李海
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划广州市科技攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 人源噬菌体单链抗体库的构建与初步鉴定——两种抗原靶分子：凋亡抑制因子survivin与hiv辅助受体ccr5 n-e2的基因克隆、原核表达与纯化
- 从未经主动免疫的健康志愿者的外周血淋巴细胞中提取总rna,用rt-pcr扩增人抗体重链(vh)和轻链(vl)可变区基因。采用改进的重叠延伸拼接(splicingbyoverlappingextention，soe)pcr...
- 李海
- 关键词：单链抗体噬菌体抗体库
- 文献传递网络资源链接
- 人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化被引量：1
- 2009年
- 目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extension,SOE)PCR实现两片段DNA的拼接后(命名为CCR5-N-E2)克隆入质粒pBlueScript M13中,同时构建原核表达载体pET-21b(+)-CCR5-N-E2,转入表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CCR5-N-E2,表达产物通过蛋白免疫印迹进行鉴定,并采用金属螯合层析法对重组表达产物进行纯化。结果经测序,构建的重组原核表达载体与预期完全一致,相对分子质量为8 500的目的蛋白在BL21(DE3)菌株中得到高效表达,表达量约占总蛋白的50%,表达产物以包涵体形式存在。蛋白免疫印迹实验表明该重组蛋白与抗CCR5 N-端序列的单克隆抗体发生特异性结合。通过Ni2+亲和层析,目的蛋白的纯度可达95%以上。结论实现CCR5-N-E2编码序列的拼接、融合蛋白的表达以及纯化,为广泛筛选以CCR5为靶点的临床治疗药物奠定了基础。
- 李海黎晓天彭宇吴文言
- 关键词：原核表达纯化
- 凋亡抑制因子Survivin的克隆、高效表达与纯化被引量：1
- 2007年
- Survivin蛋白抑制细胞的凋亡并参与调控细胞的分裂,在绝大多数肿瘤细胞中均有过量表达。本实验以人肝癌细胞系MHCC-97L总RNA为模板,应用RT-PCR的方法得到survivinc DNA,并构建了重组原核表达载体pET-21b(+)-survivin,导入BL21(DE3)菌株进行表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量超过总蛋白的60%。Western blot结果表明表达产物与抗人survivin抗体发生特异性反应,经凝胶过滤层析后纯度达到95%以上,为进一步研究靶向Survivin的诊断试剂与抑制剂奠定了基础。
- 李海彭宇黎晓天吴文言
- 关键词：SURVIVIN克隆原核表达纯化
- 构建无背景的选择性感染噬菌体
- 2006年
- 目的构建一个选择性感染噬菌体(selectively infective phage,SIP)载体。方法删去M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区,并在此位置插入3个内切酶识别位点,用于外源基因的插入,构建成重组噬菌体基因组BP-M13KO7。将重组噬菌体BP-M13KO7的培养液上清液感染XL1-Blue,检测其感染背景。结果重组噬菌体BP-M13KO7培养液上清液不具有感染性,完全消除了背景。结论通过将M13KO7gIII基因的第2个甘氨酸丰富区置换成3个内切酶识别位点,构建成的重组噬菌体无感染性背景。
- 陈颖李海吴文言
