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绵羊痒螨兔亚种MMP2基因的转录水平及其重组蛋白间接ELISA的建立: 2022年; 本研究旨在分析绵羊痒螨兔亚种MMP2基因(PocMMP2)的虫体转录水平,及建立针对重组PocMMP2(rPocMMP2)蛋白抗体的间接ELISA检测方法(iELISA)。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定PocMMP2在不同发育阶段虫体、饱食与饥饿虫体的转录水平,采用原核表达系统获得rPocMMP2,经方阵滴定法优化反应条件,建立rPocMMP2-iELISA,并用该方法检测成都地区有痒螨病流行病史兔场的86份兔血清。结果显示:PocMMP2在雌虫、雄虫、若虫和幼虫阶段均有表达,且在饥饿虫体的转录水平显著高于饱食虫体(P<0.05);rPocMMP2约72 ku,主要存在于包涵体中;rPocMMP2-iELISA临界值为0.223,敏感性和特异性分别为86.0%和83.3%,受试者工作曲线下面积(AUC)为0.876,批内与批间重复性变异系数均小于10.00%;该方法的临床检测呈现74.42%的血清阳性检出率(64/86),高于病原学检出率(10.47%,9/86)。PocMMP2可能参与了绵羊痒螨兔亚种发育和入侵宿主过程,且所建立的rPocMMP2-iELISA有良好的敏感性、特异性和较高的重复性,可用于兔痒螨病的血清抗体检测。; 葛优郑晶蒲善秋周宇黄翠锐杨光友谢跃何冉徐璟古小彬; 关键词：MMP2 转录水平间接ELISA

多头带绦虫铜锌超氧化物歧化酶基因的原核表达及其表达产物的酶学活性分析被引量：1: 2016年; 为探讨多头带绦虫铜锌超氧化物歧化酶(C u/Zn-SO D)基因的特征及该酶在多头带绦虫上的抗氧化作用,采用RT-PCR技术扩增脑多头蚴C u/Zn-SO D基因,构建原核表达载体p ET-32a-C u/Zn-SO D;然后将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达;对表达产物进行W estern-blot检测,并进行酶比活性分析。结果显示,多头带绦虫C u/Zn-SO D基因编码蛋白的氨基酸序列与猪带绦虫和肥头绦虫C u/Zn-SO D基因编码蛋白的氨基酸序列的相似性分别为98%和92%;纯化后的多头带绦虫重组Cu/Zn-SOD蛋白的浓度为1.587 m g/m L;用羟胺法测得该重组蛋白的酶比活性为3 125.64 U/mg±76.82 U/mg;H2O2、SDS和EDTA对重组的多头带绦虫Cu/Zn-SOD的酶活性具有较强的抑制作用,而氯仿-乙醇和脲素则对多头带绦虫Cu/Zn-SOD的酶活性并无影响。上述结果为进一步研究多头带绦虫C u/Zn-SO D基因的生物学功能奠定了基础。; 黄兴陈林王宇徐璟郭承古小彬杨光友; 关键词：原核表达

多头带绦虫dUTPase基因的原核表达、组织定位及酶学活性分析: 2017年; 探讨多头带绦虫脱氧尿苷三磷酸酶(Tm-dUTPase)的基因特征,并初步分析Tm-dUTPase的酶学活性。通过原核表达,得到重组Tm-dUTPase蛋白,并对其进行Western blot分析、免疫荧光定位及酶学活性分析。序列分析结果显示,Tm-dUTPase基因ORF框为447bp,编码148个氨基酸,预测的蛋白质分子大小为16.39ku,等电点为6.263;与猪囊尾蚴和豆状囊尾蚴dUTPase基因的氨基酸序列相似性分别为97%和91%。原核表达的TmdUTPase为可溶性蛋白,纯化后的蛋白质质量浓度为0.907mg·mL^(-1),Western blot分析显示,该蛋白质能够被山羊脑多头蚴阳性血清所识别,具有较强的反应原性。免疫荧光定位显示Tm-dUTPase主要分布于多头带绦虫成虫的体内实质区,同时广泛分布于多头带绦虫幼虫(脑多头蚴)的头节和包囊囊壁外层。酶学活性试验测得重组Tm-dUTPase的比活力为986.29U·mg^(-1),EDTA能够抑制Tm-dUTPase活性,而金属离子Mg^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)能够增强Tm-dUTPase活性。上述结果为进一步研究Tm-dUTPase基因的生物学功能奠定了基础。; 黄兴徐璟王宇杨应东万洁郭承古小彬谢跃杨光友; 关键词：原核表达免疫荧光定位

绵羊痒螨重组精氨酸激酶诱导兔皮肤嗜酸性粒细胞的聚集: 2023年; 本研究旨在探究绵羊痒螨精氨酸激酶(arginine kinase of Psoroptes ovi s,Pso AK)对兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集的影响。以永生化角质形成细胞(HaCaT)和痒螨致敏兔分别为体外模型和体内模型,重组Pso AK(r Pso AK)分别刺激HaCaT细胞和皮内注射痒螨致敏兔后,采用RT-qPCR检测重组蛋白处理后HaCaT细胞和注射部位兔皮肤组织中与嗜酸性粒细胞聚集相关因子(IL-4、IL-5、IL-13、TSLP、IL-25、IL-33、CCL5、CCL11、IL-4R)转录水平,以及通过变色酸2R特殊染色观察,并统计兔皮肤组织中聚集的嗜酸性粒细胞数量。结果表明,与空白和载体蛋白对照组相比,0.1μg·mL^(-1)r Pso AK可显著促进HaCaT细胞中IL-13、IL-33、CCL5和CCL11转录水平的增加(P<0.05),以及兔皮肤内IL-4R和CCL5转录水平的增加(P<0.01),其他因子无显著变化(P>0.05);同时,与PBS和载体蛋白对照组相比,r Pso AK可诱导皮肤中嗜酸性粒细胞的数量极显著增加(P<0.001)。综上所述,Pso AK能够促进部分嗜酸性粒细胞聚集相关细胞因子和趋化因子转录水平的增加,且诱导兔皮肤内嗜酸性粒细胞的聚集,表明Pso AK是引发痒螨病皮损区嗜酸性粒细胞聚集的抗原分子,其参与了绵羊痒螨感染的致病过程。; 黄翠锐郝桂英周宇田焱杨富升唐丽杨光友谢跃何冉徐璟古小彬; 关键词：绵羊痒螨皮肤

多拉菌素和芬苯咪唑对林麝毛首线虫(鞭虫)的驱虫试验被引量：3: 2017年; [目的 ]筛选有效驱虫药物,做好林麝毛首线虫(鞭虫)病的防治。[方法 ]对四川省某林麝养殖场的12只感染毛首线虫的林麝,使用多拉菌素注射液(按0.3 mg/kg体重,肌肉注射1次)和芬苯咪唑粉剂(按10mg/kg体重,每天1次,连喂3天)进行驱虫试验。在投药前1天、投药后7天和14天分别采集其粪便进行鞭虫卵EPG计数,计算虫卵转阴率,评估药效。[结果 ]给药后7天、14天,多拉菌素组的平均虫卵转阴率分别是60.00%(3/5)、80.00%(4/5),芬苯咪唑组的平均虫卵转阴率分别是57.14%(4/7)、28.57%(2/7)。[结论 ]多拉菌素对林麝毛首线虫的驱虫效果较好。; 陈冬程建国蔡永华付文龙王洪永颜其贵林海王宇徐璟杨光友; 关键词：林麝多拉菌素驱虫试验

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徐璟