韩静芳
- 作品数：29 被引量：114H指数：7
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- 发文基金：国家科技基础条件平台建设计划上海市科技兴农重点攻关项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 柔嫩艾美耳球虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及应用
- 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)蛋白质二硫键异构酶基因EtPDI(克隆号：BW1-E06，Genbank登录号EF552214)，本发明将该基因连接到原核表达载体pGEX-4T-2，构建了原核表达重组...
- 黄兵韩红玉林矫矫赵其平董辉姜连连王鑫韩静芳张建哲卞庆松闫晓菲
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫早熟株选育及相关生物学特性研究
- ＜正＞鸡球虫病十分普遍,危害甚大,防治以药物为主。球虫抗药性的日趋严重,人们对药物残留问题的日益关注,促进了球虫病免疫预防的发展。球虫的早熟株选育是培育球虫疫苗株的一种常规方法,本文拟建立柔嫩艾美耳球虫（Eimeria ...
- 韩静芳黄兵董辉俞纯方韩红玉赵其平姜连连王鑫
- 文献传递
- 鸡球虫的分离与保存被引量：13
- 2006年
- 获得大量纯化的球虫卵囊是进行鸡球虫病的防治、球虫的生物学、免疫学等方面研究的前提。本文着重对鸡球虫的分类地位、卵囊的分离方法以及保存条件等方面进行介绍。
- 黄兵韩红玉董辉姜连连赵其平王鑫韩静芳
- 关键词：球虫生物学
- 伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用被引量：1
- 2009年
- 以伪狂犬病毒为载体表达其他病原体抗原蛋白是伪狂犬病疫苗研究的一个重要方向。根据已发表的伪狂犬病毒(PRV)Ra株TK基因序列设计2对引物,用PCR方法得到同源左右臂,克隆入PUC19载体中。利用平末端连接的方法将绿色荧光蛋白(EGFP)的基因表达盒插入到缺失位点,并在下游引入1个多克隆位点,构建缺失通用转移载体PUC19TK-EGFP。用脂质体转染试剂盒将PUC19TK-EGFP和PRV-Ra株的基因组共转染BHK细胞,以EGFP为标记基因,用噬斑法得到纯化的重组病毒,命名为TK/EGFP,为研制以伪狂犬病毒为载体的二价或多价基因工程疫苗奠定了物质基础。
- 韩静芳陈瑞爱邵定勇唐满华梁桂益
- 关键词：伪狂犬病毒TK基因通用转移载体
- 上海地区奶牛球虫种类的初步调查被引量：6
- 2010年
- 赵其平韩红玉王赞江董辉姜连连王鑫韩静芳黄兵袁耀明
- 关键词：球虫种类奶牛集约化饲养出血性肠炎艾美耳属球虫病
- 分子标记技术在寄生虫分类鉴定上的应用被引量：16
- 2006年
- 分子标记与形态标记、细胞学标记和生化标记3类遗传标记技术相比,具有直接以DNA的形式表现,在动物的任何生长阶段都可检测,遍布整个基因组,多态性高,检测手段简单迅速,无基因多效性,能够明确辨别等位基因,试验重复性好等优点。目前,在寄生虫分类鉴定上常用的分子标记技术有RFLP,PCR-RFLP,RAPD和AFLP。文章综述了4种分子标记技术的基本原理、主要优缺点以及在寄生虫分类鉴定中的应用情况。
- 陈俊锋俞纯方黄兵韩静芳
- 关键词：分子标记RFLPPCR-RFLPRAPDAFLP寄生虫
- 上海地区奶牛场球虫感染现状调查被引量：12
- 2007年
- 为了解上海地区规模化奶牛场奶牛感染球虫的情况，我们对上海地区17个牧场的奶牛球虫感染状况进行了随机抽样调查，分别于2005年10月和2006年4月按不同年龄阶段共采集粪样316份。调查结果显示：17个牧场都有球虫感染，1个牧场的感染率最高达70％，其中10月份调查的感染率为36．45％，4月份调查的感染率为40．05％，两者没有明显的差异；从不同年龄阶段奶牛的感染情况来看，发现感染率最高的2个阶段为0～2月龄和4～6月龄，感染率高达为45％，感染率最低的年龄阶段为12月龄以上的奶牛，感染率为25％；从感染强度来看，上海地区牧场奶牛的球虫感染强度大部分平均OPG低于1000，占58．82％，只有一个牧场的平均OPG比较高，为14250；从本次调查结果发现有6种艾美耳球虫（Eimeria），分别是牛艾美耳球虫（E．boris）、椭圆艾美耳球虫（E .ellipsoidallis）、邱氏艾美耳球虫（E.zurnii）、怀俄艾美耳球虫（E．wyomingensis）、柱状艾美耳球虫（E．cylindrica）、亚球形艾美耳球虫（E.subspherica），优势虫种为牛艾美耳球虫、邱氏艾美耳球虫、椭圆艾美耳球虫，其他3种球虫所占比例较少。
- 赵其平韩红玉王赞江董辉姜连连王鑫韩静芳黄兵袁耀明
- 关键词：奶牛
- 特异性引物PCR鉴定鸡球虫种类与卵囊纯度的研究被引量：2
