李松建
- 作品数：13 被引量：91H指数：5
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 奶牛乳房炎无乳链球菌Fc-Sip和金黄色葡萄球菌Fc-FnBPB-ClfA亚单位疫苗的免疫试验研究被引量：5
- 2020年
- 为探究由IgG FcRn介导奶牛乳房炎无乳链球菌(S.agalactiae,Sgc)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,Sau)保护性抗原亚单位疫苗的免疫效果,在本实验室前期研究基础上,本研究按体积11的比例将Sgc的Fc-Sip和Sau的Fc-FnBPB-ClfA两种蛋白分别与1%的盐酸左旋咪唑(1%LH)充分混合,制备两种亚单位疫苗。将即将干奶(妊娠220 d)、CMT试验为"++"以上的奶牛随机分为4组,分别将Fc-Sip+Fc-FnBPB-ClfA二联亚单位疫苗(A组)、Fc-Sip亚单位疫苗(B组)、Fc-FnBPB-ClfA亚单位疫苗(C组)通过首次肌肉免疫和二次乳头管灌注免疫方式进行免疫试验。通过免疫前后对乳样细菌分离、体细胞数测定及免疫血清抗体滴度测定,评价上述亚单位疫苗的免疫效果。结果显示,免疫前免疫组(A、B、C)奶牛的乳样细菌分离率分别为80%、90%、80%,其中Sgc检出率分别为20%、30%、10%,Sau检出率分别为30%、20%、10%;首免90 d后3个免疫组奶牛乳样细菌分离率分别降至20%、20%、40%,其中Sgc的检出率分别降至0、0、10%,Sau的检出率分别降至10%、10%、0,对照组免疫前后以上各项检测无明显变化。使用利拉伐牛奶体细胞检测仪检测免疫前后试验奶牛乳样中的体细胞数,免疫前免疫组(A、B、C)奶牛体细胞数均值分别为6.19×105个/mL、5.16×105个/mL、5.49×105个/mL,首免90 d后3个免疫组奶牛乳样中体细胞数均值分别为2.05×105个/mL、2.04×105个/mL、2.52×105个/mL,而对照组奶牛乳样体细胞数与免疫前无明显变化。检测首免后0、7 d、14 d、28 d、60 d、90 d的血清抗体滴度,结果显示,首免后7 d,免疫组(A、B、C)80%的奶牛血清抗体滴度为11024;第14 d后,免疫组(A、B、C)90%奶牛血清抗体滴度达到12048;第28 d后,免疫组(A、B、C)80%奶牛血清抗体滴度在14096~18192,比对照组平均上升3~4个抗体滴度,对照组奶牛血清抗体滴度一直保持在1256~1512。综合分析以上试验结果显示免疫A组(Fc-Sip+Fc-FnBP
- 李松建周雅坪吕天星杜琳郭婷郝永清
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌金黄色葡萄球菌亚单位疫苗
- 四种分子伴侣促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中可溶性表达研究被引量：10
- 2018年
- 为研究分子伴侣是否可以促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性,应用原核表达和Western blot方法进行检测,结果表明:1)牛支原体一个膜蛋白M1的截短片段在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式表达,改变诱导时间、温度以及诱导剂浓度均未改变其表达形式;2)将4种分子伴侣pGKJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16分别与含有目的蛋白的重组质粒在表达工程菌(BL21)中共表达,当加入终浓度为1.0mmol/L IPTG以及0.5mg/mL L-阿拉伯糖或5.0ng/mL四环素的诱导剂,37℃诱导5h,发现分子伴侣pGTf2和pG-KJE8能显著提高M1截短片段的可溶性表达,其他2种分子伴侣未改变M1的表达形式;3)可溶性表达的M1截短片段与牛支原体阳性血清可以发生特异性反应。因此,研究发现2种分子伴侣可以使牛支原体膜蛋白在大肠杆菌表达系统中以可溶性形式表达,但未改变其生物活性,该研究结果可为建立牛支原体有效的血清学诊断方法及亚单位疫苗的研制奠定基础。
