陈平波
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：江苏大学附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省普通高校研究生科研创新计划项目江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Toll样受体-3和-4对干细胞成软骨分化的影响及机制
- 2016年
- 目的探索Toll样受体(Toll like receptor,TLR)-3和-4在骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化过程中对蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白形成的影响及机制。方法用Ficoll密度梯度离心法分离SD大鼠BMSCs,并进行传代扩增。流式细胞术检测细胞表面标志物CD34、CD44、CD54、CD90的表达进行细胞鉴定。以Western blot法检测第3代细胞的蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。再随机分为空白组、TLR-3激活组、TLR-4激活组,分别以PBS、TLR-3激动剂、TLR-4激动剂处理后,进行成软骨诱导培养。培养第14天,以阿利新蓝染色检测蛋白多糖,以免疫荧光及Western blot法检测Ⅱ型胶原的表达,以实时荧光定量PCR检测Sox-9的表达。结果 Ficoll密度梯度离心法分离所得细胞,其表面标志物表达为CD34(-)、CD44(+)、CD54(+)、CD90(+),符合BMSCs特点。分组处理前,BMSCs不表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原。经过2周成软骨诱导培养,空白组、TLR-3激活组和TLR-4激活组阿利新蓝染色均为阳性,且3组间无明显差异。免疫荧光及Western blot结果显示,3组均表达Ⅱ型胶原,但空白组表达明显低于TLR-3激活组和TLR-4激活组,且TLR组间无明显差异。PCR结果显示,TLR-3和TLR-4激活组Sox-9相对表达量较空白组增高1倍,而TLR组之间无明显差异。结论经过成软骨诱导培养,BMSCs能够形成基质蛋白多糖及Ⅱ型胶原,初步具有软骨细胞特性。TLR-3和-4对基质蛋白多糖的形成无明显作用,却能够促进Ⅱ型胶原的形成,其机制可能与TLR-3和-4对Sox-9的上调有关。
- 徐小峰曹学书陈奇吴巍张志坚陈平波吴康健江潮
- 关键词：TOLL样受体干细胞成软骨分化蛋白多糖
- SHH缓释的脊髓去细胞支架促进大鼠脊髓损伤修复被引量：2
- 2018年
- 目的:研究可缓释音猬因子(sonic hedgehog,SHH)的脊髓去细胞支架(acellular spinal cord scaffolds,ASCSs)对大鼠脊髓损伤修复的效果。方法:(1)用物理和化学联合法制备ASCSs,并检测其效果。(2)使用京尼平(genipin,GP)作为交联剂,体外制备缓释SHH的ASCSs(ASCSs-GP-SHH),探究其缓释效果。(3)建立大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型,随机分为四组(每组20只):单纯SCI组,ASCSs组,ASCSs-GP组(GP交联的ASCSs),ASCSs-GP-SHH组。术后每周记录BBB评分,评估功能恢复。术后12周取出损伤处脊髓组织,行免疫组化和Western Blot检测损伤处相关蛋白Nestin(巢蛋白),GAP43(生长相关蛋白),MBP(髓磷脂碱性蛋白),NF200(神经丝蛋白),GFAP(胶质纤维酸性蛋白)的表达。结果:(1)物理及化学联法制备ASCSs效果良好;(2)ASCSs-GP-SHH具有良好的缓释SHH的性能;(3)ASCS-GP-SHH组BBB评分从术后到12周较其他组高(P<0.05);(4)免疫组化及HE染色结果显示:ASCS-GP-SHH组脊髓横断处有神经元再生。SCI组神经元凋亡明显,纤维瘢痕及空洞大,ASCS-GP组较ASCS组稍好,ASCS组较SCI组稍好;(5)Western Blot结果显示:ASCS-GP-SHH组Nestin,GAP43,MBP,NF200表达高于SCI、ASCS-GP、ASCS组(P<0.05),而GFAP低于SCI、ASCS-GP、ASCS组(P<0.05)。结论:物理和化学联合制备可以有效的制备ASCSs,ASCSs-GP-SHH缓释效果良好,对大鼠脊髓损伤的修复有明显的促进作用。
