赵小侠
- 作品数：9 被引量：26H指数：3
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- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 在大肠杆菌中反义RNA抑制乙型肝炎病毒核心抗原的表达被引量：8
- 1992年
- 将乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)基因的DNA序列分别按正、反方向置tac启动子的控制下,并克隆进入同一个质粒中,转化大肠杆菌JM103后,观察到HBcAg和HBeAg的合成均明显低于仅含有HBcAg基因的细菌,最大抑制率可达70％～80％,分子杂交可见反义RNA存在。
- 赵小侠毛东丽张爱臣侯云德
- 关键词：乙肝病毒核心抗原反义RNA
- 采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子被引量：8
- 1990年
- 肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42×10~8u/L菌液。SDS-PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22.8%。抗肿瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。SD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。
- 张德震吴淑华张智清金奇赵新华赵小侠苏成芝侯云德
- 关键词：肿瘤坏死因子
- 人γ干扰素突变体(rIFN-γ132-PGIL)的构建及其生物学活性的测定被引量：4
- 1989年
- 利用DNA重组技术,去掉人γ干扰素(IFNγ)基因3′端含编码多肽羧基(C)端11个氨基酸的核苷酸序列,与编码P,G,I,L的DNA序列相连接,构成IFNγ突变体(rIFN-γ132-PGIL)基因,将后者插入pBV220P_RP_L串连启动子下游,转化大肠杆菌DH5α,在CIts857基因的调节下,通过升温诱导,获得了高效表达,表达量约占菌体可溶性蛋白的30％以上,抗病毒活性平均可达4.9×10^-8U/L,比母体菌株高10倍。SDS—PAGE结果表明,rIFN-γ132—PGIL分子量为17kd。
- 王晓鸣李玉英金奇张智清赵小侠侯云德
- 关键词：Γ干扰素生物学活性
- Ribozyme——分子病毒学的新领域被引量：3
- 1991年
- Ribozyme是具有催化RNA切割反应功能的RNA,它可以有效地序列特异性地切割RNA。最近,Ribozyme的一般结构已经被证实,因此能够设计并人工合成Ribozyme,通过切割破坏RNA,阻断其功能,并抑制基因表达,包括抑制病毒的基因表达,从而有效地阻止病毒的复制和繁殖。这是近年来继反义RNA之后发现的又一个抑制基因表达的有力工具,它开辟了分子生物学的一个新领域,具有很大的潜在应用价值,因此它一出现即引起各国学者的极大兴趣。
- 赵小侠
- 关键词：分子病毒学RIBOZYME核糖核酸
- 人肿瘤坏死因子与人γ干扰素重组双功能融合蛋白的研制被引量：1
- 1991年
- 肿瘤坏死因子与γ干扰素具有非常相似的生物学活性,并在一些主要的生物活性方面表现有较强的协同作用。本文采用寡核苷酸指导下的定位缺失-插入体外基因突变技术,删除了干扰素与肿瘤坏死因子串联基因之间的非编码区,去徐了γ干扰素的翻译终止信号,插入了一个人工设计的连接肽,使γ干扰素与肿瘤坏死因子基因在不改变读码框架的条件下融合起来,并在大肠杆菌表达系统中表述了兼有γ干扰素和肿瘤坏死因子功能的融合蛋白。
- 张德震吴淑华智刚张智清金奇金冬雁赵小侠侯云德苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子Γ干扰素
- 逆转录病毒载体的研究现状及其在分子生物学中的应用被引量：1
- 1991年
- 由于重组DNA技术的建立,促使各种真核病毒用作载体成为可能。逆转录病毒是最早被发展为载体的真核病毒之一。已经发展起来的病毒载体还有SV40、牛乳头瘤病毒、腺病毒及痘苗病毒等载体。到目前为止,还没有一种病毒载体能够代替所有其它的病毒载体,但根据不同的目的可采用不同的载体。逆转录病毒在其生命周期中的一环形成前病毒(Provirus)DNA整合到宿主细胞基因组中,而其它病毒都没有能使其DNA高效地整合于宿主细胞染色体中的机制。逆转录病毒的这一特点确定了它在分子生物学中的特殊地位。逆转录病毒用作基因转移载体是在八十年代初发展起来的。1981年Temin。
- 杨毅力赵小侠
- 关键词：逆转录病毒载体分子生物学
- 痘苗病毒载体介导的反义RNA抑制HBsAg基因表达的研究被引量：1
- 1991年
- 将含有乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的DNA片段,按转录的相反方向插入痘苗病毒P11启动子下游,构建成重组质粒pJ16/HBS和pHBS-1。使用磷酸钙沉淀技术将这些质粒转染能分泌HBsAg并已被痘苗病毒感染的细胞,观察到HBsAg的合成被特异性地抑制,抑制率最高达95％以上。
- 赵小侠曹雷毛冬丽张爱臣王平侯云德
- 关键词：痘苗病毒反义RNAHBSAG基因
- 一种简便高效的寡核苷酸指导的基因定位突变技术被引量：2
- 1991年
- 随着基因工程和蛋白工程的发展,寡核苷酸指导的基因定位突变技术的应用越来越广泛。但在实际应用的过程中,筛选出所设计的突变克隆仍是比较耗时的。虽然,突变的理论值达50％,而在实际工作中则远远低于此值。造成这种现象的原因很多,包括突变引物的设计是否合理,退火及合成是否完全,模板制备是否符合标准以及M13系统正链转染特性等。过去,人们为提高突变率曾对此方法进行过多次改进。例如,为了富集含突变引物的双链,有用S1外切酶消化法、碱性蔗糖超速离心法、氯化铯密度梯度离心法、溴化乙碇存在下的凝胶电泳,以及用羟基磷灰石吸附单链,等等。但是,这些方法都比较复杂,流程又长。近来,PCR技术已经用于基因定位突变,并可将突变率提高至99％以上,但突变位点和突变方式的随意性仍有一定局限。
- 王晓鸣金奇赵小侠侯云德
- 关键词：基因定位突变技术
- 用逆转录病毒载体表达乙型肝炎病毒表面抗原
- 1992年
- 将含有乙型肝炎病毒(HBV)Pre-S及S基因开放读码框架的DNA片段克隆到逆转录病毒表达载体Pzip-neo SV(X)的5′-端长末端重复序列(LTR)下游BamH Ⅰ位点,构建成重组质粒Pzip-HBS。用磷酸钙沉淀技术将重组质粒转染到辅助包装细胞ψ-2中,经G418筛选,2周后获得的抗性细胞克隆能有效地表达HBsAg。5×10~6细胞培养48小时之后,收集上清,用放射免疫方法测得HBsAg产量达6283cpm,P/N值为32.6。Western blot证实,在分子量约23kD处有一条与乙型肝炎病毒表面抗体相结合的特异性蛋白带。Southern杂交显示,在细胞染色体上整合有HBsAg基因。电镜观察可见上清液中的HBsAg和重组的逆转录病毒颗粒。
- 杨毅力赵小侠龚春梅侯云德
- 关键词：逆转录病毒乙型肝炎病毒抗原
