罗军涛
- 作品数：25 被引量：21H指数：2
- 供职机构：上海海洋大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 敲除kdm4ab对斑马鱼低温耐受能力的影响
- 2024年
- 为深入研究kdm4ab基因在鱼类低温胁迫下的作用,以斑马鱼(Danio rerio)为模式生物,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建kdm4ab^(-/-)斑马鱼品系。RT-qPCR结果显示,与WT斑马鱼相比,kdm4ab^(-/-)斑马鱼的kdm4ab mRNA表达量显著下调(P<0.000 1),而kdm4c的mRNA表达量补偿性增加(P<0.05)。斑马鱼行为轨迹跟踪系统检测发现,18℃低温下kdm4ab^(-/-)斑马鱼幼鱼的最大加速度显著降低(P<0.05)。8℃低温下kdm4ab^(-/-)斑马鱼的半数致死时间(LT50)显著低于WT斑马鱼(P<0.000 1);低温处理后kdm4ab^(-/-)斑马鱼的γH2A.X表达量明显增加,ROS水平升高,即DNA损伤增强。研究表明,敲除kdm4ab基因降低了低温下斑马鱼的耐受能力及运动能力,这为鱼类的低温耐受机制研究提供新思路。
- 张梦冉罗军涛罗军涛张瑶韩兵社
- 关键词：斑马鱼
- 寒冷驯化的斑马鱼细胞通过DNA甲基化调控寒冷诱导基因
- DNA甲基化是一种重要的表观遗传调控机制,在细胞分化、增殖和死亡等生物学过程中起着重要作用。然而,DNA甲基化在鱼类寒冷驯化过程中发挥功能的机制尚不清楚。在本研究中,将培养于28℃(常规培养温度)的斑马鱼(Danio r...
- 韩兵社李文豪陈作舟时应娣许琼琼罗军涛李小霞张俊芳陈良标
- 关键词：斑马鱼
- 文献传递
- 低温压力下水通道蛋白(AQP1a)基因的表达表观调控及表达量变化调控的初步探讨
- 采用核糖核酸实时荧光定量PCR(RNA-q PCR)和染色质免疫共沉淀方法(Ch IP)方法,在转录水平和翻译后共价修饰水平探测斑马鱼成纤维细胞(ZF4)的水通道蛋白1a(AQP1a)基因受到低温处理后的表达的变化和启动...
- 时应娣李晓霞罗军涛许琼琼韩兵社张俊芳
- 文献传递
- 提高鱼类耐受低温能力的方法
- 本发明公开了一种提高鱼类耐受低温能力的方法，包括在鱼类受精卵发育阶段给予根赤壳菌素进行孵育；所述孵育采用的孵育水为含有5～10μM根赤壳菌素浓度的二甲基亚砜溶液；所述鱼类受精卵发育阶段为鱼类受精卵发育细胞期至50％外包期...
- 张俊芳韩兵社罗军涛孙宇田
- 文献传递
- 血吸虫病肝纤维化过程中Beclin1调节线粒体功能的初步研究被引量：3
- 2020年
- 目的探索Beclin1在血吸虫病肝纤维化中与线粒体功能的关系。方法将40只C57BL/6雌性小鼠随机分为感染组和健康对照组,每组20只。感染组小鼠采用腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴20条/鼠。感染后10周,取两组小鼠新鲜肝组织,苏木精-伊红(HE)和Masson染色观察肝组织病变情况。蛋白质印迹(Western blotting)分析肝组织中Beclin1、p-Beclin1及电压依赖型阴离子孔道蛋白1 (VDAC1)的相对表达水平。荧光定量PCR检测肝组织中胶原蛋白Col 1a1、Co1 3a1,以及肝组织中参与线粒体柠檬酸循环反应的柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶mRNA的相对转录水平。取两组小鼠肝组织制备切片,电镜下观察线粒体形态。提取肝组织线粒体,利用细胞能量代谢仪依次检测加入复合物V底物二磷酸腺苷(ADP)、复合物V抑制剂寡霉素、解偶联剂FCCP、复合物Ⅱ和Ⅲ的抑制剂抗霉素A后5 min线粒体的耗氧率。结果HE和Masson染色结果显示,感染组小鼠肝脏形成肉芽肿,肉芽肿区域发生明显纤维化。Western blotting分析结果显示,感染组肝组织中VDAC1表达水平未发生改变;Beclin1和p-Beclin1的相对表达水平分别为0.65±0.05、0.78±0.03,均较健康对照组下降(P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,感染组小鼠肝组织中Col 1a1、Col 3a1mRNA的相对转录水平分别为4.05±0.23、2.71±0.14,均较健康对照组上升(P<0.01);柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、α酮戊二酸脱氢酶及苹果酸脱氢酶mRNA的相对转录水平分别为0.61±0.03、0.65±0.01、0.41±0.03、0.55±0.01,均较健康对照组下降(P<0.01)。电镜观察可见,感染组肝组织线粒体结构受损,嵴断裂。线粒体功能检测显示,加入复合物V底物ADP后,健康对照组和感染组耗氧率分别为(335±29)、(78±23)pmol/min,差异有统计学意义(P<0.01);加入复合物V抑制剂寡霉素后,健康对照组和感染组耗氧率分别为(80±2)、(31±
- 沈双罗军涛叶建平