- 王艳芳王艳芳张新竹李松建李松建黄海碧黄海碧
- 关键词：分子伴侣牛支原体膜蛋白可溶性表达原核表达系统
- siRNA干扰TLR4影响两种酵母多糖处理RAW264.7细胞NF-κB/MAPK信号通路的激活
- 2024年
- 为了探究Toll样受体4(TLR4)在两种酵母多糖激活NF-κB/MAPK信号通路中发挥的作用,本研究利用CCK8法检测酵母β-葡聚糖和甘露聚糖的细胞毒性,并利用多种方法筛选效果最佳的TLR4 siRNA,然后利用ELISA、RT-qPCR方法检测相关炎症因子的分泌量及其m RNA表达量的变化,最后通过Western-blot检测NF-κB/MAPK信号通路关键蛋白磷酸化水平。结果显示,2.5~20μg/m Lβ-葡聚糖及2.5~50μg/m L甘露聚糖对RAW264.7细胞的活力没有影响;TLR4 siRNA-2可以高效敲低TLR4 m RNA和蛋白表达水平;两种酵母多糖处理敲低TLR4的细胞后,IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α、NO分泌量及IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α、i NOSm RNA表达水平显著下降,NF-κB/MAPK信号通路关键蛋白p-P65、p-P38、p-ERK1/2、p-JNK和p-IκB水平显著降低。结果表明,两种酵母多糖可以通过TLR4调控NF-κB/MAPK信号通路及相关细胞因子的分泌,最终确定TLR4是两种酵母多糖发挥免疫调节作用的重要受体。
- 杜蕊陈灰张宇飞李松建李松建李薛强徐子萱薛晨刘大程
- 关键词：酵母Β-葡聚糖RAW264.7细胞
- 复合菌培养物对奶牛生产性能、非特异性免疫功能及抗氧化能力的影响
- 2024年
- 本试验旨在研究复合菌培养物对奶牛生产性能、非特异性免疫功能及抗氧化能力的影响。试验选择2胎次以及泌乳天数[(92.1±25.6)d]、产奶量[(36.8±4.6)kg/d]和乳蛋白质含量[(2.98±0.48)%]相近的健康荷斯坦奶牛40头,随机分为2组,每组20头。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中添加0.23 kg/d的复合菌培养物。预试期7 d,正试期60 d。试验期间每日记录奶牛采食量和产奶量;每20 d采集1次牛奶测定乳成分;正试期开始和结束当天采集奶牛血液,测定乳成分以及免疫和抗氧化指标。结果表明:1)试验第41~60天,对照组奶牛平均日采食量比试验第1~20天降低了2.92%,而试验组提高了3.12%。试验第21~40天和第41~60天,试验组奶牛产奶量分别比对照组提高了2.17(P<0.01)和2.42 kg/d(P<0.05)。试验期间,2组乳蛋白质和非脂乳固体含量均无显著差异(P>0.05)。2)试验第60天,试验组奶牛血清溶菌酶(LZM)含量、酸性磷酸酶(ACP)活性、淋巴细胞增殖能力和中性粒细胞吞噬能力均显著高于对照组(P<0.05),并且试验组奶牛血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性分别比对照组显著提高了11.54%、22.09%和17.18%(P<0.05),血清丙二醛(MDA)含量比对照组显著降低了35.38%(P<0.05)。结果提示,复合菌培养物能够显著提高奶牛采食量和产奶量,改善奶牛非特异性免疫功能,增强机体抗氧化能力。
- 李薛强王岩刘世雄李松建杨岚杨岚高民胡红莲高民
- 关键词：奶牛非特异性免疫功能抗氧化能力
