刘锴
- 作品数：10 被引量：2H指数：1
- 供职机构：首都医科大学附属北京友谊医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金王宝恩肝纤维化研究基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 无异源培养条件下人多能干细胞系H1非病毒转染方法的比较和优化
- 2021年
- 目的将人类多能干细胞(hPSCs)进行基因编辑和分化是干细胞治疗的发展趋势。所以在无异源(Xeno-free)的培养条件下,系统地比较研究非病毒的干细胞转染方法有助于临床科研的发展。方法采用E8和Vitronectin人类干细胞Xeno-free培养系统培养人类H1干细胞系,从细胞活力、干细胞分化标记和转染效率三个方面比较并优化了3种主流的非病毒转染方法,分为空白对照组(正常培养的H1,未做任何处理)、转染GFP荧光质粒的电转组、脂质体组和磷酸钙组。多组间比较采用单因素方差分析和Tukey多重比较。结果3种转染方法对H1细胞的分化都没有显著的影响,转染后各组99.4﹪以上的细胞分型为SSEA1-TRA-1-60+。从形态上观察,磷酸钙转染对干细胞损伤严重;电转和脂质体转染对细胞的损伤较小,且可以在Xeno-free培养系统下对干细胞形成有效转染。转染效率方面:优化前,与对照组、电转组、磷酸钙组的GFP阳性细胞率[(0.46±0.10)﹪、(0.06±0.10)﹪、(0.14±0.24)﹪]相比,脂质体组的转染效率(7.99±0.47)﹪最高(P均<0.01)。优化试剂浓度和程序后,电转组的转染效率升高到(65.47±3.07)﹪,比优化后的脂质体组和磷酸钙组的效率都要高[(14.7±0.26)﹪和(4.84±0.25)﹪],差异有统计学意义(P<0.01)。结论电转和脂质体转染适用于Xeno-free培养系统下人类多能干细胞系H1的转染,优化后利用电转程序A13转染H1细胞可以获得本实验中最高的转染效率。
- 刘锴
- OX40调控双阴性T细胞的转化及抑制功能研究
- 2017年
- 目的探讨免疫共刺激分子OX40对双阴性T细胞(DN T细胞)转化、抑制功能的影响及可能的作用机制。方法通过中和抗体及基因敲除的方式将OX40作用阻断,检测在这一过程中DN T细胞的转化效率、抑制功能的变化及OX40对DN T细胞存活的影响。结果通过DN T细胞的转化实验发现,将OX40阻断,DN T细胞的转化效率分别从20.2%、29.1%降为10.5%、15.9%。同时与CD4 T细胞相比,OX40在DN T细胞中高表达,其阳性率为27.0%。通过DN T细胞的体外抑制实验发现,OX40敲除后的DN T对CD4 T细胞的抑制作用明显减弱。通过Annexin V染色发现,OX40敲除后DN T细胞的凋亡率分别从14.6%、22.3%增加为21.1%、35.1%,同时OX40敲除使DN T细胞抗凋亡基因表达降低。结论 OX40敲除能降低DN T细胞的转化效率,减弱其对CD4 T细胞抑制功能,这有可能与OX40敲除所致DN T细胞凋亡增加有关。
- 孙广永孙晓静刘锴田月施文张栋
- 关键词：双阴性T细胞OX40凋亡
- 小鼠CD4T细胞转化的双阴性T细胞的效应分子研究
- 2017年
- 目的研究小鼠CD4T细胞转化的CD4-CD8双阴性T细胞的功能特点，进一步明确双阴性T细胞的免疫抑制作用机制。方法应用转录组测序和蛋白质质谱技术分析了小鼠转化的双阴性T细胞基因表达谱。应用流式细胞术等技术验证了细胞活化分子CD44、CD69和OX40的表达水平并应用CFSE染色法验证双阴性T细胞的杀伤功能。结果小鼠转化的双阴性T细胞表达了与其他成熟CD4T细胞不同的细胞表型。小鼠转化的双阴性T细胞明显高表达细胞表面活化分子CD44、CD69和OX40，以及颗粒酶、穿孔素等细胞杀伤相关基因。穿孔素基因敲除的双阴性T细胞抑制淋巴细胞增殖的能力明显降低。结论小鼠CIMT细胞转化的双阴性T细胞是与其他成熟CD4T细胞不同的T细胞终末分化亚群。小鼠转化的双阴性T细胞高表达细胞活化分子和免疫杀伤类细胞因子，并主要通过穿孔素途径发挥免疫抑制功能。
- 田丹孙广永刘锴田月施文王天琪金华张春盼张栋
- 关键词：T淋巴细胞双阴性T细胞细胞转化转录组测序
- GITR阳性的效应T淋巴细胞参与AAF/PH小鼠肝脏再生调控
- 2023年
- 目的 分析2-乙酰氨基芴联合部分肝切除(AAF/PH)小鼠肝脏再生模型肝组织中浸润的效应T淋巴细胞的变化情况。方法 C57BL/6J小鼠每天应用AAF连续灌胃5 d后切除1/3肝组织,术后继续每天应用AAF灌胃至术后7 d、14 d。利用免疫荧光染色、蛋白免疫印迹检测肝脏前体细胞活化情况;采用多色免疫荧光染色与流式细胞术检测肝组织中效应T淋巴细胞及其活化标志物GITR阳性细胞比例。结果 AAF/PH组小鼠术后7 d肝组织重量即可恢复至对照小鼠水平。肝组织中炎症细胞浸润和纤维化不明显,但术后14 d时,肝脏汇管区中出现明显的炎症细胞浸润与细胞外基质沉积。随着术后时间延长,肝组织中Sox9+肝脏前体细胞数量逐渐增多,肝组织Sox9蛋白表达水平亦显著增加。流式细胞分析结果显示,随着术后时间延长肝组织中浸润的CD8+T淋巴细胞的比例显著增加,术后14 d为对照组的1.47倍(P=0.0289),而糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)阳性的CD8+T淋巴细胞比例呈先升高再降低的变化趋势,术后7 d、14 d分别为对照组的1.5倍(P=0.0098)、0.65倍(P=0.0427)。尽管术后CD4+T淋巴细胞比例无明显变化,但术后14 d时GITR阳性的CD4+T淋巴细胞比例显著降低,为对照组的0.85倍(P=0.0225)。结论 AAF/PH小鼠肝再生模型中伴随肝脏前体细胞的活化,效应T淋巴细胞参与了小鼠的肝脏再生过程。
- 李丽何宇刘锴王萍
- 一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法
- 本发明公开了一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，特别是诱导多能干细胞向CD34+CD43+CD45+造血干细胞的定向分化的培养基及方法。利用上述材料（例如添加剂Ⅰ、添加剂Ⅱ和添加剂Ⅲ，或，培养基Ⅰ、培养基Ⅱ和...