- 关键词：日本血吸虫肝纤维化线粒体柠檬酸循环BECLIN1
- 斑马鱼hdac10通过促进自噬提高低温胁迫下的细胞存活被引量：1
- 2022年
- 组蛋白去乙酰化酶10(histone deacetylase 10,HDAC10)是一种重要的表观遗传酶,在介导同源重组、调控转录等多种生物过程中发挥作用,然而其在鱼类低温胁迫中的作用尚不清楚。本研究发现低温胁迫下人(Homo sapiens)HEK-293T细胞和斑马鱼(Danio rerio)ZF4细胞中hdac10的表达水平都显著提高。构建了斑马鱼hdac10过表达质粒并转染HEK-293T细胞,Western blot显示外源性斑马鱼hdac10在HEK-293T细胞中成功表达,同时发现hdac10过表达后自噬相关基因BECN1和LC3的mRNA和蛋白水平都显著上调,低温胁迫下过表达外源性hdac10的HEK-293T细胞存活率显著上升(P<0.05),表明低温胁迫下过表达hdac10可以保护HEK-293T细胞。使用表达hdac10-shRNA的慢病毒感染斑马鱼ZF4细胞,RT-qPCR显示ZF4细胞内源性hdac10被显著敲降,hdac10敲降的ZF4细胞中自噬相关基因becn1和lc3的mRNA和蛋白水平都显著下调,低温胁迫下hdac10敲降的ZF4细胞存活率显著下降(P<0.05),表明低温胁迫下hdac10可以保护ZF4细胞。总之,hdac10可以通过上调细胞自噬相关基因的表达来提高细胞在低温胁迫下的存活。本研究为研究鱼类在低温下的抗寒机制提供了科学依据。
- 燕晓霞季涛罗军涛罗军涛陈静张俊芳韩兵社
- 关键词：斑马鱼存活率自噬
- 改变鱼类体色分布模式的方法
- 本发明提供了一种改变鱼类体色分布模式的方法，在鱼类受精卵发育阶段给予格尔德霉素类似物进行孵育，孵育采用的孵育水内含有5±0.1nmol/L格尔德霉素类似物，鱼类受精卵发育阶段为鱼类受精卵第一细胞期，格尔德霉素类似物专一抑...
- 韩兵社张俊芳罗军涛李艳燕晓霞
- 文献传递
- 寒冷驯化的斑马鱼细胞通过DNA甲基化调控寒冷诱导基因
- DNA 甲基化是重要的表观调控机制之一,在细胞分化、增殖和死亡等生物学过程中起着重要作用。然而,DNA 甲基化在鱼类寒冷驯化过程中发挥功能的机制尚不清楚。在本研究中,将培养于28℃(正常温度)的斑马鱼(Danio rer...
- 张俊芳李文豪陈作舟韩兵社时应娣许琼琼罗军涛李小霞陈良标
- 关键词：斑马鱼
- 敲降组蛋白去乙酰化酶HDAC8对斑马鱼ZF4细胞存活率的影响被引量：1
- 2021年
- 组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为表观遗传酶类的重要一员,能够通过去乙酰化核内组蛋白的方式在细胞转录调控中发挥重要作用,然而,其在鱼类生理中的作用目前报道较少。本研究设计合成了斑马鱼HDAC8的shRNA,用EcoR I和AgeI酶切构建了pLKO.1-hdac8-shRNA重组质粒,同时构建了一个阴性对照重组质粒(nc),接着将pCMV-VSVG、pCMV-Dr8.91两个慢病毒包装质粒分别与设计好的重组质粒共转染到HEK-293T细胞中进行病毒包装。收集病毒并用其感染ZF4细胞,RT-qPCR检测表明ZF4细胞中hdac8成功被敲降。随后使用台盼蓝染色法检测ZF4细胞存活率,并进一步检测了细胞内凋亡相关基因bax、bcl2、caspase-3的表达情况。研究发现:与对照组(nc)细胞相比,敲降hdac8的细胞存活率显著下降(P<0.05),bax及caspase-3的表达量在敲降hdac8的细胞内显著上调,意味着敲降hdac8的细胞死亡的增加可能是通过上调凋亡水平引起的。本研究为后期对斑马鱼在生长发育过程中及环境压力下的凋亡机制的研究提供基础。
- 李飞罗军涛燕晓霞陈静张婷婷韩兵社张俊芳
- 关键词：细胞存活率
- 低温下ZF4细胞miR-183-5p的作用研究
- 2022年
- 目的探讨miR-183-5p在斑马鱼(Danio rerio)胚胎成纤维(ZF4)细胞低温适应中的表达情况与作用机制。方法RT-qPCR检测ZF4细胞中miR-183-5p的表达,使用靶基因预测数据库Targetscan Fish预测miR-183-5p的靶基因,Turbofect转染试剂对miR-183-5p模拟物/miRNA阴性对照(miR-183-5p mimics/miR-NC)进行转染,并进行后续CCK-8法细胞活力检测实验和双荧光素酶活性报告实验。结果18℃低温培养30 d后ZF4细胞中miR-183-5p的表达量显著升高,且细胞活力检测实验发现过表达miR-183-5p可增强低温下ZF4细胞活力;miR-183-5p的保守性分析显示其在物种间高度保守,使用生物信息方法与RTqPCR预测并初步验证了miR-183-5p潜在的靶基因,双荧光素酶活性报告实验进一步验证了miR-183-5p可与egr1的3′UTR结合。结论miR-183-5p可能通过egr1在斑马鱼细胞低温适应过程中起到保护作用,这为进一步探索斑马鱼低温适应机制奠定了基础,并为低温治疗的分子机制研究提供了新思路。
- 牛昊富伟康罗军涛李梦佳张俊芳韩兵社
- 关键词：斑马鱼细胞MIRNA
