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新疆罗布羊群体遗传多样性及系统进化分析被引量：7: 2016年; [目的]新疆罗布羊群体遗传变异与起源分化的研究,可为罗布羊品种形成、保护和种质特性研究利用提供理论基础。[方法]利用7个微卫星(SSR)位点及mt DNA D-loop环序列分析了新疆尉犁地区120头罗布羊群体遗传多样性,及与其它新疆南部地方羊种与中国绵羊的三大母系:藏羊、蒙古羊和哈萨克羊,三个野羊种:羱羊、摩佛伦羊、盘羊和亚洲型A型、欧洲型B型的母系遗传距离与进化关系。[结果]罗布羊群体平均等位基因数(K)、观察杂合度(HO)、期望杂合度(HE)、多态信息含量(PIC)分别为8.86、0.711、0.791和0.769;发现BM143位点存在罗布羊群体HW不平衡现象。罗布羊分成A系、B系和C系3个进化系,B系进化支与欧洲B型和多浪羊遗传距离较近,聚为一类;C系进化支先与巴音布鲁克羊聚为一支,然后和A进化支聚成一类,再与新疆其它地方羊种及蒙古羊、藏羊、亚洲型A型聚为一类。三个支系中B支系与摩佛伦羊(O.musmon)的关系较近。[结论]新疆尉犁地区罗布羊群体遗传多样性丰富,具有较高育种价值;群体微卫星BM143位点存在的HW不平衡现象;罗布羊有3个进化系,聚类分析结果初步认为罗布羊是由中东经蒙古高原到达新疆,后来与新疆南部地方羊种混杂的品种。; 郑永富王姗姗高庆华钱梦阳宫昌海陈晓利韩春梅; 关键词：系统进化 MTDNA 微卫星DNA

新疆塔里木马鹿茸c-myc基因cDNA克隆和bHLHZIP结构分析及表达被引量：2: 2016年; 采集6头成年马鹿生长60 d茸组织,获得塔里木马鹿茸c-myc基因cDNA全长序列,并比对分析其转录因子的序列特征;结果表明:得到塔里木马鹿茸c-myc基因cDNA 1 840 bp序列,其中ORF区长1 314 bp,编码438个氨基酸;马鹿茸c-myc序列比对,与牛和羊序列相似性最高分别为96%和97%;氨基酸比对分析,在序列121位处马鹿比牛、羊、猪、人类及鼠少1个天冬氨酸(D);马鹿茸c-myc基因的DNA结合域由bHLHZIP结构组成,共80个氨基酸残基,在bHLH区的第16和46位氨基酸处,塔里木马鹿分别为天冬氨酸D和精氨酸R,而牛、羊、猪、人和鼠为天冬酰胺N和赖氨酸L。6个DNA结合位点和E-box的结合位点没有氨基酸变异;羊、牛、猪、人、鼠和马鹿的cmyc基因的Zip序列变异较大。本实验通过0.8 mmol/L IPTG诱导,2 h后构建的Pet-28b-c-myc原核表达载体开始表达目的基因,PAGE检测获得约48 ku目的蛋白质,同时发现随着诱导时间延长没有发现表达量的变化。; 韩春梅高庆华王姗姗郑永富马梦婷张勤; 关键词：C-MYC基因原核表达

鹿茸MSCs软骨分化过程WNT信号基因的表达与分析被引量：3: 2018年; TGF-β信号是刺激骨形成重要的旁分泌信号通路,Wnt信号是细胞生长和分化的重要通路,为探究两信号通路对鹿茸间充质干细胞软骨分化的影响,实验利用10 ng/mL TGF-β1刺激鹿茸间充质干细胞软骨分化,利用定量PCR与Westernblot技术检测分化过程Wnt家族16个生长因子及通路关键基因DKK1和β-catenin的表达变化。结果表明:刺激后第7天细胞开始分泌软骨的表面标志物,软骨分化开始,至第21天骨分化开始;分化过程中检测到Wnt3、Wnt4和Wnt5A 3个Wnt家族生长因子的表达,且Wnt3与Wnt5A基因的表达趋势相近,即在刺激后的第21天达到最高;Wnt4基因表达从软骨与骨的形成阶段呈上调表达趋势,DKK1基因在软骨发育的关键时期即第21天高表达,而β-catenin作为信号通路的枢纽在该时间点呈下调表达。由此可见,Wnt信号通路对塔里木马鹿茸MSCs软骨分化起重要的调控作用,Wnt家族的Wnt3和Wnt5A基因对软骨分化有重要作用影响,而Wnt4基因对软骨骨化有重要影响。; 开丽比努尔.吾布力王姗姗郑永富陈晓利李娜高庆华韩春梅; 关键词：TGFΒ1 WNT信号鹿茸软骨分化

