陈晓燕
- 作品数：15 被引量：14H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脐带间充质干细胞抑制T细胞免疫作用被引量：1
- 2022年
- 目的研究人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)在体外对淋巴细胞增殖和免疫调控功能的影响。方法采用组织块贴壁法分离健康捐献者来源的脐带进行分离培养。培养至第3~5代时,进行多向分化和细胞表型鉴定。获取健康供者外周血单个核细胞,并通过CD3免疫磁珠分选出T淋巴细胞,进行荧光染料CFSE标记,然后分成单独培养组(T细胞)和共培养组(按T∶MSC=5∶1的比例共培养),两组均采用CD3/CD28单克隆抗体活化,培养3 d后通过流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖情况,并检测Th1/Th17细胞亚群的变化以及对Treg细胞亚群的影响。结果健康捐献者来源的hUC-MSCs高表达CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166、HLA-DR,不表达CD31、CD34、CD45,并具有多向分化潜能。与单独培养组比较,共培养组中的T淋巴细胞增殖率和Th1、Th17细胞亚群比例明显降低,Treg细胞比例明显升高。结论hUC-MSCs通过抑制T淋巴细胞的增殖、下调Th1/Th17和上调Treg细胞参与免疫调节,发挥免疫抑制作用。
- 阳莉林惠珠钱师宇陈晓燕陈文捷卢建溪
- 关键词：间充质干细胞淋巴细胞亚群免疫调节
- 不同代次人脐带间充质干细胞生物学特性评估
- 2022年
- 目的明确传代扩增代次对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)生物学特性的影响。方法采用组织块法分离HUC-MSCs,体外传代培养后比较P3、P5、P10细胞的生物学特性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体核型分析检测基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测多向分化潜能;SA-β-gal活性检测细胞衰老情况;蛋白芯片检测胞内及培养上清细胞因子表达水平。结果3个代次的hUC-MSCs形态特征及生长曲线相似,随着扩增代次的增加,细胞的增殖活性降低。3个代次的hUC-MSCs均高表达CD105、CD90、CD73等表面免疫标志物,不表达或低表达CD11b、CD19、CD34、CD45及HLA-DR。染色体核型分析证实3个代次的hUC-MSCs均为正常二倍体核型,染色体核型未发生结构畸形改变。3个代次的hUC-MSCs成脂和成骨分化潜能均未见显著性差异。SA-β-gal活性检测显示,随着扩增代次的增加,HUC-MSCs开始呈现衰老趋势。hUC-MSCs胞内及培养上清均能检测到IL-6、IL-1β、TNF-α、G-CSF和GM-CSF,胞内IL-6和IL-1β随着扩增代次增加升高;培养上清GM-CSF随着扩增代次增加下降。结论不同代次HUC-MSCs在表面免疫标志物、基因稳定性及其多向分化潜能等基本生物学特性方面均无显著性变化。随着扩增代次增加会分泌SASP,而致细胞老化,增殖活性降低。
- 林惠珠李翠平钱师宇阳莉陈晓燕陈文捷卢建溪
- 关键词：人脐带间充质干细胞染色体核型分析Β-半乳糖苷酶活性细胞因子
- CIK细胞在不同培养基下的生物学活性
- 2019年
- 目的:探讨两种不同培养基诱导CIK细胞的差异。方法:健康自愿者来源的外周血单个核细胞(PBMC),分别加入CTS培养和H3培养基中进行诱导培养,在培养的第0、3、7、10、12、14天分别取细胞进行计数,每日电子显微镜下观察细胞状态,在培养的第10天以流式细胞术检测两组培养细胞表面CD3、CD56的表达情况。结果:CIK培养基和H3培养基均可使培养细胞在第7天时开始明显扩增,第10天时可扩增至200倍。其中,CIK培养基获得的细胞扩增倍数明显高于H3培养基(P<0.05);流式结果CD3/CD56显示两种培养基无明显差异。结论:不同成分的CTS培养基和H3培养基均可促进CIK细胞的扩增和成熟,但呈现不同生物学特征。
- 蔡惠宁李翠平陈晓燕郑小芳陈文捷
- 关键词：CIK细胞培养基增殖率表型
- 臭氧联合紫外线对GMP洁净实验室消毒的效果评价
- 2022年