- 无乳链球菌CP+Sip-FbsA偶联蛋白免疫学特性的研究被引量：4
- 2016年
- 为研究无乳链球菌荚膜多糖(CP)与表面免疫相关蛋白(Sip)和纤维蛋白原结合蛋白(FbsA)串联表达蛋白的偶联物CP+Sip-FbsA对无乳链球菌性奶牛乳房炎的免疫保护效果,本研究将纯化的CP+Sip-FbsA偶联物与铝盐佐剂混合,免疫泌乳期Wistar大鼠。通过ELISA方法进行血清效价检测和特异性抗体动态监测,以及T淋巴细胞增殖试验、流式细胞术、全血吞噬调理试验和大鼠乳腺攻毒保护试验对其免疫学特性进行研究。结果表明:与对照组相比,CP+Sip-FbsA免疫组血清中的抗体水平明显增高,T淋巴细胞增殖试验、流式细胞术、全血吞噬调理试验、大鼠乳腺攻毒保护试验显示CP+Sip-FbsA免疫组免疫效果高于其他免疫组和PBS对照组。本研究结果表明,CP+Sip-FbsA偶联物对无乳链球菌性乳房炎免疫效果较好,为进一步研究无乳链球菌亚单位疫苗提供了实验依据。
- 杜琳吕天星赵红梅李松建周雪崔健郝永清
- 关键词：无乳链球菌
- IgG FcRn介导奶牛乳房炎无乳链球菌和金黄色葡萄球菌保护性抗原亚单位疫苗的研究
- 新生儿的Fc受体(FcRn)对于向胎儿和新生儿提供具有保护性的母源抗体具有至关重要的作用,同时具有促进局部保护性免疫的功能。FcRn还可以将特异性IgG与抗原结合的抗原-抗体复合物转运到粘膜的固有层,抗原复合物通过抗原递...
- 李松建
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌金黄色葡萄球菌亚单位疫苗
- 文献传递
- 微生物发酵饲料对奶牛瘤胃发酵功能及饲粮营养物质体外消化率的影响被引量：28
- 2021年
- 本试验旨在用体外法评价不同添加水平微生物发酵饲料对奶牛瘤胃发酵功能的影响,确定其适宜添加水平,并在此基础上研究微生物发酵饲料对饲粮营养物质体外消化率的影响。采用体外发酵试验,培养底物的精粗比为5∶5,微生物发酵饲料添加水平分别为0(对照组)、3%、5%、7%、9%。结果表明:1)7%组的产气量及总挥发性脂肪酸(TVFA)、乙酸、丙酸、丁酸、氨态氮(NH 3-N)、菌体蛋白(BCP)浓度平均值显著高于对照组(P<0.05),微生物发酵饲料适宜添加水平为7%。2)添加7%微生物发酵饲料提高了饲粮干物质体外消化率(IVDMD)、粗蛋白质体外消化率(IVCPD)、中性洗涤纤维体外消化率(IVNDFD)、酸性洗涤纤维体外消化率(IVADFD),分别比对照组提高0.80%、1.43%、3.76%、1.98%(P>0.05)。由此可见,饲粮添加7%微生物发酵饲料可促进瘤胃发酵功能,提高饲粮营养物质体外消化率。
- 徐子萱李冬芳于春微李松建高民高民胡红莲
- 关键词：微生物发酵饲料体外消化率奶牛
- 华北地区牛源无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性被引量：22
- 2016年
- 【目的】了解华北地区牛源无乳链球菌的生物学特性。【方法】在2012到2015年间从内蒙古自治区、河北、北京等地隐性乳房炎557份奶牛乳样中分离、收集无乳链球菌。采用纸片扩散法和PCR的方法对这些菌株分别进行耐药谱测定、荚膜分子分型、表面蛋白基因及毒力因子的检测。【结果】无乳链球菌的分离率为5.03%,其药物敏感性与其他地区无明显差别。分离到的28株无乳链球菌均属于荚膜Ia型,且毒力基因基本相同并且其表面蛋白均属于未定型。【结论】华北不同地区的无乳链球菌有相似的药物敏感性和毒力基因。为奶牛乳房炎无乳链球菌疫苗的研制及药物防治提供理论依据。
- 杜琳周雪赵红梅吕天星崔健李松建史晓娜郝永清
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌血清型毒力因子
- 复合菌培养物及酵母类多糖对羔羊免疫功能影响的研究被引量：7
- 2023年