TGF-β1诱导马鹿茸MSCs软骨分化及c-myc基因的表达被引量：6: 2016年; 鹿茸间充质干细胞(MSCs)是维持茸再生与骨化的重要组织,旨在研究鹿茸MSCs的软骨分化及原癌基因c-myc对该过程的调控作用。利用成年塔里木马鹿生长60 d的鹿茸第2代间充质干细胞(MSCs,P2),通过TGF-β1(10 ng/m L浓度)刺激,诱导塔里木马鹿茸间充质干细胞向软骨分化,采用免疫组化和阿利新蓝染色鉴定诱导结果,并通过q PCR方法检测软骨分化过程中c-myc基因的表达变化。结果显示,MSCs在诱导后的第9天开始出现细胞形态变化,由梭形向多角形转变,原来菊花状的分布逐渐向铺路石状变化,至14 d可观察到软骨陷窝,21 d软骨细胞基质明显,并开始出现细胞凋亡。非诱导组28 d细胞出现凋亡,细胞内发现空泡。35 d两组细胞凋亡明显,细胞折光性变差,间隙变大。阿利新蓝染色鉴定,诱导至第14天细胞基质中开始出现大量阳性染色。免疫组化实验检测,诱导至21 d的细胞基质中出现棕色Col II阳性反应物,随培养时间增加颜色加深,并集中分布在细胞及其周围基质中。在软骨分化进程中,第7、14、21和28天,诱导组c-myc基因表达与非诱导组相比显著下调(P<0.05),但诱导至35 d,诱导组c-myc表达与非诱导组相比无显著差异(P>0.05)。在TGF-β1刺激下,塔里木马鹿茸MSCs可以分化成软骨,原癌基因c-myc下调表达诱导鹿茸MSCs进入凋亡状态并分化为软骨细胞。; 韩春梅王姗姗高庆华郑永富马梦婷张勤; 关键词：马鹿茸软骨分化 C-MYC基因

三种奶牛冻精蛋白制备方法的效果比较: 2018年; 为了获得准确的奶牛冻精差异蛋白二维电泳(2-DE)分析结果,试验采用3种不同的方法,即改良TRIzol裂解法、改良三氯乙酸(TCA)-丙酮沉淀法和尿素盐酸胍裂解法,对奶牛冻精蛋白进行裂解,通过蛋白核酸浓度测定仪测定不同裂解法提取的蛋白量,用SDS-PAGE凝胶电泳检测不同方法提取的蛋白量。结果表明:随着精子数量的增加,裂解获得的蛋白量随之增加,改良TRIzol裂解法得到的蛋白量最高,尿素盐酸胍裂解法最低,改良TRIzol裂解法精子数为2.0×107、3.0×107和4.0×107个时蛋白量分别为(1.73±0.07),(1.94±0.05),(2.50±0.38)μg/μL,显著高于其他两种方法(P<0.05);三种不同裂解方法上样量均为25μL,即含蛋白质26.21~62.5μg,不同上样蛋白量比较,精子数3.0×10~7个获得的条带最清晰、无粘连;蛋白条带分布的比较,改良TCA-丙酮沉淀法获得的条带多集中在50~85 ku区域,而改良TRIzol裂解法在30~50 ku区域和14~25 ku区域(精子数为3.0×10~7和4.0×10~7个)。说明精子数为3.0×10~7个时采用改良TRIzol裂解法能得到更丰富、更全面的精子蛋白质种类,有利于二维电泳(2-DE)分析寻找差异蛋白质,为后续试验奠定基础。; 郑永富陈晓利韩春梅高庆华; 关键词：奶牛冻精蛋白裂解

