徐丽萍
- 作品数：11 被引量：15H指数：2
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广州市属高校科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 神经干细胞的单层培养及分化过程中HES1和MASH1的表达变化被引量：2
- 2014年
- 【目的】建立神经干细胞(NSC)体外培养方案,使NSC的体外可以得到增殖和分化,并检测NSC分化过程中HES1和MASH1的表达变化。【方法】无菌条件下取SD大鼠胚胎端脑,无血清悬浮培养,形成P2代神经球后,将神经球消化成单细胞,分为神经球悬浮培养和单层贴壁培养,并对两种不同培养方式下的NSC进行干性鉴定和分化能力鉴定。用不同浓度(20、40、80μg/L)的脑源性神经生长因子(BDNF)诱导NSC分化,选出最合适的浓度。用BDNF最佳诱导浓度诱导NSC分化,Q-PCR检测分化过程中HES1和MASH1的表达变化。【结果】神经球悬浮培养和单层贴壁培养均可得到的NSC;分化3 d后,在不加入任何诱导因素的情况下,单层贴壁培养的NSC能更高比例[(19.55±1.09)%]地分化为β-tubulinⅢ阳性细胞;BDNF 40μg/L能诱导出更多的β-tubulinⅢ阳性细胞[(34.17±0.60)%];在分化1、3和7 d时,Q-OCR结果表明MASH1在BDNF诱导下组较NSC和对照组表达水平明显上升。【结论】单层贴壁培养的神经干细胞更利于分化为神经元,BDNF为40μg/L时能诱导出更高比例的神经元,BDNF可以诱导MASH1在NSC分化过程中表达明显上升。
- 刘菲菲徐丽萍龙大宏陈艳张君度龙静怡
- 关键词：神经干细胞神经球分化脑源性神经生长因子
- Accutase酶在精原干细胞原代分离中的应用被引量：2
- 2013年
- 背景:有研究报道胰酶消化在一定程度上会破坏精原干细胞表面抗原并影响细胞活性,对后续的细胞分选及下游实验有一定影响。Accutae酶具有蛋白酶和胶原酶的双重活性,在消化结束时无需终止和清洗,有保护细胞表面抗原的特殊作用,因而被应用于多种干细胞的培养及消化传代中。目的:比较Accutase酶和胰酶在原代消化分离睾丸组织获取精原干细胞中的作用。方法:新生5-7 d昆明雄鼠45只,取双侧睾丸胶原酶初步消化,混悬液定容后分为Accutase酶组、胰酶组、混合酶组(透明质酸酶+胰酶组),不同组别小鼠睾丸组织分别于酶消化1,3,5 min后显微镜下观察并拍照,比较各组不同时间点的消化状态及形成单细胞所需的时间;获取单细胞悬液后分别计算单位体积内所得细胞总数及死亡率;通过差速贴壁方法去除间质细胞及支持细胞,经包被有干细胞标志分子CD90.2的免疫磁珠进行分选,将所得CD90+及CD90-细胞用精原干细胞表面标志分子——胶质细胞源性神经营养因子受体α1标记,流式细胞仪检测不同组别CD90+及CD90-细胞群中胶质细胞源性神经营养因子受体α1精原干细胞的阳性率。结果与结论:不同类别的消化酶对小鼠睾丸的消化作用有明显差异,其中Accutase酶能更快获取单细胞悬液,其细胞团及破膜细胞明显少于胰酶组和混合酶组,其所得细胞总数高于其余2组,而细胞死亡率则低于其余2组。差速贴壁后细胞免疫磁珠分选结果显示Accutase酶组CD90+精原干细胞得率高,流式分选结果显示胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90+细胞为72.24%,高于胰酶组及混合酶组(51.16%,71.27%);而胶质细胞源性神经营养因子受体α1+/CD90-细胞比率(15.03%)则低于胰酶组及混合酶组(18.8%,24.23%)。结果表明Accutase酶在分离和获取精原干细胞实验中效果优于胰酶。
- 刘珊珊徐丽萍朱蔚云马宁芳
- 关键词：干细胞精原干细胞透明质酸酶磁珠分选CD90
- 组蛋白去乙酰化酶抑制剂促大鼠胚胎干细胞向神经元分化
- 2014年
