李强
- 作品数：21 被引量：45H指数：5
- 供职机构：解放军第302医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用表达谱芯片技术对NS5ATP7反式调节基因的研究
- 2004年
- 目的:应用基因表达谱芯片研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白7(humangene7transactivatedbynonstructuralprotein5AofhepatitisCvirus,HCVNS5ATP7)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP7基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP7,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NS5ATP7转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体pcDNA3.1(-)的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP7后,有12条差异基因表达,其中4条基因表达增强,8条基因表达降低.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了NS5ATP7的反式调节基因,为进一步阐明NS5ATP7的反式激活作用及免疫调节机制提供了新的依据.
- 张健刘妍成军王琳邵清梁耀东李强刘敏
- 关键词：反式调节基因非结构蛋白5A基因表达
- 酵母双杂交技术筛选肝细胞中与乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白C-12相互作用蛋白的研究被引量：4
- 2003年
- 目的:筛选并克隆人肝细胞中与 HBcAg 肝细胞结合蛋白 C-12新基因相互作用蛋白的基因,进一步探讨 HBcAg 结合蛋白 C-12新基因的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增 C-12基因,连接入酵母表达载体 pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝 cDNA 文库质粒pACT2的酵母细胞 Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和 X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出 C-12基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基又能在铺有X-α-gal 的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落21个,其中含金属硫蛋白 A2基因的菌落有3个、组织蛋白酶 B 基因1个、载脂蛋白 M 基因1个、细胞色素 C 氧化酶Ⅱ基因3个、人类受体蛋白酪氨酸激酶变异因子基因1个、KH 型剪接调控蛋白基因1个、磷脂酰肌醇脱酰酶聚糖Q 转录变异因子1基因1个、铁蛋白轻链基因2个、鸟氨酸脱羧酶1基因1个、血液凝固因子Ⅸ基因1个、乙酰乳酸合酶基因1个、钙激活蛋白酶基因1个、核外三磷酸盐双磷脂酰水解酶5基因1个、血浆α-球蛋白抑制因子 H4基因1个和未知蛋白基因2个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白 C-12新基因相互作用蛋白的编码基因,为进一步研究 HBcAg 在病毒装配、损害肝细胞、感染致病等方面的具体作用提供 (?)新线索.
- 梁耀东陆荫英成军李强王琳吴君程明亮
- 关键词：酵母双杂交技术肝细胞乙型肝炎病毒多聚酶链反应
- 酵母双杂交技术筛选人白细胞中与乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白基因被引量：2
- 2003年
- 目的:筛选并克隆人白细胞中与乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白(HBxAg)相互作用蛋白的基因,进一步探讨 HBxAg 的生物学功能.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增 HBxAg 基因,连接入酵母表达载体 pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人淋巴 cDNA 文库质粒 pACT2的酵母细胞 Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和 X-α-半乳糖(X-α-gal)上双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出 HBxAg 基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和在铺有 X-α-gal 的四缺培养基上均能生长,并变成蓝色的真阳性菌落50个,其中含真核翻译延伸因子2基因20个,真核翻译延伸因子1基因1个,真核翻译起始因子3基因2个,急性髓样白血病 MTG8蛋白基因2个,髓样关联分化蛋白基因1个,髓样分化主反应蛋白基因1个,皮肤 T 细胞淋巴瘤肿瘤抗原基因1个,大组织相容性复合物 Ib 抗原基因3个,白细胞抗原 CD37基因1个,慢性白细胞性白血病相关抗原基因1个,α白细胞整联蛋白基因1个,生长停止和 DNA 损伤诱导因子34基因1个,转录变异因子1基因2个,蛋白磷酸酶1调控抑制因子15A 基因1个,单核细胞系胞苷脱氨酶基因1个,巨噬细胞钙离子依赖型凝集素2基因1个,KIAA1949蛋白基因3个,尿激酶型血浆素原激活剂基因1个,GDP 分解抑制因子基因3个,软骨素4磺基转移酶基因1个,锌指蛋白1A 亚目基因1个和未知蛋白基因1个.结论:成功克隆出乙型肝炎病毒 X 蛋白的结合蛋白,为进一步研究 HBxAg 的生物学作用提供了新的线索.