3D与平面培养条件下马鹿茸间充质干细胞的生长特性比较: 2017年; 细胞体外3D培养技术更有利于细胞功能的表达和发挥,是细胞组织工程的重要研究内容。马鹿鹿茸间充质干细胞(MSCs)是一种新发现的成体干细胞,具有向软骨分化的能力。【目的】为了深入研究鹿茸MSCs细胞特性及软骨分化机制,【方法】利用水凝胶为支撑材料进行3D培养,与细胞平面培养方式对比,分析鹿茸MSCs的生长特性与变化。【结果】结果表明,3D培养组生长呈团状,形态呈梭型。两种培养法细胞生长曲线相似,培养至48 h后细胞进入对数生长期,平台期即培养144 h之后3D培养组细胞密度显著高于平面培养组(p<0.05);对两种方法培养312 h(13 d)的细胞进行PI染色,3D培养组细胞凋亡率(32.67±11.08%)低于平面培养组(37.18±10.21%),但两组间没有显著差异。; 郑永富张兆琴王姗姗陈晓利韩春梅; 关键词：细胞密度凋亡

超长时间低温保存绵羊鲜精活率和DNA完整性的比较被引量：5: 2017年; 羊的人工授精技术在畜牧生产实践中对短期内扩大良种羊的数量和质量、最大化发挥优秀种公羊的遗传潜力、加速杂交改良、加快育种进程、防止疾病传播特别是生殖道疾病的传播等方面有着重要意义。; 陈晓利郑永富王杰高庆华; 关键词：绵羊整性活率鲜精人工授精技术

牙釉质基因巢式扩增鉴定牛早期胚胎性别的研究被引量：2: 2016年; 根据牙釉质基因在牛X染色体和Y染色体上存在的差异设计巢式引物,对牛静脉血基因组DNA样本以及10枚牛早期胚胎DNA样本进行巢式扩增和电泳分析,以鉴定性别。结果表明:利用此方法能够对牛10 pg量血液基因组DNA进行扩增鉴定性别,雌性产生1条片段长度为311 bp的源于X染色体的条带,雄性产生1条源于X染色体的条带(311 bp)和1条片段长度为251 bp的源于Y染色体的条带,对10枚胚胎进行鉴定,6枚为雄性,4枚为雌性。说明牙釉质基因巢式PCR扩增鉴定牛早期胚胎性别方法可靠,准确性和敏感性较高。; 马梦婷高庆华王姗姗陈晓利郑永富; 关键词：胚胎性别鉴定巢式PCR

一种塔里木马鹿茸c-fos基因及其应用: 一种塔里木马鹿茸c-fos基因及其应用，所述c-fos基因的核苷酸序列如SED ID NO：1所示。本发明塔里木马鹿茸c-fos基因还包括在促茸生长中的应用。本发明之塔里木马鹿茸c-fos基因改变了鹿茸依赖自然或药物处理...; 韩春梅高庆华王姗姗吴延风孟浩郑永富马梦婷; 文献传递

马鹿茸间充质干细胞软骨分化过程表面标志物的特征性变化被引量：2: 2016年; 利用阿利新蓝、甲苯胺蓝、茜素红染色和免疫组化法鉴定鹿茸间充质干细胞(MSCs)不同分化阶段蛋白多糖、Ca^(2+)和Ⅱ型胶原蛋白3种软骨细胞表面标志物的分泌量。结果表明,诱导第14~21天细胞蛋白多糖分泌逐渐增加,阿利新蓝和甲苯胺蓝染色结果逐渐达强阳性,至第28天时蛋白多糖胞外积累量开始下降;茜素红染色与免疫组化结果显示,诱导第14~35天,细胞阳性结果均逐渐上升,第35天茜素红染色与免疫组化检测阳性结果显著高于前3个阶段。表明:体外诱导鹿茸MSCs至第14天软骨细胞开始出现,并分泌蛋白多糖和少量Ⅱ型胶原蛋白,第21天软骨细胞大量出现,开始分泌少量Ca^(2+),至第28天时软骨开始向骨分化,蛋白多糖分泌下降,Ca^(2+)在胞外积累,第35天软骨细胞完成终末分化进入钙化期。; 王姗姗郑永富马梦婷高庆华韩春梅; 关键词：鹿茸间充质干细胞软骨分化体外诱导

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