- 目的观察臭氧联合紫外线对药品生产质量管理规范(good manufacturing practice,GMP)洁净实验室进行消毒的效果。方法臭氧联合紫外线对GMP洁净实验室连续消毒运行12个月,每个月月末布放一次血琼脂平板做沉降菌检测;作为对照,在洁净实验室运行一年后关闭洁净空调及臭氧联合紫外线消毒,更换滤芯对空调系统维护两周后,布放一次血琼脂平板做沉降菌检测。于37℃保温箱培养48 h后计数每平板上的菌落数。结果洁净空调运行加上臭氧联合紫外线消毒,布放在负压洁净室的8个采样点均未检测到沉降菌落,而布放在正压洁净室的14个采样点,在2、8、9、12月个别采样点的个别血琼脂平板可见1~2 CFU/平板,但均≤3 CFU/平板,判定合格,合格率100%;而关闭洁净空调及臭氧联合紫外线消毒两周后,布放在负压洁净室有2个采样点均>3 CFU/平板,不合格。结论臭氧联合紫外线对GMP层流实验室消毒彻底,效果良好。
- 陈晓燕钱师宇曾彩辉卢建溪
- 关键词：臭氧紫外线消毒
- 不同无血清培养体系对人脐带间充质干细胞生物学功能的影响
- 2023年
- 目的 探讨3种不同无血清培养体系对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)体外培养的生物学功能的影响。方法 取3株脐带组织,各分3组实验组,经贴壁法分别置于3组不同无血清培养体系(A组:纯化学成分合成的无血清培养体系,B组:血小板裂解物+基础培养基的无血清培养体系,C组:纤维蛋白原包被+含重组人蛋白质的无血清培养体系)中培养至第3代,比较其细胞增殖能力、细胞表型、三系分化能力以及免疫调节功能。结果 3组实验组细胞均呈长而扁平的梭形,贴壁生长,大小均一。其增殖曲线趋势相似,A组和B组P2、P3代次的增殖能力优于C组(P均<0.05)。3组实验组细胞均符合国际干细胞协会对hUC-MSC细胞表面标志物鉴定的要求,A组和B组P3代次的CD29和CD90的表达量均高于C组(P均<0.05),并且3组实验组均具有三系分化能力。3组实验组中P3代次的T淋巴细胞增殖率、Th1和Th17细胞亚群分泌的细胞因子比例均低于对照组,调节性T细胞(CD4+CD25+FOXP3+)比例均高于对照组,而3组实验组之间两两比较差异无统计学意义(P均> 0.05)。结论 3种不同无血清培养体系的hUC-MSC均能保持其基本的生物学特性和免疫调节活性,纯化学成分合成的无血清培养体系和血小板裂解物+基础培养基的无血清培养体系的增殖能力和细胞表面标志物表达均优于纤维蛋白原包被+含重组人蛋白质的无血清培养体系。
- 林惠珠李翠平陈晓燕阳莉
- 关键词：人脐带间充质干细胞生物学功能
- 双色法和三色法检测NK细胞杀伤功能的实用性比较
- 2022年
- 目的 比较双色法和三色法检测自然杀伤细胞(NK cell)的体外杀伤功能。方法 选取20例自2019年至2021年于中山大学附属第三医院献血者外周血,体外诱导扩增NK细胞(效应细胞),在培养第14天按10∶1、20∶1效靶比分别与K562细胞(靶细胞)混合共培养,且在1 h、2 h、3 h、4 h共4个时间组取样,分别采用CFSE/PI双色法和CFSE/Annexin-V/7-AAD三色法进行流式染色,检测K562细胞的凋亡。结果 在不同效靶比实验组,两种染色方法都能检测出NK细胞在效靶比20∶1杀伤功能显著高于效靶比10∶1,差异有统计学意义(P<0.05),在4个时间点实验组中,效靶细胞共培养4 h时NK细胞杀伤功能最强。其中,三色法检测出细胞杀伤功能显著高于双色法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论三色荧光染色法比双色法能更灵敏更特异地检测NK细胞杀伤功能,结果更为可靠。
- 陈晓燕阳莉蔡惠宁李翠平卢建溪
- 关键词：双色法NK细胞杀伤功能
- 外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势
- 2021年
- 目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细胞表型分析和杀伤活性检测,总结外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。结果:外周血单个核细胞(PBMCs)经诱导培养2~3 d即出现细胞集落。随着培养时间的延长,NK细胞的数量逐渐增加,不同培养时间点(第4天、第8天、第12天、第16天和第20天)NK细胞的数量相比,P<0.05;NK细胞的杀伤活性从培养第8天开始升高,至第12天达到峰值后开始下降,不同培养时间点NK细胞的杀伤活性相比,P<0.05;NK细胞的比例先增加后下降(在培养至16 d达到峰值后开始下降),其比例的下降趋势较杀伤活性的下降趋势滞后,不同培养时间点NK细胞的比例相比,P<0.05;各时间点NK细胞的存活率均大于95%。结论:采用无血清培养法对外周血NK细胞进行培养时,随着培养时间的延长,外周血NK细胞的数量呈逐渐增加的趋势。外周血NK细胞的杀伤活性在培养12 d后出现下降的趋势。在培养的第12天~第16天,NK细胞的杀伤活性较强,细胞数量较多,细胞纯度较高。采用无血清培养法体外扩增NK细胞的效率较高。
