- B淋巴细胞对肝肿瘤发生发展影响的研究
- 目的：免疫功能低下是肿瘤患者的普遍临床特征，免疫逃避是肿瘤快速恶化的重要机制，其分子机制亟待深入研究。本文旨在探究非炎症条件下B淋巴细胞对肝癌发生发展的影响作用。 方法：通过对H-ras12V原癌基因在肝细胞中的特异性...
- 王康伟
- 关键词：B淋巴细胞肝癌
- 文献传递
- miR-146a/b在Hep3B细胞中的表达及上下游调控机制探讨被引量：2
- 2016年
- 目的:探究miR-146a/b在Hep3B的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白。方法:MTT法检测人正常肝细胞株LO2和人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的增殖活性。分别提取3个细胞的总RNA和蛋白,应用RT-qPCR和蛋白印记法分别检测细胞株中miR-146a/b的表达和细胞外调节激酶1/2(ERK)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IκBα)、白介素1受体关联激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)的蛋白水平。用抑制剂分别抑制Hep3B细胞PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号分子的活性并检测miR-146a/b的表达水平及IRAK1、TRAF6的蛋白水平。结果 Hep3B细胞增殖活力和miR-146a/b表达水平显著高于LO2和HepG2(P<0.01)。蛋白印记结果显示,以LO2为对照组,Hep3B细胞的pERK1、ERK1、p-AKT、IκB的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;IRAK1、TRAF6的蛋白水平明显降低,分别为LO2的0.23和0.003倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκB和IRAK1蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和2.69倍。抑制Hep3B细胞的PI3K和AKT活性12 h和24 h,miR-146a和miR-146b的表达水平显著降低(P<0.05);抑制ERK和NF-κB的活性12 h和24 h,miR-146a/b的表达水平没有显著变化。抑制PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号通路活性均可上调TRAF6和下调IRAK1的蛋白表达水平。结论:在恶化程度较高的Hep3B细胞中,PI3K/AKT可通过上调miR-146a/b的表达进而下调TRAF6的蛋白水平,这一机制为肝肿瘤发生发展的机理研究提供了重要线索。
- 董建一王欣欣王康伟陈军李慧玲王福金王爱国王靖宇
- 关键词：PI3K/AKTTRAF6
- H-ras12V转基因小鼠肝癌进展过程中外周血淋巴细胞比例及活性的变化被引量：1
- 2016年
- 目的:检测H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤发生和发展过程中,其外周血中T、B淋巴细胞表型及活性T、B淋巴细胞所占比例的变化,以期探讨肝肿瘤与淋巴细胞之间相互作用的机制。方法:采用FCM法分别检测3、5和9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠及正常健康C57BL/6J雄性小鼠(对照组)外周血中不同T、B淋巴细胞表型所占的比例和活性T、B淋巴细胞所占的比例,同时对所有小鼠的肝组织进行病理学诊断。结果:3月龄的H-ras12V转基因雄性小鼠和3、5和9月龄的对照组正常健康雄性小鼠的肝脏中均未出现显著的病理学改变。5月龄的H-ras12V转基因雄性小鼠的肝脏中出现多发性结节,而9月龄的H-ras12V转基因雄性小鼠的肝脏中则发生了多发性肝肿瘤。与同月龄的正常健康雄性小鼠相比J3、5和9月龄H-rasl2V转基因雄性小鼠外周血中B淋巴细胞(sIgM^+CD23^+和sIgM^+B220^+)所占比例均明显降低(P值均<0.01),5和9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠中活性B淋巴细胞(CD19^+CD69^+)所占的比例也均发生明显降低(P值均<0.05),并且随着月龄的增加及H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤的发生和发展,外周血中B淋巴细胞和活性B淋巴细胞所占的比例呈逐渐降低的趋势。与同月龄正常健康雄性小鼠相比,3和5月龄H-ras12V转基因雄性小鼠的外周血中T淋巴细胞(CD3e^+)所占的比例及活性T淋巴细胞(CD3e^+CD69^+和CD3e^+CD25^+)所占的比例均无明显变化(P>0.05),但9月龄H-ras12V转基因雄性小鼠外周血中T淋巴细胞所占比例及活性T淋巴细胞所占比例均显著降低(P值均<0.05)。结论:随着H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤的恶化,其外周血中T、B淋巴细胞及活性T、B淋巴细胞所占的比例显著降低。
- 聂鑫王康伟张敏王福金王爱国王靖宇
- 关键词：淋巴细胞
- ERK信号通路调控Spink3在肝癌中的表达
- 2017年
- 目的探究Spink3在小鼠肝癌组织中的表达调控机制。方法采用RT-qPCR方法检测SPINK1在人肝癌及Spink3在H-ras12V转基因肝癌中的mRNA表达水平。采用Western blot和RT-q PCR法检测原代培养小鼠肝癌组织和肝癌旁组织中的ERK和mTOR信号通路的变化及Spink3的mRNA表达水平。体内抑制ERK和mTOR信号分子活性,检测其对Spink3 mRNA表达水平的影响。结果与肝癌旁组织相比,SPINK1和Spink3的mRNA水平分别在人肝癌组织和小鼠肝癌组织中显著升高(P<0.05)。在原代培养的小鼠肝癌和肝癌旁组织中,与0 h相比,随着体外培养时间的延长(6、12、24、48 h),p-ERK和p-mTOR信号分子水平明显下降;与此相一致,Spink3的mRNA的表达水平也显著降低(P<0.01)。体内抑制ERK信号分子的活性,显著下调了Spink3的mRNA表达水平(P<0.05)。但体内抑制mTOR信号分子的活性,对Spink3的mRNA表达没有显著影响。结论 SPINK1/Spink3在肝癌组织中过表达,有望成为肝癌的临床诊断指标。ERK通路可能是上调Spink3表达的主要信号通路。
- 王康伟王欣欣戎卓娜樊婷婷李娟王玉琨王福金王爱国王靖宇
- 关键词：ERKMTOR肝癌
