目的观察缺氧环境下咽癌Fadu细胞间质化表型的改变与Postn蛋白表达的相关性。方法采用25μmol/L氯化钴(Co Cl2)化学缺氧方法缺氧24 h,模拟Fadu缺氧环境。采用免疫荧光法检测25μmol/L Co Cl2作用下,Postn蛋白的表达,观察上皮间质化(EMT)相关蛋白的表达变化。通过构建postn si RNA真核表达质粒,瞬时转染Fadu细胞,观察Postn沉默对Fadu间质化蛋白标记表达的影响,采用划痕实验观察Postn沉默对Fadu细胞迁移能力。结果免疫荧光结果显示,25μmol/L Co Cl2作用细胞24 h,Postn表达明显高于正常培养组,Vimentin、Snail和Twist蛋白表达也明显高于对照组,表明低氧环境可促进Fadu细胞增殖和提高细胞间质化程度。采用Postn si RNA真核表达载体转染Fadu细胞,免疫荧光和实时定量PCR结果显示,构建的si RNA表达载体的基因沉默效率为75.43%,转染阳性的Fadu细胞Vimentin。划痕实验证实,Postn基因干扰转染阳性组,细胞迁移率与转染Control质粒的对照组相比明显降低(P<0.01)。结论 Postn蛋白高表达与Fadu细胞低氧环境下的细胞增殖和间质化有关,沉默Postn基因能够明显抑制Fadu细胞的间质化和迁移浸润能力。
