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14型蓝舌病病毒VP7蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：3: 2020年; 为建立蓝舌病(bluetongue,BT)的血清学诊断方法,本研究通过得到14型蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)的s7基因,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,原核表达得到VP7蛋白,并对表达的包涵体VP7蛋白进行纯化,Western blot分析表明,纯化的VP7蛋白具有良好的抗原性。以纯化的VP7蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。该方法与羊痘阳性血清,羊口蹄疫阳性血清和羊的小反刍兽疫阳性血清均无交叉反应,与中和试验比较,两者符合率为90%,ELISA批内和批间重复性试验显示,D值的变异系数小于10%。说明本方法具有良好的特异性和重复性。本研究在国内首次建立了14型BTV抗体间接ELISA方法,可用于BTV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测,为以后相关BTV ELISA检测试剂盒研发提供技术平台。; 孙雯张莹辉曹雨朱真杜吉革李启红陈小云姚文生钱莺娟印春生; 关键词：蓝舌病病毒 VP7蛋白原核表达间接ELISA

一种无毒性气肿疽梭菌基因工程亚单位疫苗用菌种及其应用: 本发明涉及一种无毒性气肿疽梭菌基因工程亚单位疫苗及其应用，本发明制备的无毒性气肿疽梭菌基因工程亚单位疫苗用菌种，系重组表达经过密码子优化的气肿疽梭菌鞭毛蛋白和细胞毒素A重组融合蛋白的大肠杆菌，用该菌种生产的气肿疽梭菌基因...; 杜吉革陈小云刘莹彭小兵薛麒朱真李启红印春生姚文生康凯; 文献传递

产气荚膜梭菌α毒素突变体的表达及免疫保护力评价被引量：7: 2019年; 对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56和130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变,经人工合成获得基因片段Gcpam4。将Gcpam4克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rCPAm4。利用Western blot方法检测rCPAm4与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清的反应性,并采用小鼠检测纯化蛋白的毒力。随后,将rCPAm4与Montanide ISA 201佐剂以1∶1的比例混合乳化制备疫苗,免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。二免后21d,对家兔通过耳缘静脉注射1个家兔MLD剂量的A型产气荚膜梭菌毒素,以检测rCPAm4对家兔的免疫保护效果。结果表明,rCPAm4主要以包涵体的形式表达,且能与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清反应;小鼠安全性试验显示,5.5mg/kg剂量的rCPAm4对小鼠仍无致死性;免疫rCPAm4后,每毫升的一免抗血清可中和10～20个小鼠MLD、二免抗血清可中和30～50个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔100%死亡,免疫组家兔得到了100%的保护。以上结果表明,rCPAm4具有良好的安全性和免疫原性,从而为A型产气荚膜梭菌基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。; 杜吉革薛麒朱真李启红印春生姚文生康凯陈小云; 关键词：突变毒力抗原性

改良Frey氏液体培养基质控菌株菌种代次与生长曲线研究: 2016年; 为探究改良Frey氏液体培养基质控菌CVCC2960滑液支原体（以下简称MS）生长规律，本试验首次同时采用CFU计数、CCU测定和pH值测定的方法，比较不同接种浓度、接种体积和不同代次MS生长情况。结果显示：5％与10％接种量的CCU测定结果峰值差异不明显，但5％接种的CFU计数峰值更高，pH下降更慢；1～5代菌在生长曲线各阶段的测定结果均无明显差别；3种不同接种方式的测定结果显示，用0．5mL菌液接种9．5mL培养基的方式更利于MS生长。本试验为改良Frey氏液体培养基的质控标准化提供依据。; 朱真万建青杨挺英康凯; 关键词：滑液支原体传代

羊传染性脓疱病毒TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7: 2020年; 为建立快速、灵敏的羊传染性脓疱病毒(ORFV)检测方法,本研究利用新一代的TaqMan MGB探针技术,根据ORFV编码F1L蛋白的059基因保守序列设计了1对引物和1条探针,建立了基于羊传染性脓疱病毒059基因的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,对该法进行灵敏性、重复性、特异性分析,检测了14份临床样品。结果显示,所建立的方法标准曲线斜率为-3.36,截距为38.36,相关性系数(R2)为0.995,灵敏性在3.2~32 copies/μL之间,组内与组间重复的变异系数均小于1.65%,与常见羊病的病原体无交叉反应,表明所建立的基于ORFV 059基因的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法适用于羊传染性脓疱病毒的快速检测。; 陈勇李倩琳杜吉革李启红印春生陈小云朱真; 关键词：羊传染性脓疱病毒实时荧光定量PCR