- 阳莉胡元陈晓燕黄梦淳卢建溪
- 关键词：自然杀伤细胞细胞培养杀伤活性免疫治疗
- 标本保存时间对健康人外周血淋巴细胞亚群分析的影响被引量：6
- 2021年
- 目的:观察样本保存时间对流式细胞术分析健康人外周血淋巴细胞亚群结果的影响。方法:随机选取健康人外周血标本23例,分别在采血后立即检测(D0组)、4℃保存1 d(D1组)、2 d(D2组)、3 d(D3组)和5 d(D5组)后用流式细胞仪分析淋巴细胞亚群。结果:D5组淋巴细胞的物理参数发生变化;D5组CD3^+细胞百分比明显降低(P<0.05);D3组和D5组CD3^-CD19^+细胞百分比明显升高(P<0.05),CD3^+CD56^+细胞百分比明显降低(P<0.05)。结论:外周血标本在单核细胞分离后,于PBS保存于4℃条件下,处理后的标本3 d内检测健康人外周血淋巴细胞亚群结果比较稳定。
- 阳莉陈晓燕蔡惠宁陈伟材卢建溪
- 关键词：流式细胞术淋巴细胞亚群
- 不同抗凝剂保存液对脐血培养的NK细胞增殖及杀伤效应的影响
- 2023年
- 目的探讨不同抗凝剂保存液对脐血培养的NK细胞增殖及杀伤效应的影响。方法无菌采集健康孕妇20 ml脐血共10例,分别放入肝素钠和血液保存液的抗凝管中。用淋巴细胞液分离脐血单个核细胞(CBMC),在体外扩增培养NK细胞,分别于培养0、3、6、9、12、15、18、21 d进行细胞计数。在第15天和第21天通过流式细胞仪检测CD3-CD56+、CD16+NK细胞比例以及细胞凋亡率。在第15天用CCK8法按照效靶比5∶1、10∶1、20∶1检测两组抗凝剂收集CBMC,在体外扩增获得的NK细胞对人肝癌细胞株(SMMC7721、BEL7402、Sk-hep1、HepG2、Hep3B、Huh7)的细胞毒作用。两组细胞数目等比较采用t检验;多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果体外培养第9天开始NK细胞均呈对数生长,培养至第15天后细胞增殖能力下降,细胞数量减少。细胞生长曲线显示,第9、15、21天肝素钠组NK细胞数目分为(1.8±0.8)×108、(6.2±1.9)×108、(4.9±1.3)×108个,明显高于血液保存液组的(1.0±0.5)×108、(4.3±2.0)×108、(3.4±1.9)×108个(t=2.797,2.198,2.177;P<0.05)。NK细胞对肝癌细胞株的细胞毒作用显示,NK细胞对6株人肝癌细胞的细胞毒作用随着效靶比增加而增强,在效靶比20∶1时杀伤效率最高,其中对SMMC7721杀伤作用最强,而两组杀伤率无明显差异(P>0.05)。结论肝素钠和血液保存液均可作为脐血NK细胞培养的抗凝剂,肝素钠可增强NK细胞增殖能力,但不增加对肝癌细胞的杀伤效应。
- 李翠平陈晓燕钱师宇林惠珠曾彩辉阳莉卢建溪
- 关键词：细胞杀伤效应细胞毒作用抗凝剂血液保存液
- HBV感染对体外培养NK细胞生物活性影响的研究被引量：1
- 2020年
- 目的HBV感染对NK细胞生物活性的影响。方法外周血标本来源于2018年1月至2018年12月在中山大学附属第三医院岭南医院经体外扩增培养NK细胞后回输的49例患者。患者均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。其中男30例,女19例;年龄27~87岁,中位年龄60岁。根据患者有无HBV感染,将血标本分为HBV(+)组和HBV(-)组。体外扩增、培养CD3^-CD56^+的NK细胞和CD3^+CD56^+的NKT细胞。采用流式细胞术检测NK、NKT细胞百分率。两组细胞活性率和细胞凋亡等比较采用t检验。结果HBV(-)组细胞活性率为(94.4±1.2)%,明显高于HBV(+)组的(85.1±4.6)%(t=2.146,P<0.05);而HBV(-)组细胞凋亡率为(3.2±0.9)%,明显低于HBV(+)组的(11.6±4.1)%(t=-2.220,P<0.05)。HBV(-)组NK细胞百分率为(55.8±4.4)%,明显高于HBV(+)组的(34.7±5.9)%(t=2.889,P<0.05)。结论HBV(-)患者来源的细胞体外扩增诱导可获得较多NK细胞。
- 蔡惠宁许燕陈晓燕陈伟材郑小芳
- 关键词：自然杀伤细胞细胞培养技术
