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改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O_(157):H_7被引量：4: 2006年; 目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157H7的rfbE保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5’端,建立改良分子信标实时PCR检测O157H7的反应体系,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌,只有大肠杆菌O157H7有荧光信号,其余10种全无荧光信号,且与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为64fg,菌液灵敏度为59cfu/ml或2cfu/PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157H7均出现特异的荧光信号,无干扰。对89份食品样品进行检测,5份O157H7实时PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2h。5份阳性样本,经传统方法培养,有3份检出大肠杆菌O157H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于大肠杆菌O157H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。; 贺连华扈庆华石晓路郑琳琳李庆阁张佳峰庄志雄刘小立张顺祥王冰吴平芳刘涛; 关键词：大肠杆菌O157:H7 实时PCR

改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌被引量：4: 2006年; 目的:建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌(LMO)的快速方法,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法:根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标-实时PCR检测体系,应用于食品中LMO检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110 fg,菌液灵敏度为99 cfu/m l或4 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时间由原来的至少4 d缩短至1 d。对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份LMO细菌培养阳性。结论:改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强,能提高LMO的检出率和准确性,可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。; 王冰扈庆华石晓路李庆阁郑琳琳林一曼贺连华张顺祥; 关键词：产单核李斯特菌实时PCR

食品污染产单核李斯特菌不同检测方法学评估被引量：3: 2007年; 目的评价以不同方法检测食品中污染产单核李斯特菌(LMO)效果,并对其检测方法进行优化。方法同时用国标法、改良国标法、改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法对深圳市2004～2006年食品样品进行LMO分离鉴定并进行比较。结果228份样品中8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份LMO细菌培养阳性。国标法、改良国标法,改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法都能检出LMO,检出率分别为2.63%、2.63%、3.50%、2.63%。深圳市食品中LMO的污染率为2.63%(国标法),速食类冻品污染率为12.8%(国标法)。结论荧光PCR法检出率最高,将检测时间由原来的至少4～5d缩短至1d,可用于食品污染LMO状况调查的初筛和食物中毒的快速诊断;国标法与改良国标法的检出率相等,而后者的操作更方便。免疫磁性分离法的检出率最低。; 王冰扈庆华石晓路李庆阁郑琳琳林一曼张顺祥林世平邓辉萍; 关键词：产单核李斯特菌实时荧光PCR 免疫磁性分离

多重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法: 本发明涉及一种多重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法，根据待测多种致病菌的特异基因序列设计多对引物和多个改良分子信标探针，采用荧光PCR－改良分子信标扩增待测多种致病菌特异基因的序列，利用分子信标与扩增产物的...; 扈庆华李庆阁郑琳琳石晓路郑薇薇王冰庄志雄刘小立张顺祥; 文献传递

改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌被引量：22: 2006年; 目的:建立改良分子信标-实时PCR检测志贺菌的快速方法,应用于志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。方法:根据GenBank公布志贺菌ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR-改良分子信标检测体系,应用于对志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为93 fgμ/l,菌液灵敏度为64 cfu/m l或2 cfu/PCR反应体系,无交叉反应。此反应体系检测67株志贺菌,均出现特异的荧光信号。对细菌性食物中毒样本等共657份样品进行志贺菌检测,42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌细菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需2 h^1 d时间。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于志贺菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段,对于提高肠道门诊的工作效率有重要意义。; 吴平芳石晓路郑琳琳扈庆华李庆阁张佳峰庄志雄刘小立张顺祥王冰贺连华林一曼; 关键词：志贺菌实时PCR

双重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法: 本发明涉及一种双重荧光PCR－改良分子信标检测食源性致病菌的方法，根据待测两种致病菌的特异基因序列设计对应的一对引物1和改良分子信标探针1，以及一对引物2和改良分子信标探针2，采用荧光PCR－改良分子信标扩增待测两种致病...; 扈庆华李庆阁郑薇薇石晓路郑琳琳王冰庄志雄刘小立张顺祥; 文献传递

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