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RNA恒温扩增实时检测技术与荧光定量PCR联合检测肺泡灌洗液对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值: 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(real-time simultaneous amplification and testing,SAT-TB)和荧光定量PCR(Fluorescence quantitativ...; 王静刘立宾岳永宁胡钰卿范大鹏李浩张艳朱敏; 关键词：肺结核核酸检测支气管肺泡灌洗液

结核重症监护室中胞内分枝杆菌肺病与脓肿分枝杆菌肺病的临床特征比较分析: 目的分析结核重症监护室(ICU)中胞内分枝杆菌肺病与脓肿分枝杆菌肺病患者的临床特征,为临床诊治提供依据.方法回顾性分析2012年1月至2017年5月杭州市红十字会结核ICU收治的非结核分枝杆菌肺病(NTM)患者74例...; 陈园园毛敏杰范大鹏鲍志坚朱敏; 关键词：脓肿分枝杆菌

新登记肺结核菌阳患者耐药情况分析: 目的：分析新登记肺结核患者的初始耐药情况,为进一步控制肺结核的发病和流行提供依据. 方法：对杭州市红十字会医院2012年新登记的活动性肺结核患者进行痰培养获得768株分枝杆菌菌株,对培养阳性菌株进行菌型鉴定并用...; 王静朱敏张艳岳永宁胡钰卿范大鹏竺祖军刘立宾张颖; 关键词：肺结核初始耐药防控策略

结核重症监护室中胞内分枝杆菌肺病与脓肿分枝杆菌肺病的临床特征比较分析被引量：4: 2018年; 目的分析结核重症监护室（ICU）中胞内分枝杆菌肺病与脓肿分枝杆菌肺病患者的临床特征，为临床诊治提供依据。方法回顾性分析2012年1月至2017年5月杭州市红十字会结核ICU收治的非结核分枝杆菌肺病（NTM）患者74例的临床资料。其中脓肿分枝杆菌肺病患者54例，胞内分枝杆菌肺病患者16例，鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌肺病患者各2例。对胞内分枝杆菌及脓肿分枝杆菌肺病复合群感染重症患者的临床特征、影像学表现、治疗与预后等情况进行分析。采用SPSS21．0软件对数据进行分析。采用Graph Pad PrismV5．01进行生存曲线分析。结果74例NTM肺病患者中，脓肿分枝杆菌感染率为72．87％（54／74），胞内分枝杆菌的感染率为21．62％（16／74）。胞内分枝杆菌肺病患者的年龄和入住ICU时间明显低于脓肿分枝杆菌肺病患者（t=-2．729和-6．150，P〈0．05或〈0．01），但两组性别分布、APACHEII评分比较，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。在基础疾病方面，胞内分枝杆菌肺病患者慢性阻塞性肺疾病（COPD）的比例明显低于脓肿分枝杆菌肺病患者（x2=3．902，P〈0．05），而支气管扩张比例明显多于脓肿分枝杆菌肺病患者（x2=23．888，P〈0．01）。在合并症方面，脓肿分枝杆菌肺病患者合并脑卒中后遗症、帕金森症等中枢神经系统疾病（x2=14．872，P〈0．01）及糖尿病（x2=3．902，P〈0．05）的比例显著高于胞内分枝杆菌肺病患者，而合并咯血的比例明显低于胞内分枝杆菌肺病患者（x2=9．717，P〈0．01）。胞内分枝杆菌肺病患者入住ICU主要原因为呼吸衰竭（93．75％）和感染性休克（6．25％），而脓肿分枝杆菌肺病患者为呼吸衰竭（90．74％）、心衰竭（11．11％）和肾衰竭（1．85％），两组患者入住ICU原因比较，差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。胞内分枝杆�; 陈园园毛敏杰范大鹏鲍志坚朱敏; 关键词：结核脓肿分枝杆菌

新登记肺结核菌阳患者耐药情况分析被引量：4: 2014年; 目的分析新登记肺结核患者的初始耐药情况，为进一步控制肺结核的发病和流行提供依据。方法对杭州市红十字会医院2012年新登记的活动性肺结核患者进行痰培养获得768株分枝杆菌菌株，对培养阳性菌株进行菌型鉴定并用比例法进行药物敏感性试验。结果2012年非结核分枝杆菌（NTM）分离率为4．42％，结核分枝杆菌（MTB）初始耐药率13．35％，耐多药率4．50％，耐单药率从高到低为INH（8．31％）、RFP（7．22％）、SM（6．40％）和EMB（2．45％）。耐药率随年龄增长呈下降趋势，16岁～组人群初始耐药率明显高于61岁及以上年龄组。结论青壮年肺结核患者初始耐药率高，应加强对重点人群的管理及随访。; 王静朱敏张艳岳永宁胡钰卿范大鹏竺祖军刘立宾张颖; 关键词：肺结核耐药性抗结核药物

