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SHH修饰聚多巴胺涂层纤维蛋白支架对大鼠神经干细胞的影响被引量：3: 2020年; 目的:构建音猬因子(SHH)修饰的聚多巴胺(PD)涂层纤维蛋白胶(FG),并探究该支架对大鼠神经干细胞(NSCs)的生长及分化的影响。方法:按FG材料表面涂层情况,将实验分为3组:FG表面未处理组(control)、FG表面进行多巴胺涂层组(PD)和FG经多巴胺处理后表面涂有SHH组(PD-SHH)。采用扫描电子显微镜分别观察支架微观结构,用ELISA测量PD-SHH组SHH。分离并培养大鼠神经干细胞,并将神经干细胞分别与该3种支架复合培养,免疫荧光及Western Blot检测各组细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、生长再生相关蛋白(GAP43)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。结果:ELISA结果显示PD-SHH缓释支架可以持续释放SHH达到19 d;扫描电子显微镜可见纤维蛋白胶经冷冻干燥后呈海绵型网状结构,多巴胺及SHH微粒粘附在网状结构上;免疫荧光及Western Blot结果显示:PD-SHH组细胞高表达GAP43和MBP等神经细胞相关蛋白而低表达GFAP(P<0.05)。结论:制备的聚多巴胺涂层纤维蛋白支架具有良好的SHH缓释效果,该复合支架对大鼠NSCs分化有明显的促进作用。; 崔学文陆浩吕德民沈元昊杨开元曹苏成杨文静张志坚; 关键词：纤维蛋白支架多巴胺音猬因子神经干细胞

定向多通道纤维蛋白支架对EMSCs迁移分化的影响被引量：3: 2018年; 目的:构建具有定向多通道的纤维蛋白支架,并探究该支架对外胚层间充质干细胞(ecto-mesenchymal stem cells,EMSCs)的生长行为及向神经分化的影响,为其用于脊髓损伤修复提供新思路。方法:通过人工造孔和冷冻干燥技术构建具有定向多通道的纤维蛋白支架,扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察支架内微观结构。大鼠鼻粘膜来源的EMSCs与该支架复合培养7d,倒置荧光显微镜和SEM评估该支架对EMSCs迁移的引导效果,并通过免疫荧光染色技术鉴定其对EMSCs向神经诱导分化的程度。结果:(1)SEM显示支架横截面上有若干通道空洞,支架纵截面显示通道的走向基本与支架长轴一致;(2)EMSCs粘附在定向通道的孔壁上,且沿着支架纵轴的方向延伸;(3)免疫荧光染色显示神经相关蛋白阳性。结论:EMSCs在定向多通道纤维蛋白支架上能够正常生长,且支架的定向多通道对其生长具有引导作用,利于EMSCs的粘附、迁移和向神经方向分化。; 杨文静沈元昊杨开元陆浩崔学文张志坚陈谦; 关键词：纤维蛋白支架脊髓损伤

组织学与胚胎学教学改革探索被引量：20: 2015年; 组织学与胚胎学作为一门重要的医学基础课,在当今世界新形势的冲击下受到严峻的挑战。文章结合教学经验,从规范教学管理到培养学生创新精神方面,浅谈教学体会和改革探索,为提高组织学与胚胎学教学质量和实现教学目标提供参考。; 杨文静张志坚卢小东; 关键词：组织学与胚胎学教学改革实验教学

