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孙海伟: 作品数：14 被引量：36H指数：3; 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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非洲猪瘟病毒TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法建立被引量：16: 2020年; 为建立一种快速、准确的非洲猪瘟病毒(ASFV)分子检测方法,以2018年8月分离的SY18毒株P72基因序列(GenBank登录号:MH713612.1)为参考毒株,人工合成质粒标准品,命名为pcDNA3-P72,基于该毒株P72基因序列,在1627~1876 bp处设计一对特异性引物和TaqMan探针,优化反应体系及条件,本研究成功建立了基于P72基因的TaqMan探针qPCR方法,并与OIE的特异性引物和TaqMan探针进行灵敏度、稳定性和特异性比较.结果显示:本研究建立的qPCR检测方法,标准曲线线性关系良好,R^2值可达到0.9932,灵敏性最低能检测到10 copies/μL,与OIE引物扩增灵敏度相当,比普通PCR方法高100倍.该方法重复性良好,批内和批间变异系数均小于1%.这一方法为我国非洲猪瘟疫情的快速确诊提供了必要的分子诊断工具.; 任名牛婷婷于婉琪孙海伟邬静陈鸿军; 关键词：非洲猪瘟病毒 TAQMAN 荧光定量PCR 分子诊断

流感病毒先天性免疫机制研究进展被引量：4: 2019年; 为了抵御流感病毒感染,宿主具备了许多先天性感受器,这些感受器识别病毒感染后激活下游的信号,从而阻碍流感病毒的复制并且促进病毒清除,同时也会造成一定的免疫损伤。本文分别从流感病毒的先天性识别机制,ISGs在抗流感病毒感染中的作用,流感病毒诱导的免疫损伤和免疫耐受以及如何防控流感病毒引起的急性肺脏损伤等四个方面进行阐述,可为针对流感病毒引起的肺部疾病制定合理的治疗策略提供理论依据。; 王俊史馨瑾孙海伟张文涛陈鸿军; 关键词：流感病毒先天性免疫急性肺损伤

A型流感病毒感染BALB/c小鼠炎症模型的建立被引量：2: 2019年; 目的用小鼠炎症动物模型分析A型流感病毒的致病性。方法三株不同的A型流感病毒A/swine/Jiangsu/C1/08(H9N2)(H9C1)、A/swine/Shandong/731/2009(SD731)、A/PuertoRico/8/34(H1N1)(PR8),以1×106TCID50经鼻感染5周龄BALB/c小鼠,观测临床症状,检测肺组织的病毒载量和炎症因子水平。结果BALB/c小鼠致病性实验中,SD731和PR8病毒引起的肺组织的炎症反应水平及病毒的复制显著高于H9C1,SD731致死率为80%,PR8为100%;H9C1病毒感染伴随着体重的减轻,但小鼠无死亡。结论成功建立了流感病毒感染小鼠的炎症模型。; 孙海伟史馨瑾陈艳艳钟秋萍张萌吕璐王俊陈鸿军; 关键词：流感病毒动物模型 BALB/C小鼠

非洲猪瘟病毒p30蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与免疫检测: 2023年; p30蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)免疫原性最强的结构蛋白之一,由CP204L基因编码。本研究利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统将ASFV中CP204L插入p Fast Bac1载体下游,将形成的重组质粒p Fast Bac-p30以转座子的形式插入到DH10Bac中的杆状病毒穿梭质粒(Bacmid)中,筛选出重组Bacmid-p30后,将Bacmid-p30转染Sf9细胞,并继续传代3次,获得重组杆状病毒,命名为r Bac-p30。分别通过间接免疫荧光(IFA)和免疫印迹(Western blot)鉴定了ASFV阳性血清可特异性识别Sf9细胞中表达的p30。以此真核表达p30蛋白包被ELISA板,可区分ASFV阴阳性血清。以上结果表明,本研究初步建立了检测ASFV血清抗体的间接ELISA方法,为后续建立非洲猪瘟抗体检测方法和p30亚单位疫苗研究奠定基础。; 廖欣欣钟秋萍史馨瑾魏常青孙海伟刘英楠敖清莹谢振华邬静陈鸿军; 关键词：非洲猪瘟病毒杆状病毒表达系统

鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体的制备被引量：2: 2017年; 为制备特异性的鸡细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21单克隆抗体(mAb),利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增鸡p21基因,将其克隆入原核表达载体pET-30a中,随后转化进入BL21(DE3)中,利用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离。切胶研磨,将收集的鸡p21蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,三免后,选取抗体阳性的小鼠脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合并筛选单抗。结果显示,经亚克隆纯化,共筛选获得12株阳性杂交瘤细胞株,即1B12、1E12、1H7、2B5、2C5、2C8、2D8、2F2、3C11、3D6、3G7和4G6。利用间接免疫荧光(IFA)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹检测单抗效价。成功制备了特异性鸡p21单抗。这为进一步研究鸡p21生物学功能奠定了基础。; 李雪琪连雪鲍晨沂孙海伟陈鸿军JUNG Yong-Sam钱莺娟; 关键词：P21 单克隆抗体原核表达

Neddylation蛋白修饰通路激活与流感病毒致病性关系研究: 为了明确流感病毒感染宿主细胞后Neddylation蛋白修饰通路的变化,本研究利用流感病毒A/swine/Jiangsu/C1/08 (H9N2)(简称:H9C1)、A/California/04/09 (H1N1)小鼠...; 孙海伟钱莺娟Yong-Sam Jung陈鸿军; 关键词：流感病毒; 文献传递

鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体制备和鉴定: 2016年; 目的制备特异性鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体(m Ab)。方法反转录PCR扩增cChk2基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-4T-3中,在BL21(DE3)中经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-PAGE检测可溶性。用cChk2腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株。结果 cChk2主要以包涵体形式存在,多抗血清具有良好的效价,获得9株阳性杂交瘤细胞株,即1F4、2D9、2G1、3D9、3E3、4B5、4E2、5C9及5F7。结论成功制备了特异性良好的cChk2 m Ab。; 高俊娜连雪孙海伟李泽君张训海JUNG Yong-Sam陈鸿军钱莺娟; 关键词：原核表达单克隆抗体

类泛素化蛋白NEDD8单克隆抗体制备: 2019年; 利用RT-PCR从A549细胞中扩增出类泛素化蛋白编码的nedd8基因,将其克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,测序验证后转化入BL21(DE3)进行IPTG诱导,表达获得NEDD8蛋白,经纯化后,免疫接种6周龄BALB/c小鼠。细胞融合后,用ELISA和Western blot方法筛选单克隆抗体细胞株。结果成功制备获得3株单克隆抗体。免疫特异性鉴定结果表明,所得到的3株单抗适用于Co-IP试验,可以特异性检测NEDD8修饰的Cullin-1底物。通过分段表达鉴定单抗针对的抗原表位可能在29RVEE32氨基酸区域,与泛素化蛋白(Ub)无交叉反应。本研究制备的特异性单抗为进一步鉴定NEDDylation修饰底物提供了良好的抗体工具。; 姚威孙海伟霍娜于婉琪萧飒陈鸿军; 关键词：NEDDYLATION 单克隆抗体

流感病毒进化限制因素研究进展: 2019年; 流感病毒是严重危害人类和动物健康的人兽共患病之一,季节性流感病毒每年都会在世界各地流行。经过多年监测发现,季节性流感持续性流行的关键原因是其病原体一直在进化,产生不可预测的新变体,从而逃避宿主免疫。本文章以流感病毒在感染宿主、宿主产生免疫、变种病毒传播过程中出现限制其进化的因素方面展开综述讨论,旨在探究有效控制流感病毒的策略。; 史馨瑾孙海伟王俊陈鸿军; 关键词：流感病毒进化

鸡源p53单克隆抗体的制备和鉴定: 2018年; 转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p53蛋白。经SDS-PAGE分离,收集p53蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用免疫印记、间接免疫荧光和酶联免疫吸附法筛选阳性细胞株。共获得6株稳定分泌鸡p53蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D7、3C4、4D4、4F6、4F7和4H2,均为Ig G亚类,并鉴定了1D7的特异性。本研究成功实现了鸡源p53蛋白的重组表达,制备出特异性较好的抗体,为研究p53在鸡体内的生物学作用奠定了基础。; 李雪琪陈鸿军连雪鲍晨沂孙海伟孙雯JUNG Yong-Sam钱莺娟; 关键词：P53 原核表达单克隆抗体

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