结核分枝杆菌rHpsX-MPT64融合蛋白的制备与临床应用被引量：5: 2014年; 目的构建结核分枝杆菌融合基因hpsX-mpt64原核表达系统,建立基于rHpsX-MPT64为包被抗原酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)并对其用于结核患者血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法PCR扩增并克隆结核分枝杆菌hpsX和mpt64基因,以连接引物PCR构建hpsX-mpt64人工融合基因,建立上述目的基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的重组蛋白,Western Blot检测其免疫性。分别以rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原,建立相应ELISA检测150例健康人群、73例非结核肺部疾病患者和277例活动性肺结核患者血清标本中抗体。结果克隆的hpsX和mpt64及构建的hpsX-mpt64融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表达量分别为细菌总蛋白的20.3%、28.5%和26.5%,其提纯物电泳后均显示单一条带。基于rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA对涂阳患者血清抗体检出率明显高于涂阴患者(P<0.01),检测活动性结核患者血清抗体的敏感性分别为59.2%、61.4%和74.4%,特异性分别为90.6%、83.9%和91.0%,rHpsX-MPT64为包被抗原敏感性明显高于rHpsX和rMPT64抗原(P<0.01)。结论基于rHpsX-MPT64为包被抗原的ELISA有较高的敏感性和特异性,重组融合蛋白为抗原有助于进一步提高检测结核病血清学诊断的敏感性。; 张艳范大鹏岳永宁杜蓬孙爱华; 关键词：结核分枝杆菌酶联免疫吸附试验

RNA恒温扩增实时检测技术与荧光定量PCR联合检测肺泡灌洗液对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值: 目的：通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值. 方法：采集2014年11月-2016年5月...; 王静刘立宾岳永宁胡钰卿范大鹏李浩张艳夏强朱敏; 关键词：肺结核支气管肺泡灌洗液核酸扩增技术荧光定量PCR

结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时检测和核酸检测对涂阴肺结核病早期诊断的价值: 2019年; 目的评价两种分子诊断技术对涂阴肺结核的早期诊断价值。方法选择疑似肺结核患者726例,分为涂阴肺结核患者和非肺结核患者两组。所有入组患者均行纤维支气管镜检查并收集灌洗液10~15mL,并进行SAT-TB、结核/非结核分枝杆菌核酸快速检测和960快速培养(BACTEC 960)。以最终的临床诊断为诊断标准,计算三种检测方法的诊断效能。结果结核/非结核检测的诊断效能最高,尤登指数为0.52,其次为SAT-TB,尤登指数为0.51,960快速培养尤登指数为0.47。结论在时效性及诊断效能方面,两种分子检测技术均优于传统的960快速培养法,其中结核/非结核检测的诊断效能最高。; 范大鹏张艳陈园园鲍志坚; 关键词：涂阴肺结核分子检测技术核酸扩增技术灌洗液

交叉引物扩增技术检测痰样本中结核分枝杆菌的应用价值被引量：6: 2016年; 目的采用ROC曲线分析法评估交叉引物扩增技术(CPA)直接检测临床痰样本结核分枝杆菌的检测效能,为临床应用提供参考依据。方法选取肺结核患者225例和非肺结核患者82例,采用CPA进行检测,并同时使用涂片抗酸染色、罗氏培养法、荧光定量PCR技术(FQ-PCR)三种最常用的实验室诊断方法作为对照。根据每种方法对样本检测结果的灵敏度和特异度,以受试者工作曲线(ROC)进行分析比较。结果去除非结核分枝杆菌的26个样本,以临床诊断为金标准,涂片抗酸染色、罗氏培养法、FQPCR技术和CPA的灵敏度分别为46.73%(93/199),63.32%(126/199),69.85%(139/199),70.35%(140/199),假阳性率分别为0%(0/82),0%(0/82),1.22%(1/82),1.22%(1/82)。ROC曲线下的面积分别为0.729、0.817、0.841、0.843,均P<0.01。结论 ROC曲线分析结果显示,交叉引物扩增技术诊断结核病具有较好的准确性,该方法可作为结核病的实验室诊断方法。; 王静刘立宾岳永宁胡钰卿范大鹏李浩竺祖军张艳夏强朱敏; 关键词：结核分枝杆菌 ROC曲线

基于DPO的四重荧光PCR检测常见分枝杆菌方法的建立与应用被引量：1: 2012年; 目的利用多重荧光PCR技术，建立一种快速、准确、特异的检测常见分枝杆菌的方法。方法以分枝杆菌16SrRNA作为检测靶基因，设计双启动寡核苷酸（DPO）引物和TaqMan探针，探针的5’端分别用FAM、ROX、HEX和JOE进行荧光标记，3’端标记淬灭荧光。通过对4种分枝杆菌标准株基因组DNA的扩增，评价多重荧光PCR方法的特异性和灵敏度。采用建立的多重荧光PCR方法，采用该方法检测2010年6至12月杭州市红十字会医院68例结核科住院患者清晨痰液标本，结果与细菌培养和抗酸染色镜检进行比较。采用，检验比较3种方法的阳性率。结果该方法可准确、特异地鉴定结核分枝杆菌和3种常见非结核分枝杆菌，检测灵敏度均为1×10^cfu／ml。对68份痰液标本进行检测，结果显示31份检测结果阳性，阳性率45．6％，明显高于涂片染色镜检（阳性率14．7％），差异具有统计学意义（x2=15．4，P〈0．05），其中28例为结核分枝杆菌，1例为鸟分枝杆菌，2例为胞内分枝杆菌，与细菌培养鉴定方法一致。1例培养阳性而PCR检测结果阴性标本经16SrRNA扩增测序鉴定为龟分枝杆菌。结论本研究建立的多重荧光PCR方法敏感、特异、快速，能有效检测结核分枝杆菌和常见非结核分枝杆菌，可用于分枝杆菌感染者的实验室快速诊断。; 陈光吴盛海余道军徐丽慧范大鹏王贤军; 关键词：分枝杆菌属多重聚合酶链反应 DNA引物

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范大鹏

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