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新型鸭呼肠孤病毒P18基因的表达与鉴定: 为鉴定序列推导的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)P18基因是否存在,本研究采用RT-PCR扩增获得NDRV TH11株推导的P18基因,将其亚克隆至原核表达载体p Cold-TF,表达并纯化获得P18重组蛋白。以此重组蛋白为...; 吴巧梅李传峰朱杰谭永贵李琦刘光清陈宗艳; 关键词：新型鸭呼肠孤病毒多克隆抗体; 文献传递

SYBR Green II荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔病毒性出血症病毒方法的建立被引量：2: 2017年; 本研究建立了一种荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)结合熔解曲线区分不同亚型兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)方法。根据GenBank数据库中已公布的不同亚型RHDV(经典RHDV和RHDV2)的衣壳蛋白VP60序列保守区设计了1对特异性引物,利用SYBR Green II荧光染料,在实时荧光定量PCR方法的基础上结合熔解曲线进行分析,经典RHDV和RHDV2熔解温度(Tm)分别为(86.3±0.1)℃和(85.1±0.1)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现单特异峰。结果表明,本研究建立的方法能够快速地鉴别经典RHDV和RHDV2。; 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清; 关键词：兔病毒性出血症病毒荧光定量PCR 熔解曲线

新型兔出血症病毒(RHDV2)VP60蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3: 2016年; 为了表达含有新型兔出血症病毒(RHDV2)衣壳蛋白VP60基因的重组蛋白,利用合成的含VP1基因的质粒pUC-VP60为模板,通过PCR扩增获得VP60基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a(+)-VP60。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达VP60重组蛋白,纯化重组蛋白并免疫小鼠,制备抗VP60的多克隆抗体。Western-blot分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有良好的免疫原性。本试验成功制备的VP60蛋白及多克隆抗体,为预防RHDV2及RHDV2 VP60的功能研究奠定了良好基础。; 谭永贵朱杰郭慧敏吴巧梅陈宗艳李传峰刘光清; 关键词：原核表达多克隆抗体

新型兔出血症病毒研究进展被引量：5: 2016年; 兔出血症病毒属于杯状病毒科,兔病毒属的成员之一,能够引起家兔的典型兔病毒性出血症。2010年,研究学者首次在法国发现一例非典型兔出血症疫情,该病原与经典兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)基因序列差异明显,被称为RHDV2。研究发现该病原能够与经典RHDV发生部分交叉免疫保护,该病原能够感染幼龄家兔而且是唯一一个能够跨物种感染的兔病毒属成员。该病的迅速传播,严重威胁了以兔为中心的生态平衡。目前,该病毒尚未在国内有报道,但是不排除潜在的隐性感染。因此,对该病原的分析研究对于控制该病原的传播具有非常重大的意义。; 谭永贵缪秋红吴巧梅朱杰郭慧敏刘光清

基于SYBR GreenⅡ的荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔出血病毒方法的建立: 引言兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)、兔病毒属(Lagovirus)。该病毒可引发兔发生急...; 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清; 文献传递

鹅呼肠孤病毒GRV-LA16株的分离鉴定被引量：2: 2017年; 为探明安徽省某养鹅场60日龄鹅出现的软脚,排白色粪便,严重者导致鹅死亡的原因,对病死鹅进行剖检,发现其以肝脏肿大,脾脏肿大和坏死以及肺脏充血、出血为主要特征。对分离毒株进行RT-PCR扩增试验、序列分析及动物回归试验,结果表明,该分离毒株为鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV),命名为GRV-LA16株,其ELD50为10-5.7/0.2 m L。病理组织切片结果显示,与对照组相比,肺泡壁胀破融合,毛细血管扩张出血,且肺泡腔有红色丝网状纤维素渗出物。σC基因测序结果分析表明,其与鸭呼肠孤病毒σC基因同源性为87%。GRV-LA16与鸭呼肠孤病毒亲缘关系较近,为同一拓扑群,而与经典的禽呼吸肠孤病毒(Avian orthoreoviruses,ARV)、GRV、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)处于不同拓扑群。; 吴巧梅李传峰丁明洋朱杰谭永贵李琦刘光清陈宗艳

新型鸭细小病毒病毒样颗粒的表达与鉴定: 引言鸭短喙-侏儒综合症是由新型鸭细小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)引起的一种以鸭生长发育障碍,鸭喙萎缩,舌头肿胀外垂,胫骨短小质脆,行走困难为主要特征的鸭传染病。该病于2014年在我国大陆首...; 李琦李传锋唐井玉刘柱宫晓华吴巧梅谭永贵刘光清

一种新型鸭呼肠孤病毒SYBR GreenⅡ荧光定量PCR方法的建立被引量：6: 2016年; 该研究旨在建立一种快速、敏感和特异性检测新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）的荧光定量PCR诊断方法。本实验以感染新型鸭呼肠孤病毒的鸭组织RNA提取物为模板,根据Gen Bank数据库中呼肠孤病毒S1基因全序列,设计合成了一对特异性引物,PCR扩增基因片段,将其克隆至p ET-30a载体,重组质粒测序并进行同源性分析;以阳性质粒为模板,建立SYBR Green II荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性和特异性检测。经测序证实扩增片段与预期目的片段相符,所建立的SYBR Green II荧光定量PCR检测S1的反应在101～108 copies/u L之间具有良好的线性关系,反应的检出下限为10 copies/μL,而H5型禽流感病毒、H9型禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、C型鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鹅细小病毒、鸭瘟病毒等病毒的检测为阴性,表明该方法敏感、特异。本研究成功建立了SYBR Green II荧光定量PCR检测新型鸭呼肠孤病毒的方法,为新型鸭呼肠孤病毒致病机制和机体免疫保护机制的研究提供了技术平台。; 丁明洋戚伟强陈宗艳朱杰吴巧梅缪秋红李传峰吴润刘光清; 关键词：新型鸭呼肠孤病毒荧光定量PCR 熔解曲线

鸭呼肠孤病毒感染性克隆的构建及拯救病毒的体外生物学特性分析: 新型鸭呼肠孤病毒是一种引起鸭传染病的重要致病因子,为10节段的双链RNA病毒,目前缺乏反向遗传操作平台以研究其发病机理、宿主谱改变等。本文建立10质粒全长系统,其中引入M2节段1189-1194位引入酶切位点HindII...; 吴巧梅丁明洋李传峰刘光清陈宗艳; 关键词：感染性克隆病毒拯救; 文献传递

禽源呼肠孤病毒S1基因节段分子生物学研究进展被引量：9: 2017年; 呼肠孤病毒广泛的宿主性以及自身基因组的结构特征使其在进化过程中呈现遗传多样性,新型禽源呼肠孤病毒在此过程中不断出现,引起家禽和水禽养殖业的严重经济损失。其中,关于S1基因节段的科学研究对于理解病毒致病性改变以及疫苗开发有关键作用。因此,本文拟就禽源呼肠孤病毒的发生、S1基因的结构及其编码的非结构蛋白P10、P17和结构蛋白σC的生物学功能最新研究进展作一概述。; 吴巧梅刘光清陈宗艳

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