- 刘锴
- 双阴性T细胞的转化扩增方法
- 本发明公开了一种双阴性T细胞的转化扩增方法，包括如下步骤：(1)提取起始样品中的单个核细胞，去除该单个核细胞中的CD8<Sup>+</Sup>T细胞和NK细胞；(2)将步骤(1)得到的样品在体外用包含T细胞刺激剂及细胞因...
- 张栋李新民赵新颜孙广永刘锴田丹田月施文孙晓静许虎峰
- 一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法
- 本发明公开了一种用于多能干细胞向造血干细胞分化的材料和方法，特别是诱导多能干细胞向CD34+CD43+CD45+造血干细胞的定向分化的培养基及方法。利用上述材料（例如添加剂Ⅰ、添加剂Ⅱ和添加剂Ⅲ，或，培养基Ⅰ、培养基Ⅱ和...
- 刘锴
- 文献传递
- CD4 T细胞转化的DN T细胞对小鼠EAE发病的预防被引量：1
- 2017年
- 利用CD4 T细胞体外转化获得具有下调免疫作用的双阴性T细胞(DN T细胞),利用DN T细胞预防性治疗常规变态反应性脑脊髓炎(EAE)小鼠(Mus musculus)模型.观察EAE造模组和DN T细胞预防治疗组两组小鼠EAE评分、体重、关键淋巴细胞因子、组织切片的区别,探索DN T淋巴细胞发挥功能的可能机制.首先诱导获得了抗原特异性的DN T细胞;其次发现一次DN T淋巴细胞的过继输注可以显著降低EAE造模的发病程度,缓解小鼠因为EAE发病而造成的体重减轻;同时和造模组相比,DN T细胞预防组脑部组织淋巴细胞浸润略有减轻,血浆中IL-2和IL-4的分泌也有一定程度的降低;最后通过CFSE增殖实验证实DN T细胞可以显著抑制EAE模型中致炎CD4 T细胞的增殖.本研究证实体外转化的DN T细胞可以减轻EAE模型的发病程度,这种预防作用与DN T淋巴细胞可以抑制致炎CD4 T淋巴细胞的增殖相关.
- 刘锴许虎峰王磊孙晨阳李新民张栋
- 关键词：双阴性T细胞多发性硬化症
- 一种诱导型肝脏前体细胞的制备方法及其在肝病治疗中的用途
- 本发明公开了一种诱导型肝脏前体细胞的制备方法及其在肝病治疗中的用途。利用本发明的制备方法和材料，可以实现诱导成体体细胞转化成诱导型肝脏前体细胞，且这类诱导型肝脏前体细胞表达干细胞标志物、肝细胞标志物、胆管细胞标志物，具有...
- 刘锴王萍尤红
- 医疗机构为主体的干细胞临床研究存在的问题与建议被引量：1
- 2023年
- 以国家、行业相关的政策为依据,从干细胞制剂的制备过程、临床前研究、临床研究三个方面,分析医疗机构作为责任主体开展干细胞临床研究过程中存在的问题和建议采取的解决措施。在干细胞制剂制备方面,由于不具备干细胞制剂制备条件的医疗机构需要与干细胞制剂制备机构合作才能开展干细胞临床研究,建议建立区域性制备中心和质量检测机构,实现干细胞制剂的标准化制备和质量动态检测以保证干细胞制剂的质量;在干细胞临床前研究方面,建议医疗机构依托优势学科探索干细胞治疗的适应证并开展临床前研究;在干细胞临床研究方面,建议医疗机构强化主体责任意识并探索可行的移植干细胞药代动力学研究方法与途径。在干细胞临床研究三级审核制度的基础上,由省级机构对干细胞临床研究项目的实施过程进行监管,以保证干细胞临床研究的合规性、安全性和疗效的真实评价。
- 崔焱刘锴李丽王萍
- 关键词：干细胞临床前研究
