肖伟
- 作品数：5 被引量：38H指数：2
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：环境科学与工程更多>>
- 重组质粒DNA在热处理过程中的降解/变性规律研究被引量：2
- 2008年
- 生物实验室产生的废弃重组基因片段的排放是造成"基因污染"的途径之一.热处理是目前生物实验室处置废弃重组基因片段、核酸等物质的主要手段.以pET-28b质粒为材料,采用定量PCR技术结合电泳和质粒转化等手段分析了重组基因片段在热处理过程中的降解与失活规律,以及不同离子强度对重组质粒热降解的影响.结果显示,100℃热处理过程中质粒pET28b的降解随时间变化较为明显,降解半衰期约为2.7min;处理30min后仍存在具有转化活性的质粒;实验结果表明,100℃热处理后的废弃重组基因片段排入自然生态系统后仍存在基因转移的可能性.
- 李梦南任大明王磊肖伟郑广宏
- 关键词：质粒DNA
- 六价铬还原细菌Bacillus cereus S5.4还原机理及酶学性质研究被引量：25
- 2008年
- 从宝钢电镀污泥中分离得到1株六价铬还原细菌Bacillus cereus S5.4,在液体LB培养基中培养72 h完全还原2 mmol/LCr^6＋.测定该菌株六价铬还原后细胞内外六价铬和总铬浓度,检测细胞各组分六价铬还原能力,并结合扫描电镜分析六价铬还原前后细胞形态的变化.结果表明,细菌的细胞壁膜能阻止六价铬进入细胞,是六价铬发生还原的主要场所,其通透性的改变将影响六价铬还原酶的作用;该菌株六价铬还原酶为非分泌型,在细菌细胞内侧发生作用.测定六价铬还原酶活性和稳定性：其最适温度范围25-37℃,最适pH 7,Cu^2＋有增强六价铬还原酶活性的作用;在37℃,该菌株六价铬还原酶Km为125.61μmol/L,Vmax为7.68 nmol/（min·mg）.
- 肖伟王磊李倬锴张思维任大明
- 关键词：六价铬还原酶
- 热处理重组质粒DNA的复性及其在水环境中的降解特性被引量：1
- 2009年
- 为了考察热处理后的重组DNA进入水环境后可能存在的环境风险,以pET-28b质粒为材料,以质粒相对转化效率为指标,考察了热变性重组质粒DNA的复性可能性,并在此基础上构建了人工模拟水环境系统,研究了热变性质粒DNA在水环境中的降解速率和影响因素.结果表明,热变性pET-28b质粒经过30min后,其转移活性可以得到恢复,在4～37℃之间,温度越高越有利于热变性质粒的复性.热处理过程中未被降解的质粒DNA进入水环境后,在pH值为7、8时降解速率相对较慢,在pH值为5、6、9的条件下,降解较快,但在任何pH下,1.0h后仍存在未降解的质粒DNA.水环境中的NaCl对热处理质粒DNA有一定的保护作用,而且这种作用是随着NaCl质量分数的提高而增强.进入水环境中的热变性DNA有足够的时间复性,从而可能发生基因转移.因此,这些热处理的质粒DNA进入环境后理论上存在一定的生态风险.
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- 关键词：质粒DNA水环境复性降解
- 六价铬还原细菌Bacillus cereus S5.4的筛选鉴定及还原特性研究被引量：10
- 2007年
- 六价铬生物毒性极大，是造成环境污染的主要重金属之一，其生物治理策略已引起了广泛关注。已经发现许多微生物具有六价铬抗性和还原性，但能工业应用的还十分有限。从宝钢电镀污泥中分离得到一系列高六价铬抗性菌株，其中一株S5．4显示出高六价铬还原性，经形态和生理生化特征及16s rDNA序列比对，鉴定为Bacillus cereus。该菌株好氧生长，在固体LB培养基上培养48h能耐受40mmol／L Cr^6＋，并对Mn^2＋、Ba^2＋和Mo^6＋也显出高抗性；在液体LB培养基中培养72h完全还原2mmol／L Cr^6＋，并能在补充培养基和六价铬的条件下连续还原。该菌株还原六价铬时，最适浓度为2mmol／L Cr^6＋，最适温度范围30～37℃，最适pH7～9。
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- 关键词：BACILLUSCEREUS微生物鉴定
- 废弃重组质粒DNA热处理效率的环境影响因素被引量：1
- 2009年
- 为了解环境因素对质粒DNA热处理效率的影响以及热处理过程的有效性和安全性,以pET-28b质粒为材料,采用定量PCR技术结合质粒转化等方法分析了pH、NaCl、牛血清白蛋白(BSA)及EDTA浓度等因素对质粒DNA热处理的影响.结果表明,NaCl、BSA及EDTA的存在对热处理过程中的质粒DNA具有保护作用,且保护作用依次增强.在纯水中热处理30min后的质粒DNA可扩增的片段数仅是在0.1%的EDTA中热处理30min后质粒DNA可扩增片段数目的1.7%.由于生物实验室废水中通常含有上述有机或无机物质,因此,实际热处理过程中质粒DNA的降解半衰期可能远长于先前报道的2.7～4min,残留的转化活性也可能更高,这必须引起我们高度关注.但是,研究结果也表明,酸性条件下的热处理能加速质粒DNA的失活和降解,因此建议热处理过程可在弱酸性条件下完成,以强化其处理效果.
- 李梦南郑广宏付小花乐毅全肖伟王磊任大明
- 关键词：质粒DNA降解环境因素定量PCR
