马少丹
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 可活化细胞穿膜肽-聚N-（2-羟丙基）甲基丙烯酰胺-Ad.mda-7.egfp接合物的合成及跨膜运输途径检测
- 2015年
- 目的：合成一种由可活化细胞穿膜肽（ACPP）、水溶性高分子聚合物聚N-（2-羟丙基）甲基丙烯酰胺（pHPMA）修饰腺病毒的接合物，并初步探索该接合物的跨膜运输途径。方法通过化学合成的方法合成ACPP。将肺腺癌细胞株A549、乳腺癌细胞株MDA-MB-231、肺支气管上皮细胞株HBE和肝癌细胞株HepG2均分为两组，分别加入培养基及终浓度为10 mg/L基质金属蛋白酶抑制剂强力霉素，12 h后加入ACPP，通过荧光显微镜观察并鉴定ACPP对各细胞的穿膜活性。通过化学修饰法合成接合物pc-Ad. mda-7.egfp及ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp，通过荧光显微镜观察并初步鉴定接合物的合成和对A549细胞的穿膜活性。应用流氏细胞术检测接合物感染A549细胞的能力。通过荧光显微镜观察并鉴定接合物ACPP-pc-Ad. mda-7. Egfp在A549细胞内定位及穿膜活性。结果合成了ACPP 100 mg。ACPP对A549、MDA-MB-231、HepG2细胞株具有靶向性穿膜活性，而HBE细胞内未见绿色荧光，强力霉素组细胞经过强力霉素作用后与ACPP-FITC孵育，4种细胞内均未见明显绿色荧光反应，强力霉素阻断了ACPP的肿瘤选择性穿膜作用。合成了两种接合物pc-Ad.mda-7.egfp（粒径420.6 nm）及ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp（粒径462.2 nm）。将ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp、pc-Ad.mda-7.egfp接合物、Ad.mda-7.egfp与A549细胞共培养后，可见空白对照组（培养基）无绿色荧光蛋白表达，pc-Ad.mda-7.egfp接合物仅见微量绿色荧光蛋白表达，ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp、Ad.mda-7.egfp组所有细胞均可见强烈绿色荧光蛋白表达。经流氏细胞仪检测，ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp组A549细胞PI荧光值明显高于pc-Ad.mda-7. egfp组。经荧光显微镜观察证实接合物ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp大量分布于A549细胞胞质，而pc-Ad. mda-7.egfp仅出现少量内吞性囊泡。结论成功合成了ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp接合物，并证实ACPP-pc-Ad.mda-7.egfp以非内吞途径进行跨膜运输。
- 李书华许泽鹏陈艺瑛陈婷婷刘谕昆李灏马少丹张雅洁
- 关键词：蛋白质转运
- 肿瘤靶向细胞穿膜肽的设计合成及活性检测被引量：1
- 2016年
- 目的合成一种可活化细胞穿膜肽(ACPPs)并初步探索其穿膜活性及亚细胞分布。方法应用化学合成方法合成ACPPs,采用流式细胞仪检测ACPPs穿膜活性,免疫荧光法及全波长酶标仪检测表达ACPPs的肿瘤靶向性穿膜作用,用荧光显微镜观察ACPPs在细胞内的定位及ACPPs-pc-Ad.egfp复合物的亚细胞分布。结果成功合成了ACPPs,ACPPs-异硫氰酸荧光素(FITC)组较牛血清清蛋白-FITC组荧光量大,差异有统计学意义(F=4 656.600,P=0.000),ACPPs具有肿瘤靶向性穿膜活性,人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞SW480、人卵巢癌细胞OVCAR3细胞质内荧光量较人支气管上皮细胞HBE大,差异有统计学意义(F=37 947.676,P=0.000);ACPPs定位于细胞质并介导ACPPs-pc-Ad.egfp复合物分布于细胞质。结论成功合成了ACPPs,ACPPs具有肿瘤靶向性穿膜活性并分布于细胞质。
- 马少丹曾跃彬薛艺抒袁秋儿严艳花邝慧娴陈婷婷陈艺瑛杜宝玲
- 关键词：大分子物质靶向
