刘腾
- 作品数：13 被引量：28H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- RK-13细胞HBB基因敲除稳定株的构建方法
- 本发明公开了一种RK‑13细胞HBB基因敲除稳定株的构建方法；所述方法包括如下步骤：设计一对互补的靶向家兔HBB基因第二个外显子的sgRNA，以pSpCas9(BB)‑2A‑Puro(PX459)V2.0质粒为载体,构建...
- 刘光清谭永贵刘腾朱杰陈宗艳李传锋
- 绵羊MAVS基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2019年
- 通过RT-PCR方法从绵羊肺细胞(sheep lung cells,SLT)扩增获得MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a,测序鉴定结果表明成功获得重组质粒pET-32a-MAVS。将其转化至感受肽细胞BL21中,经IPTG诱导获得重组蛋白。将纯化的MAVS蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备抗MAVS的鼠源多克隆抗体。SDS-PAGE结果表明该抗体具有良好的反应原性。MAVS多克隆抗体的成功制备为其生物学功能研究奠定了基础。
- 董丹丹刘腾缪秋红朱杰刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- SYBR Green II荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔病毒性出血症病毒方法的建立被引量：2
- 2017年
- 本研究建立了一种荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)结合熔解曲线区分不同亚型兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)方法。根据GenBank数据库中已公布的不同亚型RHDV(经典RHDV和RHDV2)的衣壳蛋白VP60序列保守区设计了1对特异性引物,利用SYBR Green II荧光染料,在实时荧光定量PCR方法的基础上结合熔解曲线进行分析,经典RHDV和RHDV2熔解温度(Tm)分别为(86.3±0.1)℃和(85.1±0.1)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现单特异峰。结果表明,本研究建立的方法能够快速地鉴别经典RHDV和RHDV2。
- 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔病毒性出血症病毒荧光定量PCR熔解曲线
- 山羊BST-2基因的表达及其亚细胞定位
- 2018年
- 将山羊的BST-2基因(Capra hircus bone marrow stromal antigen 2 gene)分别克隆至原核表达载体p GEX-4T-1和真核表达载体p3×Flag-CMV-14中,获得了重组表达质粒p GEX-BST-2和p3×Flag-BST-2。将重组质粒p GEX-BST-2转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE及Western blot结果显示,诱导表达的重组蛋白分子量约为42 ku,与预期蛋白一致。利用脂质体介导转染法将重组质粒p3×Flag-BST-2转染Vero细胞,经激光共聚焦显微镜检测,结果显示,BST-2蛋白在细胞中可以良好表达,并主要定位于细胞膜上。
- 张莉刘腾刘腾缪秋红朱杰朱杰陈宗艳陈宗艳王桂军
- 关键词：原核表达真核表达亚细胞定位山羊
- 绵羊BST-2B基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 为了表达含有绵羊BST-2B(o BST-2B)基因的重组蛋白,用RT-PCR方法扩增绵羊肺细胞的o BST-2B基因,并将其克隆至原核表达载体p GEX-4T-1中,构建重组表达质粒p GEX-4T-o BST-2B。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组o BST-2B蛋白。将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗o BST-2B的多克隆抗体。蛋白免疫印迹分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有较好的反应原性。本试验成功制备的o BST-2B蛋白及多克隆抗体,为研究o BST-2B蛋白的生物学功能及羊传染病的致病机制提供了良好的基础材料。
- 刘腾张莉谭永贵郭慧敏朱杰缪秋红李传峰陈宗艳刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 双抗夹心ELISA检测兔出血症病毒抗原方法的建立及初步评估被引量：3
- 2016年
- 为建立一种快速、特异性强的用于检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗原的双抗夹心ELISA方法,本研究通过抗体配对实验,确定以抗兔出血症病毒结构蛋白VP60单克隆抗体9H9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的9H9为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法。通过优化,确定最佳条件为:0.5μg/m L稀释后的9H9作为捕获抗体,底物显色液37℃包被2 h 4℃过夜,1%明胶溶液37℃封闭2 h,用含10%胎牛血清的PBST按5μg/m L稀释后的辣根过氧化物酶标记的9H9作为检测抗体,37℃作用15 min。建立的ELISA方法与杯状病毒科其他病毒无交叉反应,应用本方法和RT-PCR方法对85份兔肝脏样品进行检测,证明双抗夹心ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,有望作为临床快速检测的一种简便方法。
- 郭慧敏谭永贵缪秋红朱杰刘腾陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体
- 永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用
- 本发明公开了一种永生化原代绵羊肺细胞系的构建及其应用；所述构建包括以下步骤：用Dispase‑胶原酶灌流法获得高活率的新鲜原代绵羊肺成纤维细胞，经过24h培养后，在浓度为5ug/ml的聚凝胺存在下，用浓缩纯化的含有hTE...
- 刘光清刘腾朱杰陈宗艳李传峰
- 文献传递
- 基于SYBR GreenⅡ的荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔出血病毒方法的建立
- 引言兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)、兔病毒属(Lagovirus)。该病毒可引发兔发生急...
- 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒分子生物学及其疫苗研究进展被引量：9
- 2019年
- 小反刍兽疫病毒属于副黏病毒科、麻疹病毒属,主要感染山羊、绵羊、野生小反刍兽,临床症状以发热、肺炎、腹泻及呼吸道和消化道黏膜炎症为主要特征。目前小反刍兽疫在世界范围内广泛传播,给畜牧业造成了严重经济损失。加强对小反刍兽疫病毒的致病机理和疫苗研究,对于防控小反刍兽疫具有重要意义。本文对近年来小反刍兽疫病毒及其疫苗研究领域的进展进行了综述与展望。
- 董丹丹刘腾缪秋红朱杰张莉张莉唐井玉李传峰李传峰陈宗艳
- 关键词：小反刍兽疫病毒疫苗
- 永生化绵羊肺成纤维细胞系的构建及鉴定被引量：5
- 2018年
- 为了利用携带人源端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,h TERT)基因的慢病毒表达系统将原代绵羊肺成纤维细胞进行永生化。本研究利用PCR技术从p Babe-neo-h TERT中扩增h TERT基因,并利用infusion技术构建重组慢病毒表达载体p LOV-puro-h TERT。将重组慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,拯救出慢病毒颗粒并感染原代绵羊肺成纤维细胞,经嘌呤霉素抗性筛选获得阳性克隆,分别应用RT-PCR和Western blot方法检测传代细胞系中h TERT基因的转录和表达水平。筛选获得的阳性克隆,命名为SLT细胞系。SLT细胞系连续传代后RT-PCR及Western blot检测均显示h TERT稳定表达。本研究表明,我们成功构建了永生化绵羊肺成纤维细胞系。
- 刘腾董丹丹张莉朱杰缪秋红刘光清
- 关键词：人端粒酶逆转录酶永生化
