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整体原位杂交检测ERα基因在小鼠胚胎发育中的表达被引量：4: 2008年; 为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记的正反义RNA探针,然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERα在小鼠胚胎中的表达。结果构建了ERα/pGEM-3Z质粒,获得高效价的正反义dig-ERαRNA探针。运用该探针检测到ERα在10.5dpc胚胎的前脑、脊神经管、生殖嵴、肢芽及颌弓中表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、脊髓、肢芽及生殖系统中表达,为进一步研究ERα在小鼠胚胎发育中的功能打下了基础。; 张子峰樊少华陆军吴冬梅单群胡斌郑元林; 关键词：RNA探针整体原位杂交小鼠胚胎

中华蜜蜂蜂毒蛋白酶基因cDNA片段的克隆及序列分析被引量：3: 2008年; 为从中华蜜蜂蜂毒中扩增蛋白酶(Protease)基因,根据意大利蜜蜂蜂毒蛋白酶基因(GenBank登录号NM_001011584)的保守区设计引物,从中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂毒腺中快速抽提总RNA,将从毒腺中扩增出的产物克隆到pGEM-Teasy载体上,导入大肠杆菌JM109,阳性克隆经双酶切鉴定后测序,将测序得到的中华蜜蜂蛋白酶基因与已知的意大利蜜蜂核苷酸序列比较,同源性为95.22%。氨基酸序列分别与意大利蜜蜂、玉米螟、胡蜂、冈比亚按蚊、棉铃象甲虫、埃及斑蚊、热带爪蟾、棕尾别麻蝇、广盐螯虾、亚马逊蝮蛇进行同源性比较,同源性分别为91.71%、46.70%、41.94%、41.21%、39.56%、38.38%、37.35%、36.17%、34.24%、28.49%。本试验首次成功从中华蜜蜂工蜂毒腺中扩增到长度为545 bp、编码蛋白酶的基因片段,所得序列已提交Gen-Bank,登录号为:EF547156,这为以后克隆该基因全长序列以及利用基因工程技术进行蜂毒产业化开发奠定一定的基础。; 樊少华张子峰陆军吴冬梅单群胡斌郑元林缪晓青; 关键词：中华蜜蜂蜂毒蛋白酶基因克隆

中华蜜蜂α-葡萄糖苷酶基因片段的克隆与序列分析被引量：2: 2008年; 以意大利蜜蜂α-葡萄糖苷酶基因(GenBank登录号NM_001040259)的保守区设计引物,从中华蜜蜂(Apis cerana cerana)工蜂中提取总RNA,逆转录成cDNA,进行RT-PCR,将扩增产物克隆到pGEM-T easy载体上,导入大肠杆菌JM109,阳性克隆经双酶切鉴定后测序,将测序得到的中华蜜蜂α-葡萄糖苷酶(alpha-glucosi-dase)基因与已知的意大利蜜蜂核苷酸序列比较,同源性为91.31%。氨基酸序列与意大利蜜蜂、黑腹果蝇、埃及斑蚊、冈比亚按蚊、印度蜜蜂、小蜜蜂、非洲爪蟾、日本蜜蜂、赤拟谷盗、尖音库蚊的同源性分别为90.83%、48.11%、47.28%、45.74%、42.25%、41.21%、38.10%、37.93%、35.56%、33.88%。首次从中华蜜蜂工蜂中成功扩增到长度为745 bp、编码α-葡萄糖苷酶(alpha-glucosidase)的基因片段(已提交GenBank,登录号为EF638842)。; 樊少华张子峰陆军吴冬梅单群胡斌郑元林缪晓青; 关键词：中华蜜蜂 Α-葡萄糖苷酶基因克隆

小鼠ERβ基因片段的克隆及其在胚胎发育中的表达被引量：1: 2008年; 为探讨ERβ在小鼠胚胎发育过程中的表达,首先设计ERβ引物并扩增ERβ基因片段,构建ERβ/pGEM-3Z重组质粒进行克隆,分别用EcoRⅠ和HindⅢ进行酶切得到线性化DNA片段,以Sp6和T7聚合酶合成地高辛标记的(dig)正、反义RNA探针。然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERβ在小鼠胚胎中的表达。运用该探针检测到ERβ基因在10.5dpc胚胎的脑、脊神经管、生殖脊、心包、肢芽及颌弓部位表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、延髓、脊髓、肢芽中表达。推测ERβ基因可能在小鼠胚胎性别分化过程中起调节作用;可能在小鼠胚胎神经管的早期区域化过程中起作用并在3个原始脑泡进一步分化及脊髓的分化过程中起作用;可能在小鼠胚胎肢芽中的骨与软骨的形成与分化中起调控作用;可能在小鼠胚胎心脏发育过程中起作用,可能在小鼠胚胎颌弓的表面分化过程中起调控作用。; 张子峰樊少华陆军吴冬梅单群胡斌李飞郑元林; 关键词：雌激素受体Β 整体原位杂交小鼠胚胎

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吴冬梅