董元凌
- 作品数：4 被引量：15H指数：2
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- 发文基金：国家教育部博士点基金重庆市教委科研基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕细胞色素CYP337A1的克隆与原核表达
- 细胞色P450单加氧酶系是一类广泛分布于生物有机体中的重要酶系，P450酶曾被称为多功能氧化酶(MFO)、单加氧酶(monooxygenase)、芳香烃羟化酶和药物代谢酶等多种名称。它能够代谢多种内源性物质和外源性物质，...
- 董元凌
- 关键词：克隆技术原核表达
- 文献传递
- 家蚕细胞色素P450基因CYP6AE2的分子克隆与序列分析被引量：11
- 2007年
- 为了在分子水平上研究家蚕(Bom byx mori)细胞色素P450基因的特性,更好地探讨该基因与家蚕抗性的相关机制,依据已有的家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择与抗性相关的6家族中含有预测基因数量最多的CYP6AE亚家族的1条序列,并设计1对引物,用RT-PCR方法克隆了家蚕细胞色素P450家族基因CYP6AE2(Gen-Bank登陆号:EF415296)。该基因的ORF为1 572 bp,编码523个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为60.2 kD,等电点为8.50。将该基因的cDNA和家蚕基因组序列比对,结果表明该基因只有1个内含子;与已知的同亚家族基因CYP6AE1(欧洲防风草结网毛虫Depressaria pastinacella)、CYP6AE12(棉铃虫Helicoverpa armigera)编码的氨基酸序列比对,同源性同为53%。
- 艾均文董元凌孔卫青杨金宏刘劲张永亮张学松柳照应朱勇
- 关键词：家蚕细胞色素P450基因基因克隆
- 家蚕细胞色素P450 CYP337A1的原核表达被引量：1
- 2008年
- 以含有CYP337A1基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板进行PCR扩增,产物经TA克隆测序鉴定后,亚克隆至原核融合表达载体PET50(b)(含有编码64.3 kD的Nus.Tag蛋白标签)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达。利用SDS-PAGE方法,以空载和未诱导菌体作对照,对细菌总蛋白进行电泳分析,结果表明:经1mmol/L IPTG诱导2h后,即能看到1条大约120 kD的蛋白质特异带,与预计大小一致。进一步利用不同时间、不同温度以及不同浓度的IPTG进行诱导结果比较,发现在诱导时间为2h,温度为32℃,IPTG浓度为0.6 mmol/L的诱导条件下,融合蛋白表达量最大。该实验为利用该基因的蛋白产物进行功能分析创造了条件。
- 董元凌艾均文柳照应张湖静李傲祥朱勇
- 关键词：家蚕细胞色素P450原核表达
- 细胞色素P450新家族的第一个基因CYP337A1的分子克隆与序列分析被引量：7
- 2008年
- 依据家蚕基因组数据,通过BLASTP比对,选择了主要与抗性相关的CYP3集团(clan)中具有完全编码框并含有P450基因特征结构域的1条序列为研究对象,用RT-PCR方法对其进行了克隆.结果表明,该基因ORF为1 467 bp,编码489个氨基酸,推定的蛋白质分子质量为56.60 KDa,等电点为8.64.只有1个内含子,外显子/内含子边界处符合GT-AG规则.与美国棉铃虫的CYP321A、邪恶按蚊的CYP6P9的相似性(identity)相对较高,分别为34%、32%,低于同一家族成员氨基酸相似性应高于40%的规定,从而被细胞色素P450委员会命名为新家族的第一个基因CYP337A1(GenBank登陆号:EF415297).
- 艾均文董元凌孔卫青杨金宏张学松柳照应张永亮朱勇
- 关键词：细胞色素P450基因克隆家蚕