- 梁耀东成军李强王琳陆荫英吴君程明亮
- 关键词：酵母双杂交技术白细胞乙型肝炎病毒X蛋白结合蛋白生物学功能
- 酵母双杂交技术筛选白细胞中HCVNS3蛋白结合蛋白基因被引量：5
- 2003年
- 目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞中与丙型肝炎病毒(HCV)NS3蛋白结合蛋白的编码基因.方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增 NS3基因,连接入酵母表达载体 pGBKT-7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞 Y187进行配合,在营养缺陷型培养基上进行双重筛选阳性菌落,增菌后提出质粒,转化入大肠杆菌(DH5α),提取质粒并测序,进行生物信息学分析.结果:成功克隆出 NS3基因并在酵母细胞中表达,配合后选出在四缺(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基和在铺有 X-α-半乳糖(x-α-gal)的四缺培养基上均能生长并变成蓝色的真阳性菌落18个,其中4个真核细胞翻译延伸因子2;2个免疫球蛋白λ轻链;1个肌动蛋白β;1个铁蛋白轻多肽;1个(丝裂原)活化蛋白激酶3;2个肌球蛋白因子1;1个白介素2受体β;1个富含精氨酸/丝氨酸剪切因子6;1个组织蛋白酶 S;1个2’-5’寡腺甘酸合成酶类似物;1个缺失精子缺乏相关蛋白2;1个 CNN2;1个新基因.结论:成功克隆出 HCV NS3的结合蛋白,为进一步研究HCV 的作用提供了新线索.
- 邵清成军白雪帆王琳张健梁耀东刘敏李强
- 关键词：酵母双杂交技术白细胞丙型肝炎病毒多聚酶链反应
- 应用表达谱芯片技术筛选NS5ATP9反式调节基因的研究被引量：3
- 2004年
- 目的:应用基因表达谱芯片技术研究丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9(NS5ATP9)的反式调节基因.方法:构建NS5ATP9基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP9,应用基因表达谱芯片技术对pcDNA3.1(-)-NSSATP9转染的HepG2(人肝母细胞瘤细胞系)细胞和转染空载体pcDNA3.1(-)的相同细胞的差异表达mRNA进行检测和分析.结果:HepG2细胞经转染NS5ATP9后,有16条差异基因表达水平发生显著改变,其中3条基因表达增强,13条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞的增生、分化、凋亡及细胞的信号转导密切相关.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了丙型肝炎病毒NS5ATP9作用HepG2细胞后差异表达基因,为阐明NS5ATP9的作用提供了新的依据.
- 李强梁耀东成军王琳王建军张健刘妍程明亮
- 关键词：肝炎病毒HCV基因功能丙型肝炎
- 抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A单链抗体的制备及免疫组织化学研究被引量：2
- 2003年
- 目的:研制抗丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A的人源噬菌体单链可变区抗体,并探讨其在临床病理学诊断中的应用价值。方法:以大肠杆菌表达的重组HCV非结构蛋白NS5A为固相抗原,利用抗原-抗体亲和性结合的原理,从半合成的人源可变区噬菌体抗体库中经过5轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选过程及酶联免疫吸附试验(ELISA)和DNA序列分析,获得HCV NS5A的人源单链抗体;用该抗体对7721转染全长HCV cDNA后筛选的阳性克隆细胞中的HCV NS5A抗原进行免疫组化鉴定。结果:ELISA结果表明,制备的HCV NS5A人源单链抗体能与HCV NS5A抗原特异性结合;免疫组化结果表明,该抗体能够特异性识别HCV NS5A抗原,与正常肝细胞无交叉反应。结论:此法制备的单链抗体亲和性好,特异性强,且制备方法简便,周期短,为HCV NS5A病原的检测提供了新的有效的检测手段。
- 钟彦伟成军焦成松张忠东李强李莉陈菊梅
- 关键词：抗丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A单链抗体医学细胞生物学人体免疫学
- 白细胞中与NS5ATP5蛋白结合的蛋白基因的筛选与克隆被引量：1
- 2004年
- 目的:采用酵母双杂交体系寻找与NS5ATP5相互作用的白细胞蛋白,以探讨NS5ATP5的生物功能. 方法:应用酵母双杂交系统3,构建NS5ATP5诱饵质粒, 转化酵母AH109,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,于涂有x-α-gal营养缺陷型培养基上筛选生长.挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析. 结果:筛选出10个与NS5ATP5特异性相互作用的克隆,其中1个为金属硫蛋白,1个为热休克蛋白HSP60,1个为主要组织相容性复合体Ⅱ淋巴细胞抗原DQB,5个为人类重排免疫球蛋白λ-轻链,2个是未知功能基因. 结论:初步克隆了NS5ATP5与白细胞结合蛋白基因,对NS5ATP5的功能研究有一定的提示作用;为以后研究这些能与NS5ATP5相互作用的基因在白细胞中的生理功能奠定了基础.