- 为研究复合菌培养物及复合酵母多糖对羔羊免疫功能的影响,本实验选取150只40~50日龄健康羔羊,随机分为5组,在实验开始时同时给各组羊免疫O型口蹄疫(FMD)疫苗并饲喂实验饲料,对照组饲喂基础饲粮,实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组在基础饲粮上分别添加复合菌培养物(50 g/kg)、复合酵母多糖(10 g/kg)、β-葡聚糖和甘露聚糖均为2 g/kg。分别于实验期第1 d、30 d和60 d采血,分别采用ELISA法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-2、IL-4、IL-6、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、干扰素-γ (IFN-γ)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)含量及O型口蹄疫病毒(FMDV)抗体效价(1 d、15 d和30 d)。结果显示,第1 d和30 d各组各检测指标差异不显著;第60 d,与对照组相比,Ⅰ组羔羊血清中TNF-α、IFN-γ、 IL-4、IL-1β、IL-2、IL-6及LZM、ACP含量及O型FMDV抗体效价均显著升高(P<0.05);Ⅱ组羔羊血清中LZM、IL-4及ACP含量显著提高(P<0.05);Ⅲ组羔羊血清中IL-1β、IL-6、IL-4、IFN-γ、LZM、ACP含量及O型FMDV抗体效价均显著升高(P<0.05);Ⅳ组羔羊血清中IL-4含量显著升高(P<0.05)。分别对上述时间点采集的抗凝血裂解红细胞后加入各荧光标记的抗体,采用流式细胞术检测各组羊外周血T淋巴细胞亚群百分比及CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值。结果显示,与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组羔羊外周血CD4^(+)T淋巴细胞的百分比显著升高(P<0.05),Ⅰ组和Ⅱ组羔羊外周血CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞比值显著升高(P<0.05)。综上所述,本研究首次证实添加复合菌培养物、复合酵母多糖和β-葡聚糖能够在一定程度上提高羔羊的天然免疫、体液免疫及细胞免疫反应,从而提高羔羊的抗FMD能力,且以复合菌培养物的效果最优,为复合菌培养物在羔羊养殖中的应用提供参考依据。
- 邢杰李松建乔林慧马嘉彬陈灰胡红莲胡红莲高民张剑柄
- 关键词：羔羊
- 鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2的表达及其抗菌特性
- 2024年
- 为建立鼠李糖乳杆菌细菌素替抗、防腐应用平台,探究鼠李糖乳杆菌细菌素的抗菌特性,利用DNASTAR软件对鼠李糖乳杆菌细菌素进行全基因序列分析,确定了鼠李糖乳杆菌细菌素的主要调控基因为wo-a/2,利用原核表达的方法表达细菌素WO-A/2,并对WO-A/2的可溶性、诱导表达条件、免疫原性、溶血活性、抑菌特性进行了分析。结果表明,作者成功构建了pET-32a-wo-a/2质粒,表达了鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2,其主要以包涵体的形式存在。当表达pET-32a-wo-a/2质粒的菌株接种于含Amp^(+)的LB液体培养基中培养,以终浓度1.0 mmol/L的IPTG诱导8 h后,细菌素WO-A/2的表达量最大。通过双层牛津杯血琼脂平板法验证表明,不同浓度的鼠李糖乳杆菌细菌素WO-A/2均无溶血活性。采用双荧光染色法,通过激光共聚焦显微镜观察到细菌素WO-A/2可促使金黄色葡萄球菌凋亡。该研究为鼠李糖乳杆菌细菌素成为安全可靠的生物替抗剂提供了依据。
- 韩岳峰焦明马慧君李松建金山
- 关键词：鼠李糖乳杆菌细菌素抗菌肽感受态细胞