SHH缓释的脊髓去细胞支架促进大鼠脊髓损伤修复被引量：2: 2018年; 目的:研究可缓释音猬因子(sonic hedgehog,SHH)的脊髓去细胞支架(acellular spinal cord scaffolds,ASCSs)对大鼠脊髓损伤修复的效果。方法:(1)用物理和化学联合法制备ASCSs,并检测其效果。(2)使用京尼平(genipin,GP)作为交联剂,体外制备缓释SHH的ASCSs(ASCSs-GP-SHH),探究其缓释效果。(3)建立大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型,随机分为四组(每组20只):单纯SCI组,ASCSs组,ASCSs-GP组(GP交联的ASCSs),ASCSs-GP-SHH组。术后每周记录BBB评分,评估功能恢复。术后12周取出损伤处脊髓组织,行免疫组化和Western Blot检测损伤处相关蛋白Nestin(巢蛋白),GAP43(生长相关蛋白),MBP(髓磷脂碱性蛋白),NF200(神经丝蛋白),GFAP(胶质纤维酸性蛋白)的表达。结果:(1)物理及化学联法制备ASCSs效果良好;(2)ASCSs-GP-SHH具有良好的缓释SHH的性能;(3)ASCS-GP-SHH组BBB评分从术后到12周较其他组高(P<0.05);(4)免疫组化及HE染色结果显示:ASCS-GP-SHH组脊髓横断处有神经元再生。SCI组神经元凋亡明显,纤维瘢痕及空洞大,ASCS-GP组较ASCS组稍好,ASCS组较SCI组稍好;(5)Western Blot结果显示:ASCS-GP-SHH组Nestin,GAP43,MBP,NF200表达高于SCI、ASCS-GP、ASCS组(P<0.05),而GFAP低于SCI、ASCS-GP、ASCS组(P<0.05)。结论:物理和化学联合制备可以有效的制备ASCSs,ASCSs-GP-SHH缓释效果良好,对大鼠脊髓损伤的修复有明显的促进作用。; 陈平波徐晓峰徐晓峰毕士奇史文涛杨开元张志坚张志坚陈谦; 关键词：音猬因子京尼平缓释脊髓损伤

咪康唑与纤维蛋白协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞被引量：1: 2018年; 目的:探讨咪康唑与纤维蛋白能否协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞。方法:培养并鉴定胎鼠神经球;通过MTT法确定不同浓度咪康唑对神经球存活的影响;将神经球按培养条件不同分为四组,对照组、咪康唑组(mico组)、纤维蛋白组(fibrin组)及纤维蛋白-咪康唑联用组(fibrin+mico组),培养两周后以免疫荧光染色比较髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达;Western Blot法比较MBP、2’3’环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、整合素、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化(ERK、p-ERK)的表达。结果:(1)神经球阳性表达巢蛋白(nestin)和CD133:当咪康唑浓度低于或等于1.5μmol/L时,神经球存活在各组之间不存在统计学差异(P>0.05),但2.5μmol/L组显著低于2μmol/L组和1.5μmol/L组(P<0.05)。(2)免疫荧光结果显示:神经球分化所成的成髓鞘样细胞表达MBP阳性,呈多突起形态;fibrin组及mico组MBP相对荧光强度均高于对照组(P<0.05),fibrin+mico组神经球分化为网络状的成髓鞘样细胞团,其相对荧光强度高于其他组(P<0.05)。(3)Western Blot结果显示:fibrin+mico组MBP及CNPase表达显著高于mico组和fibrin组(P<0.05),fibrin+mico组整合素表达及p-ERK/ERK显著高于mico组和fibrin组(P<0.05),同时咪康唑及纤维蛋白对MBP、CNPase、整合素的表达及p-ERK/ERK的效应具有交互作用(P<0.05)。结论:咪康唑与纤维蛋白能协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞,其机制可能与ERK磷酸化有关。; 崔学文周焕高陈平波杨文静杨文静龚爱华张志坚; 关键词：咪康唑纤维蛋白神经球