产气荚膜梭菌ε毒素研究进展被引量：3: 2021年; 产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患细菌性传染病病原,在自然界中分布极广,一定条件下可引起多种疾病。该菌常通过其外毒素危害人和动物机体,所产毒素主要有α、β、ε和ι4种外毒素。根据毒素产生的情况,将产气荚膜梭菌分为A、B、C、D、E、F和G 7个型。ε毒素毒力最强,主要由B型和D型菌分泌。论文通过致病机理、病理变化、流行特点及相关疫苗研究方面对产气荚膜梭菌ε毒素研究进展进行综述,以期为产气荚膜梭菌病的防控提供参考。; 朱真郭鑫杜吉革李启红黄小洁李倩琳印春生陈小云; 关键词：产气荚膜梭菌致病特点

一种无毒C型肉毒梭菌基因工程亚单位疫苗及其生产方法: 本发明涉及一种无毒C型肉毒梭菌基因工程亚单位疫苗及其生产方法，本发明制备的无毒性C型肉毒梭菌亚单位疫苗，系采用经过密码子优化、含有麦芽糖蛋白(MBP)标签的肉毒梭菌毒素(BoNTs)重链的无毒区域H<Sub>C</Sub...; 陈小云薛麒刘莹李旭妮杜吉革李启红朱真张莹辉印春生姚文生; 文献传递

一种腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗及其生产方法: 本发明涉及一种腐败梭菌α毒素重组亚单位疫苗及其生产方法。本发明将野生型腐败梭菌α毒素成熟毒素的第54位半胱氨酸突变为亮氨酸，第264位天冬酰胺突变为丙氨酸，第269位组氨酸突变为丙氨酸，第310位色氨酸突变为丙氨酸，获得...; 陈小云杜吉革薛麒朱真王磊印春生李启红康凯姚文生

一种腐败梭菌α毒素基因工程疫苗及其生产方法: 本发明专利制备的腐败梭菌CSA基因工程疫苗，系采用经过密码子优化的，在含有4个氨基酸突变(C54L，N264A，H269A和W310A)的基础上缺失了11个氨基酸(第212位～第222位)的重组腐败梭菌CSA(rCSA<...; 杜吉革陈小云薛麒朱真李启红印春生康凯姚文生; 文献传递

腐败梭菌α毒素重组突变体的免疫保护力评价被引量：3: 2018年; 本研究旨在获得腐败梭菌OL毒素（CSa）的重组突变体，并评价该重组毒素的毒力及免疫原性。对已知的腐败梭菌OL毒素编码基因进行优化设计，同时引入包括第86位半胱氨酸突变为亮氨酸及第296位的天冬氨酸、第301位的组氨酸和第342位的色氨酸突变为丙氨酸的4个氨基酸突变，经人工合成获得基因片段Gcsam4。将Gcsam4克隆至原核表达载体pET-30（＋）中进行表达与纯化，获得重组蛋白rcsam4。利用Western—blot检测rcsam4与腐败梭菌α毒素抗血清的反应性，并采用Vero细胞和小鼠检测其毒性。随后，将rcsam4与Montanide ISA206佐剂以1：1（v／V）的比例混合乳化制备疫苗并免疫家兔，按照《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。二免后第21天对家兔通过耳缘静脉注射1个MLD剂量的腐败梭菌毒素，来检测rCSam4对家兔的免疫保护效果。结果表明。rcsam4主要以包涵体的形式存在，且能够与腐败梭菌抗血清反应。Vero细胞毒性试验显示，9．85μg／mL的蛋白仍无细胞毒性：小鼠安全性试验显示，5．5×10^3μg／kg的剂量对小鼠无致死性；免疫rcsam4后，每毫升的一免兔血清可中和50~70个小鼠MLD的腐败梭菌毒素；每毫升的二免兔血清可中和110～130个小鼠MLD的腐败梭菌毒素；1个家免MLD的腐败梭菌毒素攻毒后，对照组家兔全部死亡，免疫组家免得到了100％（4／4）的保护。以上结果表明，rcsam4在丧失毒性的同时还保留了良好的免疫原性,从而为腐败梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的试验数据。; 杜吉革薛麒朱真李启红印春生彭小兵姚文生康凯陈小云; 关键词：突变毒性抗原性

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朱真

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