- 张健成军王琳邵清陆荫英梁耀东李强刘敏
- 关键词：白细胞蛋白基因克隆
- 淋巴细胞内与乙型肝炎病毒X蛋白结合的新蛋白X-30编码基因的克隆
- 2003年
- 目的:为探讨 HBxAg 在 HBV 致病过程中的作用,筛选并克隆人淋巴细胞 cDNA 文库中与 HBxAg 有相互作用的蛋白基因.方法:利用酵母双杂交系统3筛选并克隆人淋巴细胞 cDNA文库中与 HBxAg 有相互作用的蛋白的基因.将 HBxAg 编码基因连接入酵母表达载体 pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞 AH109并在其内表达,然后与转化了人淋巴cDNA 文库质粒 pACT2的酵母细胞 Y187进行配合,双重筛选阳性菌落,提取质粒并测序,结果进行生物信息学分析,发现其中有1个未知基因.根据 GenBank 中的序列信息设计引物,从 HepG2细胞提取总 RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序证实,命名为 X-30,在 GenBank 中注册,注册号为AY280722.结果:X-30基因的编码序列全长为315个核苷酸(nt),编码产物由103个氨基酸残基(aa)组成.结论:HBxAg 与淋巴细胞结合蛋白新型基因 X-30的筛选与克隆,为进一步研究 HBxAg 的分子生物学机制及探索新型治疗技术奠定了基础.
- 梁耀东李强成军王琳陆荫英吴君程明亮
- 关键词：淋巴细胞乙型肝炎病毒X蛋白克隆分子生物学机制逆转录多聚酶链反应
- 丙型肝炎病毒蛋白对TRAF2蛋白信号转导影响的研究被引量：1
- 2003年
- 杨艳杰成军陈东风钟彦伟张忠东李强
- 关键词：丙型肝炎病毒信号转导生物学功能肿瘤坏死因子受体相关因子
- 应用酵母双杂交技术筛选人白细胞中与NS5ATP9蛋白结合蛋白的编码基因被引量：2
- 2004年
- 目的:我们在以往的研究中,应用抑制性消减杂交技术(SSH)筛选得到了丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9(NS5ATP9),NS5ATP9是一种未知功能新基因.为了进一步研究NS5ATP9的生物学功能,应用酵母双杂交技术, 筛选并克隆人白细胞中与NS5ATP9蛋白相互作用蛋白的基因,进一步阐明NS5ATP9的生物学功能及其作用途径. 方法:用多聚酶链反应(PCR)法扩增NS5ATP9基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人白细胞cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落并测序,进行生物信息学分析. 结果:成功克隆出NS5ATP9基因并在酵母细胞中表达,配合后选出既能在四重缺陷(SD/-Trp-Leu-Ade-His)培养基上生长,又能在铺有C-α-gal的四缺培养基上变蓝的真阳性菌落46个,其中含人类免疫球蛋白轻链13个,核小体表面蛋白10个,铁蛋白重链2个,人类重组免疫球蛋白λ轻链11个,14-3-3家族蛋白1个,脑膜炎球菌PorA蛋白1 个,RNA多聚酶Ⅲ3个,烟草有丝分裂原激活蛋白激酶1 个,细胞色素P450Ⅱ2个,SLIT2蛋白1个,DNA依赖蛋白激酶催化亚基1个. 结论:成功克隆出丙型肝炎病毒NS5ATP9蛋白的结合蛋白,为进一步研究NS5ATP9的生物学作用提供了新的线索.
- 李强梁耀东成军王琳张建邵清刘敏程明亮
- 关键词：酵母双杂交技术白细胞抑制性消减杂交技术SSH编码基因酵母细胞