- 2010年
- 为了建立鸡球虫种类的快速分子生物学鉴定方法,检测实验室保存虫株受污染状况,分别对单卵囊分离繁殖及实验室长期传代保存的6株巨型艾美耳球虫（EMSH01、EM4101、EMES01、EMBA01、EMTY01和EMTO01）、4株柔嫩艾美耳球虫（ETDS01、ETGD01、ETAD和ETAM）、1株堆形艾美耳球虫（EA1201）、1株变位艾美耳球虫（EMIS01）、1株毒害艾美耳球虫（ENGD01）收集卵囊,纯化、提取总DNA,根据巨型艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、堆形艾美耳球虫的RAPD和SCAR分子标记、ITS-1区序列分别设计Tn-F与Tn-R、Mx-F与Mx-R、Ac-F与Ac-R、ET-1与ET-2、EM-1与EM-2、EA-1与EA-2等6对特异性引物,对13个虫株分别进行PCR扩增,1%琼脂糖电泳分析片段大小.结果显示：用引物Tn-F与Tn-R、ET-1与ET-2对ETDS01、ETGD01、ETAD、ETAM、EMTO01扩增出特异性条带,其余4种8个虫株未见条带;用引物Mx-F与Mx-R、EM-1与EM-2对EMSH01、EM4101、EMES01、EMBA01、EMTY01和EMTO01扩增出特异性条带,其余4种7个虫株未见条带;用引物Ac-F与Ac-R、EA-1与EA-2对EA1201扩增出特异性条带,其余4种12个虫株未见条带.结果说明特异性引物PCR方法鉴定的5种球虫与原常规生物学方法鉴定的结果一致,检测出保存的巨型艾美耳球虫EMTO01虫株受柔嫩艾美耳球虫污染,其余虫株未发现交叉污染.研究证明利用特异性引物建立的PCR方法可用于鸡球虫种类与卵囊纯度的鉴定.
- 王鑫韩红玉黄兵姜连连赵其平董辉韩静芳
- 关键词：球虫艾美耳球虫特异性引物
- 鸡球虫18S rRNA基因序列的测定与分析被引量：7
- 2009年
- 为了利用18S rRNA基因进行鸡球虫系统进化分析,对巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)、柔嫩艾美耳球虫(E. tenella)、堆形艾美耳球虫(E.acervulina)3种共8个不同来源的虫株,分别提取总DNA进行18S rRNA基因的扩增和测序;将得到的序列登录GenBank进行同源性和趋异性分析,并结合GenBank中其它原虫的18S rRNA基因序列构建进化树。结果显示扩增获得8株鸡球虫18S rRNA基因长度为1 746～1 756 bp,序列比对显示同种不同株间的同源性大于不同种间的同源性,其中3株E.maxima株间同源性在98.7%～99.3%之间,4株E.tenella株间同源性在99.7%～99.9%之间;不同种间同源性为96.5%～98.1%,其中E.maxima与E.tenella的遗传距离最大,为0.038;E.maxima与E.acervulina的遗传距离最小,为0.021。顶复器门9个不同属所构建的进化树结果显示,E.imeria和等孢属(Isospora)聚为一支,说明亲缘关系比较近。与GenBank中其它5株不同鸡球虫的18S rRNA基因共同构建的进化树显示,3株E.maxima聚为一支,与E.brunetti、E.mitis、E.mivati、E.praecox和E. acervulina聚为一大分支;4株E.tenella与1株E.necatrix共同形成一个分支,说明E.tenella与E.necatrix的亲缘关系最近。本研究证实了在鸡球虫系统进化研究中,18S rRNA基因不仅可以区分不同种,而且有可能成为区分同种不同株的理想靶基因。
- 王鑫韩红玉姜连连赵其平董辉韩静芳黄兵
- 关键词：球虫艾美耳球虫RRNA系统进化
- 鸡艾美耳球虫单卵囊分离与种类鉴定被引量：14
- 2007年
- 为了建立鸡球虫纯株,选用1-5日龄雏鸡,采用琼脂块单卵囊分离法对实验室保存的6种11株鸡球虫进行纯化,并选用2周龄雏鸡,对每个虫种/株选取1个单卵囊分离物进行增殖和种类鉴定.结果单卵囊接种179只,获得单卵囊分离物42个,单卵囊分离成功率23.46%;对11个单卵囊分离物,通过测定寄生部位、潜在期、孢子化卵囊大小、形状指数（长/宽）、孢子囊大小、最短孢子化时间等指标,鉴定出1个分离物为堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）、2个分离物为柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）、6个分离物为巨型艾美耳球虫（E.maxima）、1个分离物为变位艾美耳球虫（E.mivati）、1个分离物为毒害艾美耳球虫（E.necatrix）.本研究表明琼脂块单卵囊分离法简便易行、成功率较高,同时提示实验室保存的布氏艾美耳球虫（E.brunetti）被柔嫩艾美耳球虫污染.
- 王鑫黄兵赵其平韩静芳韩红玉董辉姜连连
- 关键词：球虫艾美耳球虫单卵囊
