范鹏飞
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
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- 埃博拉病毒截短型糖蛋白GPdmucin的表达与纯化
- 2017年
- 目的:确定黏蛋白区缺失的埃博拉病毒包膜糖蛋白(GPdmucin)的最佳表达系统,并获得纯化的GPdmucin。方法:从埃博拉病毒的包膜糖蛋白(GP)全长基因上扩增GPdmucin序列,构建至pET32a、pFast Bac1和pcDNA3.4三种不同表达系统的质粒中,分别在原核、昆虫和哺乳动物表达系统中进行表达,并用特异抗体鉴定表达情况。结果:原核系统表达的GPdmucin不稳定,活性差;在昆虫表达系统中,GPdmucin在细胞内以不溶形式表达;利用Expi293瞬时蛋白表达系统,GPdmucin在哺乳动物细胞中可溶性表达,Ni柱亲和层析获得的目的蛋白纯度达90%以上,且与特异抗体具有很好的结合活性。结论:获得哺乳动物细胞表达系统表达的GPdmucin蛋白,将用于GPcl的制备、GP抗体筛选、疫苗效果评价及病毒致病机理的研究。
- 范鹏飞迟象阳宋小红房婷吴诗坡陈旖王潇霖张冠英于长明陈薇
- 关键词：埃博拉病毒生物学活性
- 一种人源抗埃博拉病毒包膜糖蛋白的单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源抗埃博拉病毒包膜糖蛋白GP的单克隆抗体，所述抗体具有独特的CDR区，并具有独特的作用位点，计算机模拟分析及生物学实验结果证实所述抗体既作用于GP的NPC1受体结合区，同时也作用于GP的聚糖帽区域，通过...
- 陈薇于长明迟象阳范鹏飞侯利华李建民徐俊杰吴诗坡刘威岑宋小红陈旖张晓鹏房婷付玲
- 文献传递
- 一种人源抗埃博拉病毒包膜糖蛋白的单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源抗埃博拉病毒包膜糖蛋白GP的单克隆抗体，所述抗体具有独特的CDR区，并具有独特的作用位点，计算机模拟分析及生物学实验结果证实所述抗体既作用于GP的NPC1受体结合区，同时也作用于GP的聚糖帽区域，通过...
- 陈薇于长明迟象阳范鹏飞侯利华李建民徐俊杰吴诗坡刘威岑宋小红陈旖张晓鹏房婷付玲
- 利用转基因小鼠筛选全人源炭疽致死因子中和抗体被引量：2
- 2016年
- 炭疽是由炭疽芽孢杆菌引起的严重威胁人类健康的传染病。炭疽毒素包括3种蛋白质成分:保护性抗原(PA)、致死因子(LF)和水肿因子(EF)。PA与LF形成致死毒素(LT),与EF形成水肿毒素(ET)。由于致死毒素(LT)在感染者损伤及死亡中发挥主要作用,因此在炭疽感染晚期单纯使用抗生素治疗难以发挥疗效,治疗性中和抗体成为目前最有效的炭疽治疗药物。目前国外获得的炭疽毒素抗体多为炭疽PA抗体,美国FDA已批准瑞西巴库(人源PA单抗)用于吸入性炭疽的治疗。一旦炭疽芽孢杆菌被人为改构或PA中和表位发生突变,针对PA单一表位的抗体将可能失效,因此针对LF的抗体将成为炭疽治疗的有效补充。目前国外已有的LF抗体多为鼠源抗体和嵌合抗体,而全人源抗体可以避免鼠源抗体免疫原性高等缺点。本研究首先用LF抗原免疫人抗体转基因小鼠,利用流式细胞仪从小鼠脾淋巴细胞中分选抗原特异的记忆B细胞,通过单细胞PCR方法快速获得两株具有结合活性的抗LF单抗1D7和2B9。瞬时转染Expi 293F细胞制备抗体,通过毒素中和实验(TNA)发现1D7和2B9在细胞模型中均显示较好的中和活性,并且与PA单抗联合使用时,表现出较好的协同作用。总之,本文利用转基因小鼠、流式分选技术和单细胞PCR技术的优势,快速筛选到全人源LF抗体,为快速筛选全人源单克隆抗体开辟了新的思路与方法。
- 王潇霖迟象阳刘炬刘威岑刘树玲邱顺芳温中华范鹏飞刘坤宋小红付玲张军于长明
- 关键词：转基因小鼠
