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鸡SP-A在293T细胞中的表达及免疫学检测: 2016年; 为表达鸡肺表面活性蛋白A(chicken palmonary surfactant protein A,c SP-A)基因,本研究扩增去除终止子的c SP-A,通过Nhe I和Apa I双酶切,连接进入真核表达载体pc DNA3.1/myc-His(-)A中,构建获得重组载体pc SP-A;同时,将c SP-A和gfp基因按Nhe I-Bam H I和Bam H I-Apa I分别连接至pc DNA3.1/myc-His(-)A载体中,构建获得融合表达载体pc SP-A-GFP。通过脂质体法将这两类真核载体瞬时转染293T细胞,48 h后用4%多聚甲醛固定细胞,利用c SP-A特异性鼠多抗进行间接免疫荧光,于倒置荧光显微镜下观察c SP-A表达和亚细胞定位情况,然后收获细胞进行Western blot检测。结果发现,c SP-A在细胞质中表达,pc SP-A和pc SP-A-GFP融合蛋白的相对分子量分别约为30 k Da和55 k Da。上述研究结果为进一步研究c SP-A的功能奠定了基础。; 黄琪汪凯涂健潘玲祁克宗李泽君陈鸿军刘红梅; 关键词：真核表达

肺表面活性蛋白A及鸡SP-A功能研究进展: 2017年; 本文简述了肺表面活性蛋白A(surfactant protein A,SP-A)的生物学功能研究进展。人、动物和鸡的SP-A在先天性免疫防御中发挥着重要作用,不仅具有降低肺表面张力,防止因肺容量过低而导致塌陷的生理功能,还具有结合特异性微生物,增强巨噬细胞吞噬与杀伤的抗感染免疫功能。因此开发利用鸡SP-A对鸡呼吸道传染病防控具有良好的应用前景。; 黄琪陈鸿军; 关键词：肺表面活性蛋白A 先天性免疫

鸡肺表面活性蛋白A的可溶性表达及活性检测被引量：2: 2015年; 利用RT-PCR扩增鸡肺表面活性蛋白A(cSP-A)基因,将其连接pMD19-T Simple载体,经测序正确后,扩增成熟肽基因片段并酶切克隆入pCold-TF原核表达载体中,转化到感受态宿主菌BL21(DE3)中,加入不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)于16℃诱导表达24h,超声波裂解,通过His·Tag纯化试剂盒纯化,分别进行SDS-PAGE检测。结果扩增得到615bp的成熟肽基因片段;SP-A蛋白获得可溶性表达,融合蛋白的大小为80ku。Western-blot结果显示,该蛋白可被特异性多克隆抗体识别。抑菌试验结果显示,与纯化的天然cSP-A蛋白不同,cSP-A原核表达产物并不具备抑菌活性。; 黄琪汪凯潘玲祁克宗李泽君陈鸿军刘红梅; 关键词：原核表达可溶性表达活性检测

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黄琪