- 目的探讨组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂丁酸钠（NaB）对大鼠胚胎干细胞（ESC）向神经元分化的影响。方法利用含bFGF、EGF的DMEM／F12培养基培养原代ESC；应用DAPI染色，荧光显微镜观察不同药物浓度NaB（0．2、1、2μmol／L）作用48h后对细胞凋亡的影响；免疫荧光检测NaB（1μmol／L）作用72h后和对照组（PBS）ESC双肾上皮质激素（DCX）和DAPI，计算DCX／DAPI的比值；免疫印迹检测不同浓度NaB（0．2、1、2μmol／L）作用48h后和对照组（PBS）ESC组蛋白H3、H4乙酰化水平。结果在1、2／μmol／LNaB组ESC出现明显凋亡，细胞形状不规则，核固缩，核内可见致密的颗粒荧光，视野下细胞碎片较多，且凋亡细胞百分比明显高于0．2μmol／LNaB组和对照组[（7．85±0．73）％、（18．42±2．04）％比（3．48±0．35）％、（2．16±0．32）％，均P〈0．05]。1μmol／LNaB组ESCDCX／DAPI比值高于对照组（38．51±4．33比14．81±1．77，P〈0．05）。随NaB药物浓度的增加，ESC蛋白H3、H4乙酰化程度较对照组增强，0．2±mol／L组处理后乙酰化组蛋白H3和H4表达变化不明显，1、2μmol／L时组蛋白H3和H4乙酰化程度明显增高（均P〈0．05）。结论HDAC抑制剂NaB可明显促使ESC向神经元分化。
- 张西宣爱国徐丽萍龙大宏洪乐鹏
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠胚胎干细胞神经元
- Accutase酶在精原干细胞原代分离中的应用
- 刘珊珊徐丽萍朱蔚云马宁芳
- NGF联合b-FGF对胚胎大鼠隔区来源神经干细胞分化为神经元的诱导作用被引量：4
- 2019年
- 目的探讨神经生长因子(NGF)联合碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)诱导隔区来源神经干细胞(NSC)分化为神经元的作用。方法体外分离培养胎鼠大脑隔区来源NSC,细胞免疫荧光检测其Nestin、GFAP、β-TubulinⅢ表达,对其分化潜能进行鉴定;将神经球分为对照组、NGF组(NGF 50 ng/mL)及NGF联合b-FGF组(NGF 50 ng/mL,并逐渐撤除bFGF)诱导分化7 d,采用细胞免疫荧光检测β-TubulinⅢ阳性细胞比例。结果 (1)胚胎大鼠隔区来源神经干细胞,通过含EGF及b-FGF的无血清培养可获得大量Nestin阳性神经干细胞球,撤除丝裂原因子EGF及b-FGF后,无血清培养条件下,可自分化为GFAP阳性星形胶质细胞及β-TubulinⅢ阳性神经元;(2)对照组、NGF组(NGF 50 ng/mL)及NGF联合b-FGF组β-TubulinⅢ阳性细胞比例分别为(21.80±2.81)%、(38.04±3.86)%、(50.01±7.65)%,后两组神经元分化率均高于对照组(P<0.05),且NGF联合b-FGF组神经元分化率高于NGF组(P<0.05)。结论胚胎大鼠脑隔区可分离培养出Nestin阳性NSC,并可自分化为GFAP阳性星形胶质细胞及β-TubulinⅢ阳性神经元;NGF可体外诱导隔区来源神经干细胞分化为神经元,在逐渐撤除bFGF条件下,NGF诱导其分化为神经元的作用更佳。
- 朱清陈艳龙大宏杨丹迪徐丽萍王迪
- 关键词：隔区神经干细胞神经元
- Balb/c与C57BL/6小鼠海马皮层突触素表达的比较
- 2014年
- 目的比较突触素在Balb/c与C57BL/6小鼠海马各区中表达的差异。方法采用Balb/c和C57BL/6小鼠各10只,心脏灌注多聚甲醛固定后取脑,使用冰冻切片机切片,通过免疫组织化学染色,观察突触素在Balb/c和C57BL/6小鼠海马各区中的表达。结果突触素在Balb/c和C57BL/6小鼠海马皮层各区均有广泛表达,突触素在C57BL/6小鼠海马CA1区锥体细胞层中的表达强度高于在Balb/c小鼠相同区域的表达强度(P<0.05),在Balb/c小鼠中CA3区锥体细胞层中的表达强度高于在C57BL/6小鼠相同区域的表达强度(P<0.05)。结论突触素在Balb/c和C57BL/6小鼠海马各区表达的差异可能是其行为学差异的神经解剖学基础。
- 郝彦利黄鑫焱徐丽萍杨丹迪董为人
- 关键词：突触素BALB/C小鼠C57BL/6小鼠种属差异
- 诱导多能干细胞及其在神经再生医学的应用前景被引量：2
- 2013年
