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陈继军: 作品数：16 被引量：33H指数：4; 供职机构：兰州生物制品研究所更多>>; 发文基金：甘肃省中青年科技研究基金国家科技支撑计划甘肃省科技重大专项计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>

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重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化被引量：4: 2015年; 目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量。方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度。结果:293SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257)。优化的转染条件为:质粒用量0.61μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007)。结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍。; 陈继军秦海艳安晨乔玉玲李晓进毛晓燕; 关键词：HEK293 EBNA1

重组表达A型肉毒毒素重链C端多肽及其在多抗血清中的抗原性研究: 2016年; 目的对A型肉毒毒素重链C端多肽原始基因序列进行密码子优化后转入大肠杆菌系统进行原核表达并纯化,研究其在多抗血清中的抗原性。方法使用http://www.jcat.de/数据库等生物信息学技术对A型肉毒毒素重链C端多肽原始基因序列进行密码子优化后装入原核表达载体p ET-22b(+)中,转入大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)表达并纯化,通过动物实验研究其在多抗血清中的抗原性。结果成功表达并纯化了A型肉毒毒素重链C端多肽,并对其抗原性进行验证。结论 A型肉毒毒素重链C端多肽作为抗肉毒毒素的二代亚单位疫苗组分以及肉毒类毒素的替代品,在制备以及激起中和抗体的方面具有明显的优势。; 卢卫嘉王建锋陈继军秦海燕毛晓燕; 关键词：抗原性

改良抗体结合实验检测灭活狂犬病疫苗效价被引量：1: 2014年; 目的:建立抗体结合试验检测狂犬病疫苗(aG株)效价的方法。方法:将待检测疫苗与疫苗标准品梯度稀释后分别加入人抗狂犬病毒免疫球蛋白国家标准品中和1 h,之后加入80%感染剂量的狂犬病毒CVS-11,体外中和1h后接种BSR细胞,培养24 h后免疫荧光染色,在显微镜下观察结果,通过检测剩余病毒量计算待检疫苗的效价,同时与小鼠中和试验法(NIH法)测定狂犬病疫苗效价进行比较。结果:2种方法对8个样品效价的检测结果无显著统计学差异(P=0.997,配对t检验)。结论:初步建立了改良抗体结合试验,可用于狂犬病疫苗中间产品的质量控制。; 陈继军马超秦海燕马瑞毛晓燕; 关键词：狂犬病疫苗效价

冻干人血浆补体的制备及其稳定性被引量：3: 2016年; 目的制备冻干人血浆补体,并观察其在4种不同保存温度条件下的稳定性。方法制备3批冻干人血浆补体,将每批样品分别保存在-70、4、25和37℃条件下,采用补体50%溶血试验测定于-70和4℃条件下保存第1、15、30、60、90、120、180、270、365天以及于25和37℃条件下保存第1、5、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120天的CH_(50);细胞增殖-毒性检测法测定补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测的影响。结果-70和4℃保存的3批冻干人血浆补体,1年内CH_(50)平均下降了19.5%和36.3%,25和37℃保存的3批冻干人血浆补体,3个月CH_(50)平均下降了53.4%和60.7%。与上市补体和CH_(50)为30 U/ml的冻干人血浆补体相比,CH_(50)为15 U/ml的冻干人血浆补体对抗CD_(20)抗体CDC活性检测结果无影响。结论在-70和4℃条件下保存的冻干人血浆补体的CH_(50)相对较稳定,但随着保存温度的升高,CH_(50)下降有加速的趋势。CH_(50)大于15 U/ml的冻干人血浆补体可用于治疗性抗体CDC活性检测。; 秦海艳熊颖乔玉玲陈继军安晨毛晓燕; 关键词：血浆冷冻干燥补体稳定性

大肠杆菌表达的破伤风C片段的纯化及免疫原性分析: 目的:建立纯化大肠杆菌重组表达的破伤风毒素C片段(tetanus toxin C fragment,TTc)的纯化工艺,验证免疫原性。方法:通过硫酸铵沉淀、疏水层析及离子交换层析三步纯化目的蛋白。腹腔3剂免疫BALB/c...; 陈继军毛晓燕王建锋乔玉玲; 关键词：纯化免疫原性; 文献传递

重组破伤风毒素C片段的纯化及其免疫原性被引量：4: 2011年; 目的建立大肠杆菌表达的重组破伤风毒素C片段(Tetanus toxin C fragment,TTc)的纯化工艺,并检测其免疫原性。方法取超声破碎后的重组菌上清,经硫酸铵沉淀、Phenyl Sepharose Fast Flow疏水层析和DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析后,经腹腔免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测血清抗体水平。结果经3步纯化,目的蛋白纯度达96.7%;经还原及非还原SDS-PAGE分析蛋白条带一致,相对分子质量约为50 000,不含多聚体,为单体蛋白;纯化的TTc可刺激小鼠产生免疫应答,但血清抗体水平显著低于破伤风类毒素组(P<0.05)。结论已建立了大肠杆菌表达的重组TTc的纯化工艺,纯化的TTc对小鼠具有免疫原性。; 陈继军毛晓燕王建锋乔玉玲; 关键词：破伤风毒素纯化免疫原性

诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及验证被引量：1: 2020年; 目的建立汉逊酵母表达的重组诺如病毒基因工程疫苗中残余宿主DNA实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法,并进行验证。方法采用磁珠法提取汉逊酵母基因组DNA,获得标准品,建立q PCR标准曲线,并进行专属性、线性、准确度、精密度和耐用性验证。结果专属性验证结果显示,与对照制剂(注射用水、缓冲液、Vero细胞和CHO细胞培养上清DNA)相比,建立的方法对汉逊酵母DNA具有特异性扩增曲线;线性验证中5次试验标准曲线相关系数(R2)均>0.98;准确度验证试验不同浓度样品的加标回收率在95.12%~105.72%之间,均在70%~130%范围内;重复性和中间精密度验证试验相对标准偏差(RSD)均小于30%;耐用性验证中,Proteinase K不同消化温度下检测结果的RSD为20.75%,不同蛋白浓度供试品检测结果的RSD为27.11%,均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论建立的方法专属性、线性、准确度、精密度和耐用性均符合要求,可用于检测重组诺如病毒类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗中残余宿主DNA。; 姜英雷清张巧玲陈继军杨俊杰; 关键词：实时荧光定量PCR 汉逊酵母

人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库的构建及筛选被引量：4: 2012年; 目的构建人源抗狂犬病病毒单链抗体(Single-chain fragment variable,scFv)噬菌体抗体库,并进行筛选。方法以接种过狂犬病疫苗的21份高效价的健康人外周血为原料,提取淋巴细胞总RNA,PCR扩增VH、Vκ、Vλ基因,重叠延伸PCR扩增获得scFv基因,克隆入噬菌粒pS100,电转化E.coli TG1,建立scFv初级抗体库,并进行基因序列分析及鉴定。以灭活的狂犬病病毒为抗原,进行3轮scFv噬菌体抗体库的富集筛选,随机挑取单克隆,制备噬菌体抗体颗粒,并进行ELISA分析,阳性克隆进行序列分析,采用快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent facus inhibition test,RFFIT)检测噬菌体抗体颗粒的中和活性。结果获得了库容为1.7×108的人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,该抗体库具有较好的序列正确率和多样性,经3轮筛选后,ELISA分析显示,共获得24个序列各不相同的针对狂犬病病毒的阳性克隆,对其中7个克隆的噬菌体抗体颗粒进行RFFIT检测,均具有中和活性。结论已成功构建了人源抗狂犬病病毒scFv噬菌体抗体库,并建立了筛选方法。; 毕司英毛晓燕陈继军秦海艳; 关键词：狂犬病病毒噬菌体展示技术抗体库

冻干人用狂犬病纯化疫苗的研制被引量：3: 2004年; 在以原代地鼠肾细胞培养生产狂犬病疫苗工艺的基础上,通过对病毒收获液的浓缩倍数、灭活方式的改进及优化、冻干稳定剂的筛选、冻干曲线的确立,制备出了冻干疫苗,其质量及稳定性较液体疫苗有了整体水平的提高,各项检定结果均符合《中国生物制品规程》(2000版)。; 邹勇李红芳郭锡雷张锡云龚健王莫非陈继军张邦利李帆朱玉梅王玉琳; 关键词：狂犬病疫苗纯化灭活冻干

抗狂犬病病毒单链抗体的筛选及鉴定被引量：3: 2013年; 目的:利用噬菌体展示技术构建的噬菌体抗体库,筛选、表达及鉴定具有体外中和活性的抗狂犬病病毒单链抗体。方法:以21份接受狂犬病病毒疫苗免疫的健康人外周血构建的抗狂犬病病毒scFv噬菌体免疫库为基础,免疫管包被纯化狂犬病病毒颗粒,通过三轮筛选,ELISA检测单克隆噬菌体抗体颗粒的阳性率,DNAStar和Vbase2对阳性克隆进行序列分析。序列正确的单链抗体构建原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达单链抗体。经压力破碎、镍亲和层析对表达的蛋白进行纯化。RFFIT检测纯化蛋白对狂犬病病毒的体外中和活性。同时使用间接ELSIA检测获得的scFv对3aG,CVS,CTN及PV株的交叉反应性。结果:共获得40个阳性、基因测序结果正确的单链抗体。其中7个获得原核表达菌株,但只有3个获得较高的可溶性表达。RFFIT结果表明有4个scFv比活大于500 IU/mg。7个scFv对4种病毒株均有一定的交叉反应。结论:成功从该scFv噬菌体免疫库中筛选出特异性scFv;RFFIT结果表明获得的scFv具有体外中和狂犬病病毒的活性。; 陈继军毛晓燕乔玉玲毕司英; 关键词：单链抗体狂犬病病毒

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