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许珊珊
作品数:
3
被引量:1
H指数:1
供职机构:
北京民海生物科技有限公司
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发文基金:
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
宋琳琳
北京民海生物科技有限公司
魏文进
北京民海生物科技有限公司
顾美荣
天津科技大学生物工程学院
刘建凯
北京民海生物科技有限公司
张现臣
北京民海生物科技有限公司
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宋琳琳
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2016
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肠道病毒71型病毒样颗粒在汉逊酵母中的表达
被引量:1
2013年
目的应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型(EV71)病毒样颗粒(VLP)的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上,获得重组表达质粒PMV.P1-3CD,转化汉逊酵母宿主菌AU0501,PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1%甲醇的培养基中进行诱导表达,对表达产物进行SDS.PAGE、Western blot检测。挑选优胜表达菌株进行30L发酵罐发酵培养,发酵产物经过粗略纯化后进行电镜分析。结果筛选获得EV71重组表达菌株;SDS-PAGE检测结果显示在相对分子质量(M,)为26×10^3、33×10^3、35×10^3处有明显的VP3、VP1、VP0蛋白条带,M大小与预期的目的蛋白大小一致;Western blot检测结果显示表达产物与EV71-VP1单克隆抗体在犯为33×10^3处有较为明显的VPl反应条带,表达产物具有良好的免疫反应性;表达菌株发酵表达量可达200mg/L,电镜分析可见24~30nin的VLP,且颗粒结构完好。结论应用汉逊酵母表达系统成功表达了EV71VLP,为今后研制EV71VLP疫苗奠定基础。
顾美荣
宋琳琳
许珊珊
付作申
林福玉
张现臣
魏文进
贾士儒
关键词:
肠道病毒71型
汉逊酵母
病毒样颗粒
一种EV71病毒样颗粒及其制备方法与应用
本发明提供了一种EV71病毒样颗粒及其制备方法与应用。通过将EV71病毒的P1蛋白基因和3CD蛋白酶基因与PMV质粒连接后构建PMV-P1-3CD重组表达质粒,然后转入汉逊酵母AU-0501表达菌株,得到AU-PMV-P...
顾美荣
魏文进
刘建凯
宋琳琳
许珊珊
文献传递
一种EV71病毒样颗粒及其制备方法与应用
本发明提供了一种EV71病毒样颗粒及其制备方法与应用。通过将EV71病毒的P1蛋白基因和3CD蛋白酶基因与PMV质粒连接后构建PMV-P1-3CD重组表达质粒,然后转入汉逊酵母AU-0501表达菌株,得到AU-PMV-P...
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