- 陈平波徐晓峰徐晓峰毕士奇史文涛杨开元张志坚张志坚陈谦
- 关键词：音猬因子京尼平缓释脊髓损伤
- 咪康唑与纤维蛋白协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞被引量：1
- 2018年
- 目的:探讨咪康唑与纤维蛋白能否协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞。方法:培养并鉴定胎鼠神经球;通过MTT法确定不同浓度咪康唑对神经球存活的影响;将神经球按培养条件不同分为四组,对照组、咪康唑组(mico组)、纤维蛋白组(fibrin组)及纤维蛋白-咪康唑联用组(fibrin+mico组),培养两周后以免疫荧光染色比较髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达;Western Blot法比较MBP、2’3’环核苷酸磷酸二酯酶(CNPase)、整合素、细胞外调节蛋白激酶及其磷酸化(ERK、p-ERK)的表达。结果:(1)神经球阳性表达巢蛋白(nestin)和CD133:当咪康唑浓度低于或等于1.5μmol/L时,神经球存活在各组之间不存在统计学差异(P>0.05),但2.5μmol/L组显著低于2μmol/L组和1.5μmol/L组(P<0.05)。(2)免疫荧光结果显示:神经球分化所成的成髓鞘样细胞表达MBP阳性,呈多突起形态;fibrin组及mico组MBP相对荧光强度均高于对照组(P<0.05),fibrin+mico组神经球分化为网络状的成髓鞘样细胞团,其相对荧光强度高于其他组(P<0.05)。(3)Western Blot结果显示:fibrin+mico组MBP及CNPase表达显著高于mico组和fibrin组(P<0.05),fibrin+mico组整合素表达及p-ERK/ERK显著高于mico组和fibrin组(P<0.05),同时咪康唑及纤维蛋白对MBP、CNPase、整合素的表达及p-ERK/ERK的效应具有交互作用(P<0.05)。结论:咪康唑与纤维蛋白能协同促进神经球分化为成髓鞘样细胞,其机制可能与ERK磷酸化有关。
- 崔学文周焕高陈平波杨文静杨文静龚爱华张志坚
- 关键词：咪康唑纤维蛋白神经球
- 包埋载音猬因子壳聚糖微球纤维蛋白支架对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞分化的影响被引量：2
- 2019年
- 背景:脊髓组织工程的基本思路是将体外分离培养的种子细胞种植到具有三维结构的生物材料支架上,并加入生物活性因子保持一定浓度,构成具有生物活性的细胞-支架复合物。然而如何构建合理的细胞生长微环境以及维持生物活性因子的最佳浓度一直面临诸多问题。该实验创新性地提出了双交联缓释体系,持续稳定地释放神经营养因子,以便更好地促进种子细胞的生长与分化。目的:利用冷冻干燥法,将包载音猬因子的壳聚糖微球填充于纤维蛋白胶,构建具有三维结构的复合生物工程支架,探讨该支架对外胚层间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响。方法:①采用离子凝胶法制备包载音猬因子的壳聚糖微球,而后将其与纤维蛋白胶混合,冷冻干燥成型,即得到包埋载音猬因子壳聚糖微球的纤维蛋白支架,采用扫描电子显微镜观察支架微观结构和ELISA检测音猬因子缓释效果,并制备包载音猬因子的纤维蛋白支架和包载音猬因子的壳聚糖微球作为对照;②采用悬浮抗贴壁法获取外胚层间充质干细胞来源的神经球样细胞分别种植于上述支架和经多聚赖氨酸修饰的圆玻片上,加入神经诱导培养基培养。14d后免疫荧光标记神经细胞相关蛋白β3-Tubulin、MAP-2和MBP,采用Westernblot方法测定神经细胞相关蛋白表达水平。结果与结论:①扫描电子显微镜观察纤维蛋白胶经冷冻干燥后呈海绵型网状结构,载音猬因子的壳聚糖微球均匀分散在其中;②ELISA检测结果显示复合纤维蛋白支架缓释速度较为平缓且持续时间较长,形成更稳定、持续的缓释体系;③免疫荧光染色显示复合纤维蛋白支架组高表达神经细胞相关蛋白;同时,Western blot检测结果显示复合纤维蛋白支架组表达的神经细胞相关蛋白水平明显高于其他组(P<0.05);④结果表明,壳聚糖复合纤维蛋白支架缓释效果较好,该复合支架对
- 崔学文杨开元杨文静陆浩史文涛陈平波毕士奇沈元昊张志坚
- 关键词：纤维蛋白胶
