目的通过多数据库联合挖掘探索PTP4A3在肝细胞癌发生发展中的作用。方法基于Oncomine及癌症和肿瘤基因图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库联合数据分析PTP4A3在肝细胞癌组织和正常组织中的表达水平;通过Human Protein Atlas数据库,进一步研究PTP4A3在肝细胞癌和正常组织中的表达;同时基于Kaplan-Meier Plotter数据库进一步分析PTP4A3表达水平与肝细胞癌预后的关系。结果基于Oncomine数据库分析PTP4A3在肝细胞癌中高表达的研究有1项,低表达的0项。涉及PTP4A3在肝细胞癌组织和正常组织中转录水平的5项研究中,共包括768个样本,与正常组织相比,PTP4A3在肝细胞癌组织中高表达(P=1.06×10^(-5))。基于TCGA数据库(正常组50例,肝细胞癌组371例),PTP4A3在肝细胞癌组织中显著高表达(P <0.0001)。在Human Protein Atlas数据库的免疫组织化学数据中,相对于正常肝组织,PTP4A3在肝细胞癌中显著高表达。Kaplan-Meier Plotter数据库(n=364)分析显示,PTP4A3的mRNA表达量与肝细胞癌患者总体生存率存在相关性,即高表达PTP4A3的患者总体生存率较低,预后较差(P=0.049)。结论数据库挖掘显示PTP4A3基因具有促进肝细胞癌发生发展的作用,是肝细胞癌的关键基因之一,为以PTP4A3作为肝细胞癌药物靶点研究和治疗提供基础。
目的沉默乙型肝炎病毒(HBV)PS1反式激活蛋白2基因(PS1TP2)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法荧光定量PCR(RT-PCR)用于检测PS1TP2基因在不同肝细胞系中基础表达水平。将PS1TP2小干扰RNA(siRNA PS1TP2)及对应的阴性对照小干扰RNA(siNC)作为干扰组和对照组分别瞬时转染至HepG2细胞中,培养48 h后,应用CCK-8试剂盒检测两组细胞的增殖活性水平;AnnexinV/7-AAD流式细胞术检测两组细胞凋亡程度;RT-PCR检测两组细胞中PS1TP2、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因mRNA表达水平;Western blot检测两组细胞中Bcl-2、Bax、人腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、雷帕霉素靶蛋白(m-TOR)蛋白水平并计算Bcl-2与Bax的比例。结果 PS1TP2基因在肝癌细胞HepG2中的表达水平明显高于正常肝细胞L02。干扰组HepG2细胞的增殖速率明显慢于对照组。与对照组相比,干扰组的HepG2细胞中Annexin V+细胞数明显升高( P <0.05),HepG2细胞中Bcl-2 mRNA表达量明显下降( P < 0.05 ),Bax mRNA表达量明显上升( P <0.05);同样在干扰组的HepG2细胞中Bcl-2、m-TOR蛋白水平明显下降( P < 0.05 ),而Bax、AMPK蛋白水平则明显升高( P <0.05)。结论干扰掉PS1TP2基因可经过线粒体途径促进HepG2细胞凋亡,可能是通过活化AMPK-m-TOR途径而抑制其增殖。
目的探讨NS5ATP3在非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)相关肝细胞癌(hepatic cell carcinoma,HCC)发生发展中的作用机制。方法转染pNS5ATP3或si-NS5ATP3后检测HepG2细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)水平,分别采用CCK8法、划痕实验、Caspase-3活性检测法检测细胞增殖、凋亡及迁移情况。通过聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测胆固醇合成、细胞增殖、凋亡及细胞周期相关基因和蛋白(SREBP2、HMGCR、FoxM1)的表达。比较共转染pNS5ATP3和si-HMGCR与单纯转染pNS5ATP3时下游HCC关键基因FoxM1的表达水平及细胞增殖能力。结果NS5ATP3过表达增加了细胞内TC水平[(0.044±0.008)pmol/mg vs(0.034±0.004)pmol/mg;t=3.231,P=0.023)],而NS5ATP3沉默后降低了TC水平[(0.025±0.002)pmol/mg vs(0.033±0.003)pmol/mg;t=3.846,P=0.009)]。Western blot表明,与对照组相比,过表达NS5ATP3可引起SREBP2和HMGCR蛋白水平增加,p-AMPKα水平显著降低;沉默NS5ATP3后,SREBP2和HMGCR蛋白水平下降,p-AMPKα水平增高。qRT-PCR结果也显示,与对照组相比,NS5ATP3过表达上调SREBP2 mRNA(2.45±0.75 vs 1±0.33;t=5.159,P=0.037)和HMGCR mRNA(2.30±0.30 vs 1±0.10;t=4.432,P=0.047)的表达,而沉默NS5ATP3后,SREBP2 mRNA(0.24±0.21 vs 1±0.26;t=4.769,P=0.041)和HMGCR mRNA(0.47±0.13 vs 1±0.21;t=4.522,P=0.046)表达水平显著下降。在48 h和72 h时,过表达NS5ATP3组细胞相对活力显著高于对照组(1.85±0.06 vs 1.56±0.12,t=4.583,P=0.010;3.08±0.19 vs 2.61±0.21,t=4.790,P=0.009),24 h时差异无统计学意义(1.10±0.06 vs 1±0.08,t=1.873,P=0.088)。在24 h、48 h和72 h时,沉默NS5ATP3组细胞相对活力均显著低于对照组(0.90±0.07 vs 0.98±0.09,t=3.378,P=0.020;1.57±0.05 vs 1.63±0.11,t=2.717,P=0.035;1.82±0.23 vs 2.61±0.21,t=5.010,P=0.004)。与对照组相比,过表达NS5ATP3后,细胞中caspase-3/7水平降低(0.69±0.09 vs 1±0.15;t=3.128,P=0.026),而沉默siNS5ATP3后,caspase-3/7活性增�
