孙静 作品数:9 被引量:34 H指数:3 供职机构: 宁夏大学农学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 更多>>
超高压导致芽孢亚致死损伤进而提高芽孢热敏感性 被引量:3 2017年 分别使用150、350、550 MPa的压力在23℃下对枯草杆菌芽孢进行超高压处理,检测处理后芽孢样品的热敏感性、OD_(600)值和2,6-吡啶二羧酸(DPA)释放情况,并进行透射电镜观察。3个压力水平均能快速提高芽孢的热敏感性,150 MPa使得芽孢OD_(600)值降低、DPA显著释放、芽孢皮层明显水解、芽孢显著萌发。然而,使用350 MPa和550 MPa处理后,芽孢OD_(600)值变化和DPA释放不显著、芽孢皮层水解不明显、芽孢萌发不显著。研究结果表明:350 MPa和550 MPa处理导致了芽孢的亚致死损伤,而不是芽孢萌发,这种亚致死损伤增强了芽孢的热敏感性,并可能是高压热处理杀灭芽孢的原因之一。 孙静 张津瑜 胡小松 张燕 杜文斌 章中关键词:芽孢 超高压 高温蒸煮结合酶解改性红枣膳食纤维的研究 前言枣皮富含纤维素,但水溶性膳食纤维(SDF)含量低,通过改性可提高其SDF含量,改善红枣膳食纤维理化特性,为开发膳食纤维产品、功能性食品添加剂提供参考依据。目的探讨红枣膳食纤维的高温蒸煮结合酶解改性工艺。方法以枣渣为原... 邵佩兰 孙静 朱晓艳 马奇虎 郭晓丹关键词:膳食纤维 高温蒸煮 纤维素酶 改性 文献传递 高压热杀菌处理对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶活力的影响 被引量:4 2018年 高压热杀菌处理(HPTS)下芽孢皮层肽聚糖水解是造成细菌芽孢死亡的重要原因,芽孢自身皮层裂解酶活力变化对皮层肽聚糖水解有直接影响。本文从枯草杆菌芽孢中提取了皮层裂解酶,先研究了磷酸钠浓度、pH、温度和压力对皮层裂解酶活力的影响,在此基础上研究了HPTS对该酶活力的影响。结果发现,皮层裂解酶的最适磷酸钠浓度为0.05 mol/L,当磷酸钠浓度为0.35 mol/L时,皮层裂解酶活力较低;当pH为7时,皮层裂解酶活力最强,偏酸或偏碱性条件下,活力均有所降低;在4~44℃时皮层裂解酶均具活力,酶活变化无明显规律,但当温度升至68℃时皮层裂解酶基本失活;在150~530 MPa压力范围内,压力对皮层裂解酶活性基本无影响,然而HPTS处理时(530 MPa、68℃、15min),皮层裂解酶基本失活,而皮层裂解酶是芽孢中唯一能特异性地水解皮层肽聚糖的酶,由此可推测HPTS处理下皮层肽聚糖发生了非酶水解。 章中 孙静 张津瑜 郭洪伟 贺晓光关键词:枯草杆菌 芽孢 肽聚糖 超高压结合化学萌发诱导剂对枯草杆菌芽孢的灭活作用 被引量:5 2016年 采用化学萌发诱导剂(AGFK、肌苷、L-丙氨酸、DPA)来诱导枯草杆菌芽孢萌发,然后用超高压处理将萌发的芽孢杀灭,用平板菌落计数法、分光光度计和相差显微镜检测诱导剂对该芽孢的萌发诱导效果,并用透射电镜观察超高压处理前后芽孢内部结构的变化。结果表明:以上诱导剂能迅速诱导芽孢萌发,使用DPA时,芽孢萌发率约为95%,组合使用DPA和营养素时,芽孢萌发率约为87%,单独使用DPA时萌发率更高,这一特异现象表明目前关于芽孢萌发机制的认识还不完善。萌发后芽孢的内部结构变成了类似营养体的结构,再经压力处理后其内部结构严重受损,超高压结合化学萌发诱导剂能有效杀灭绝大部分芽孢。 章中 孙静 杜文斌 王一晓关键词:超高压 芽孢 枯草杆菌 芽孢皮层肽聚糖水解物RP-HPLC法分析条件优化 2017年 通过试验确定RP-HPLC法分析芽孢皮层肽聚糖水解物的最佳条件如下:在Welch Ultimate AQ-C18色谱柱上,柱温为30℃,流速为1 m L/min,检测波长为206 nm,洗脱时间为120 min,以甲醇和0.05 mol/L磷酸盐缓冲液(p H=4.31)做流动相,在0 min^5 min时使用100%磷酸盐缓冲溶液,在5 min^120 min时流动相中的甲醇浓度从0梯度增加到30%。结果表明:用RP-HPLC法分析芽孢皮层肽聚糖水解物是可行的,为研究高压热处理下芽孢皮层肽聚糖支架水解机理,并进一步阐明高压热处理杀灭细菌芽孢的机理提供了研究方法支撑。 杜文斌 杨建兴 师静 孙静 章中关键词:RP-HPLC 芽孢 皮层 肽聚糖 水解物 芽孢皮层裂解酶的提取与SDS-PAGE分析 被引量:3 2018年 使用2,6-吡啶二羧酸(DPA)、L-丙氨酸、肌苷等诱导芽孢萌发,从萌发液中提取芽孢皮层裂解酶。提取的芽孢皮层裂解酶经超滤浓缩后进行SDS-PAGE垂直板电泳分析。研究发现:DPA、L-丙氨酸、肌苷以及L-丙氨酸结合肌苷对枯草芽孢杆菌芽孢均有诱导萌发的作用,且DPA诱导枯草芽孢杆菌芽孢萌发效果最好。进行SDS-PAGE电泳时,进样量为15μL,分离胶浓度为10%的凝胶板跑出的蛋白条带分离的较好,凝胶板上有4条蛋白条带,通过蛋白质分子量标准曲线可得出,目标蛋白分子量大约分别为:61.10、48.64、43.25、31.28 k Da。本研究初步提取纯化了皮层裂解酶,为后继进一步提纯皮层裂解酶、研究HPTS对该酶活性和结构的影响提供试验材料,有助于阐明高压热处理下芽孢死亡的机理,推动HPTS技术在食品工业中的应用。 孙静 贺晓光 张津瑜 杜文斌 章中关键词:枯草芽孢杆菌 芽孢 SDS-PAGE 高温蒸煮结合酶解改性枣渣膳食纤维 被引量:18 2017年 为探讨高温蒸煮结合纤维素酶酶解改性枣渣水不溶性膳食纤维的工艺。以枣渣为原料,采用高温蒸煮、纤维素酶酶解改性枣渣水不溶性膳食纤维,以水溶性膳食纤维得率为指标,在单因素实验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计,通过响应面法优化高温蒸煮结合酶解改性工艺条件。结果表明:枣渣水不溶性膳食纤维经120℃高温蒸煮60 min,纤维素酶改性枣渣水不溶性膳食纤维最佳工艺条件为酶浓度0.55%、p H4.6、料液比1∶27 g/m L、酶解温度43℃,酶解时间2.5 h,在此条件下水溶性膳食纤维得率为20.03%±0.58%,与模型预测值20.37%较为一致。响应面回归方程与实验结果拟合性好,说明此模型合理可靠,可为枣渣水不溶性膳食纤维改性的工业化应用提供一定参考。 孙静 邵佩兰 徐明 赵宇慧 杜文斌 贺晓光关键词:枣渣 不溶性膳食纤维 高温蒸煮 酶解 响应面 枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的分离纯化以及酶学结构分析 被引量:1 2019年 本文采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和凝胶过滤的方法对皮层裂解酶粗酶液进行分离纯化。结果表明:当硫酸铵的饱和度为60%时,大部分皮层裂解酶被聚集沉淀下来,总蛋白及皮层裂解酶活力较高,酶的比活力为158.22 U/mg,回收率为84.17%,进一步经SP-sephadex C-25离子交换层析法纯化后该酶的比活力为218.31 U/mg,回收率为68.43%,最后使用Superdex 75凝胶过滤进行分离纯化,得到了电泳纯的皮层裂解酶,并且酶的比活力为1690.75 U/mg,回收率为19.45%。纯度为粗酶液的14.98倍,纯化出的皮层裂解酶分子量为61.1 kDa。运用傅里叶光谱(FTIR)对枯草杆菌芽孢皮层裂解酶酶学结构分析,枯草杆菌皮层裂解酶在3415、1665、1080、528 cm^(-1)波数处均有吸收峰,其中在1665 cm^(-1)处有明显的酰胺I带,应用二阶导数和曲线拟合的方法研究枯草杆菌芽孢皮层裂解酶的二级结构,发现枯草杆菌皮层裂解酶中含12.80%的α-螺旋、31.56%的β-折叠、44.97%的β-转角、以及10.68%的无规卷曲。本文为研究HPTS杀灭芽孢的机理提供了实验材料。 曾朝玮 孙静 马慧娇 郭家俊 郭洪伟 章中关键词:枯草芽孢杆菌 芽孢 分离纯化 枯草杆菌芽孢皮层肽聚糖的提取与结构分析 被引量:2 2018年 高压热杀菌技术(HPTS)是一种重要的杀菌技术,研究细菌芽孢皮层肽聚糖的结构对阐明HPTS处理下皮层肽聚糖的水解机制及芽孢失活机制有重要意义。从枯草杆菌芽孢中分离提纯出皮层肽聚糖,研究其组成及结构。经红外光谱分析发现提取物具有肽聚糖的典型结构特征,研究发现变溶菌素比溶菌酶更充分地水解了肽聚糖,测定了水解物中肽聚糖骨架主要成分N-乙酰葡糖胺的含量,并用HPLC法测定了肽聚糖水解物中各种氨基酸的含量,研究发现细菌芽孢皮层肽聚糖中氨基酸含量显著高于细菌营养体细胞壁肽聚糖中的氨基酸含量,这种组分含量和结构上的不同很可能是造成皮层肽聚糖独特性质的原因。 张津瑜 孙静 郭洪伟 贺晓光 章中关键词:枯草芽孢杆菌 芽孢 皮层 肽聚糖