并鉴定其干扰效果。方法根据小鼠PRDM5基因全长c DNA序列,设计合成6条siRNA干扰片段(si PRDM5-1、si PRDM5-2、si PRDM5-3、si PRDM5-4、si PRDM5-5和si PRDM5-6)和2条对照序列(si CTL-1和si CTL-2),并将前3条干扰片断和si CTL-1克隆插入p Silencer3.1-U6,另3条干扰片断和si CTL-2插入p Silencer4.1-CMV干扰载体中,构建小鼠PRDM5基因的siRNA真核表达载体si PRDM5-1、si PRDM5-2、si PRDM5-3、si PRDM5-4、si PRDM5-5和si PRDM5-6,2个对照序列si CTL-1和si CTL-2,并通过双酶切和测序进行验证,构建成功后转染小鼠黑色素瘤细胞B16F10并采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测其干扰效率。结果成功构建真核siRNA表达载体,并且所构建的6个干扰载体均可降低小鼠黑色素瘤细胞中PRDM5基因mRNA表达(P<0.05)。其中si PRDM5-2和si PRDM5-6载体干扰效果最好。结论成功筛选出PRDM5特异性siRNA载体,为之后研究锌指蛋白基因PRDM5在小鼠黑色素瘤转移过程中功能及分子机制打下基础。
- 丁琼琼张彬彬张亚平杨海杰王磊冯志伟
