目的研究黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其阻滞细胞周期和诱导凋亡的机制。方法通过CCK-8法和克隆形成实验检测黄芩素对CNE2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化,荧光显微镜观察细胞形态改变,试剂盒检测Caspase-3蛋白活性变化,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测P53、P21、CDK2、Caspase-3m RNA表达情况。结果黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性,与对照组比较,不同浓度的黄芩素作用于CNE2细胞48 h后,细胞出现典型的凋亡特征,并出现周期阻滞,Caspase-3活性增强,P53及其下游基因P21、Caspase-3 m RNA表达水平增高,CDK2 m RNA表达水平下降。结论黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,可能是通过上调P53表达诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期于S期。
为探讨S100A8和S100A9对鼻咽癌细胞系CNE2的影响及是否通过Wnt/β-catenin通路而发挥作用,以培养基添加1μg/m L S100A8/S100A9培养CNE2为实验组,采用划痕、黏附和平板克隆实验分别检测S100A8/S100A9对CNE2细胞的生物学行为影响,同时运用Western blotting检测CNE2细胞中β-catenin蛋白的累积。实验结果显示,S100A8/S100A9起促进CNE2细胞迁移(p<0.05,p<0.01)、基质黏附(p<0.01)和平板克隆(p<0.01)的作用,且添加S100A8/S100A9蛋白后1 h,CNE2细胞中β-catenin的累积明显上调。以上结果显示S100A8/S100A9可促进鼻咽癌细胞CNE2侵袭和迁移及细胞干性增强等生物学行为,其机制可能有Wnt/β-catenin通路的参与。