- 诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)最初由日本学者山中申弥(Shinya Yamanaka)于2006年利用病毒载体将四个转录因子(Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc)的组合转入分化的体细胞中,使其重编程而得到的类似胚胎干细胞(Embryonic stem cells)的一种细胞类型。该类细胞在体内具有分化为任何一种细胞类型的潜能。更重要的是,诱导多能干细胞来源于自体,相比胚胎干细胞,诱导多能干细胞来源的细胞移植不需要免疫抑制治疗。此外,诱导多能干细胞的出现还省却了胚胎干细胞研究中涉及到的政治及伦理因素的困惑。这项细胞可被重塑的重要发现在医学研究领域具有旅程碑的作用。本文总结了目前医学研究领域里可用的的干细胞平台,并重点阐述了细胞的重编程及诱导多能干细胞在疾病模型及神经退行性疾病细胞移植治疗领域的应用前景。
- 徐丽萍龙大宏校对
- 关键词：诱导多能干细胞细胞治疗神经再生胚胎干细胞
- EIF5A2基因在不同发育时期人胎盘绒毛膜中的定位表达及意义
- 2014年
- 目的探讨EIF5A2(eukaryotic transla-tion initiation factor 5A2)癌基因在人胎盘绒毛膜中表达及其定位。方法收集孕早期(8±周)绒毛膜、孕中期(20±周)及足月(38±周)胎盘组织,应用RT-PCR和Western blot及免疫组织化学等方法,从分子水平及蛋白水平检测EIF5A2在不同时段胎盘组织中的表达及定位。结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示各期胎盘组织中均有EIF5A2 mRNA及蛋白表达,孕中期达峰值,足月胎盘EIF5A2表达显著下降(P<0.05);免疫组化结果显示孕早期绒毛膜中EIF5A2定位表达于合体滋养层及细胞滋养层细胞胞质,孕中期胎盘组织中EIF5A2主要表达于细胞滋养层,合体滋养层表达较弱,分娩期胎盘部分合体滋养层细胞内可见微弱的EIF5A2表达。结论 EIF5A2在不同时段人绒毛膜、胎盘组织中均有表达,定位于胎盘绒毛膜合体滋养层及细胞滋养层细胞胞质,其表达丰度及优势表达细胞类别在不同孕期存在差异。
- 杜宝玲潘继红邹文霞徐丽萍熊喜峰马宁芳
- 关键词：绒毛膜细胞滋养层胎盘
- 神经干细胞移植治疗帕金森模型鼠的脑内炎症细胞因子变化被引量：5
- 2017年
- 目的检测神经干细胞移植后大鼠脑内细胞因子的变化,为营造有利于细胞移植的微环境和神经免疫调节治疗做准备。方法实验检测时间点为移植后1周、2周、4周,在SPF级SD大鼠内随机抽取8只为正常对照组,模型成功稳定的大鼠随机分为生理盐水模型对照组和神经干细胞移植组,每组每个时间点各8只,分别进行脑立体定位注射神经干细胞和生理盐水,到检测时间点时取纹状体制备好样本,用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测各实验组各时间点纹状体的TNF-α、IL-1β、IFN-γ和IL-4的含量。结果与正常组相比,模型组的TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-4含量都升高(P<0.05)。与模型组相比,移植组的TNF-α和IL-1β含量降低(P<0.05),IFN-γ和IL-4含量在1周、4周时升高(P<0.05),2周时无差异。与正常组相比,移植组的TNF-α含量在1周、4周时无差异,在2周时稍低(P<0.05),移植组的IL-1β含量在1周时无差异,2周时下降(P<0.05),4周时升高(P<0.05),移植组的IFN-γ和IL-4含量在各时间点均升高(P<0.05)。结论神经干细胞移植入帕金森模型鼠后引起了相关细胞因子的改变,即与模型对照组相比TNF-α、IL-1β水平下降和IFN-γ、IL-4水平升高,说明神经干细胞移植后会使宿主微环境内的部分促炎因子(TNF-α、IL-1β)下降,抗炎因子(IL-4)升高,同时伴随具有神经再生和保护作用的促炎因子(IFN-γ)的升高。
- 吕颖张念平徐丽萍龙静怡冯俊达龙大宏
- 关键词：神经干细胞帕金森病模型6-羟基多巴胺
- CHD1L在肝脏发育过程中的动态表达及意义
- 研究背景与目的:CHD1L(Chromodomain Helicase/Adenosine Triphosphatase DNA Binding Protein 1-Like)是近年新发现的肝癌特异性表达基因，在正常肝组...
- 徐丽萍
- 关键词：肝癌肿瘤形成胚胎发育
- 文献传递