包埋载音猬因子壳聚糖微球纤维蛋白支架对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞分化的影响被引量：2: 2019年; 背景:脊髓组织工程的基本思路是将体外分离培养的种子细胞种植到具有三维结构的生物材料支架上,并加入生物活性因子保持一定浓度,构成具有生物活性的细胞-支架复合物。然而如何构建合理的细胞生长微环境以及维持生物活性因子的最佳浓度一直面临诸多问题。该实验创新性地提出了双交联缓释体系,持续稳定地释放神经营养因子,以便更好地促进种子细胞的生长与分化。目的:利用冷冻干燥法,将包载音猬因子的壳聚糖微球填充于纤维蛋白胶,构建具有三维结构的复合生物工程支架,探讨该支架对外胚层间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响。方法:①采用离子凝胶法制备包载音猬因子的壳聚糖微球,而后将其与纤维蛋白胶混合,冷冻干燥成型,即得到包埋载音猬因子壳聚糖微球的纤维蛋白支架,采用扫描电子显微镜观察支架微观结构和ELISA检测音猬因子缓释效果,并制备包载音猬因子的纤维蛋白支架和包载音猬因子的壳聚糖微球作为对照;②采用悬浮抗贴壁法获取外胚层间充质干细胞来源的神经球样细胞分别种植于上述支架和经多聚赖氨酸修饰的圆玻片上,加入神经诱导培养基培养。14d后免疫荧光标记神经细胞相关蛋白β3-Tubulin、MAP-2和MBP,采用Westernblot方法测定神经细胞相关蛋白表达水平。结果与结论:①扫描电子显微镜观察纤维蛋白胶经冷冻干燥后呈海绵型网状结构,载音猬因子的壳聚糖微球均匀分散在其中;②ELISA检测结果显示复合纤维蛋白支架缓释速度较为平缓且持续时间较长,形成更稳定、持续的缓释体系;③免疫荧光染色显示复合纤维蛋白支架组高表达神经细胞相关蛋白;同时,Western blot检测结果显示复合纤维蛋白支架组表达的神经细胞相关蛋白水平明显高于其他组(P<0.05);④结果表明,壳聚糖复合纤维蛋白支架缓释效果较好,该复合支架对; 崔学文杨开元杨文静陆浩史文涛陈平波毕士奇沈元昊张志坚; 关键词：纤维蛋白胶

SHH缓释纤维蛋白支架移植促大鼠脊髓损伤的修复被引量：6: 2017年; 目的:研究应用可缓释音猬因子(sonic hedgehog,SHH)的纤维蛋白胶(fibrin glue,FG)支架促大鼠脊髓完全横断损伤的修复效果。方法:(1)制作体外缓释SHH的纤维蛋白胶支架模型,探究缓释效果。(2)选用健康的SD大鼠60只,制作大鼠脊髓完全横断模型,随机分为三组:单纯脊髓横断组(SCI),纤维蛋白胶组(FG),音猬因子-支架移植组(F-SHH)。术后每周记录大鼠双后肢功能活动(BBB评分)。术后12周取出脊髓组织,采用免疫组织化学染色和免疫蛋白印迹检测,观察脊髓损伤的近远端神经元存活情况及神经丝蛋白(neurofilament200,NF200),生长再生相关蛋白(growth associated protein-43,GAP43),胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达情况。结果:(1)载SHH的纤维蛋白胶具有良好的缓释SHH的效果;(2)F-SHH组BBB评分从术后到第十二周较FG、SCI组上升明显(P<0.05);(3)免疫组化结果显示:F-SHH组脊髓横断端有一些神经元存活且排列规则,许多神经纤维未完全溃变。SCI组细胞凋亡明显,纤维溃变严重,退变空泡大,FG组较SCI组稍好;(4)Western Blot结果显示:F-SHH组NF200,GAP43相对含量高于FG、SCI组(P<0.05),而GFAP相对含量低于FG、SCI组(P<0.05)。结论:SHH缓释纤维蛋白支架缓释效果良好,对大鼠脊髓完全横断损伤的修复有明显的促进作用,SHH对于脊髓损伤的修复机理值得进一步研究。; 崔学文张竞新许艺荠张雪松刘义灏张志坚陈谦杨文静; 关键词：音猬因子纤维蛋白胶缓释

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杨文静

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