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嗜酸乳杆菌NCFM对Caco-2细胞中PTX3基因表达的影响被引量：2: 2011年; 【目的】研究嗜酸乳杆菌NCFM对肠道上皮细胞中免疫与炎症介质因子PTX3表达的影响,并进一步揭示其调节机制。【方法】嗜酸乳杆菌NCFM与Caco-2细胞共培养0、2、4、8和12 h,提取细胞RNA,采用RealTime RT-PCR方法检测PTX3基因的表达。嗜酸乳杆菌NCFM与Caco-2细胞共培养0、0.5、1、2和4 h,提取细胞蛋白质,采用Western blot方法检测NF-κB的磷酸化水平;用NF-κB的特异性抑制剂PDTC预处理Caco-2细胞30 min,然后加入嗜酸乳杆菌NCFM作用2 h,提取细胞RNA,采用Real Time RT-PCR方法检测PTX3基因的表达。【结果】嗜酸乳杆菌NCFM与Caco-2细胞共培养后能诱导PTX3的表达,并且在共培养4 h的时候PTX3的表达量达到最大,然后逐渐下降;嗜酸乳杆菌NCFM能快速的诱导NF-κB的磷酸化,并且在加入其特异性抑制剂PDTC后,PTX3的表达显著下降。【结论】嗜酸乳杆菌NCFM作用于肠道上皮细胞后能够通过迅速激活NF-κB途径暂时性的调控PTX3的表达。; 吕学娜满朝新韩琳琳王明娜张光辉刘颖杨士芹薛玉清姜毓君; 关键词：CACO-2细胞 NF-ΚB途径

基因芯片在益生菌筛选及功能性分析方面的应用被引量：1: 2009年; 基因芯片技术是鉴别微生物最有效的手段之一,它不仅可以高效、快速、准确地筛选出益生菌,而且可以对其作用宿主后产生的益生功能进行分析。本文阐明了基因芯片的原理以及近年来基因芯片技术在益生菌筛选和功能性分析方面的应用。; 王明娜姜毓君张光辉姚丽燕韩希妍周艳秋韩琳琳; 关键词：基因芯片益生菌功能分析

SYBR Green I荧光定量PCR检测乳中携带sea基因金黄色葡萄球菌的研究被引量：17: 2008年; 金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的一种常见的致病菌,而其产生的肠毒素A是乳及乳制品食物中毒事件的主要原因。本研究建立了SYBR Green I荧光定量PCR方法对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。该方法能快速、稳定地在8h内完成对乳中金黄色葡萄球菌的检测,对人工污染乳中金黄色葡萄球菌检测的最低检出限为83CFU/ml。; 李一松王明娜吕琦张光辉闫冰相丽姜毓君; 关键词：金黄色葡萄球菌荧光定量PCR SEA基因 SYBR

双重PCR检测食品中的动物源性成分被引量：2: 2009年; 建立了一种检测肉制品中动物源性成分的双重PCR技术,针对五种不同动物线粒体DNA中所含有的特异性基因分别设计引物,同时对脊椎动物所共有的保守基因进行引物设计,并将其作为体系中的内参照。用此技术可同时检测出肉制品中5种动物源性成分,检测灵敏度达到1%,能够适应市场化检测的需要。; 毕宇涵闫冰赵凤王明娜韩希妍吕琦姜毓君; 关键词：双重PCR 动物源性成分线粒体DNA 肉制品

嗜酸乳杆菌NCFM粘附宿主后对其粘附相关基因表达的影响: 2011年; 【目的】益生菌粘附于肠道上皮细胞上是它的一种益生作用。本研究通过体内外实验,分析嗜酸乳杆菌NCFM对粘附相关基因的影响。【方法】利用GO(Gene Ontolog)分类筛选Human Genome U133 Plus 2.0Array基因表达谱芯片中的粘附相关基因,通过体外Caco-2细胞培养模型和体内小鼠粘附模型,采用Real-time PCR方法对粘附相关基因进行验证分析。【结果】经NCFM作用后,12个粘附相关基因呈上调表达。利用Real-time PCR验证,12个基因在体内和体外经嗜酸乳杆菌NCFM作用后亦均同样为上调表达,其中CCL2基因上调表达最为明显。【结论】经体内外研究表明,嗜酸乳杆菌NCFM粘附肠上皮细胞后能够引起宿主粘附相关基因出现特定表达变化,为今后深入揭示其粘附作用提供必要基础。; 韩琳琳满朝新吕学娜王明娜张光辉刘颖姜毓君; 关键词：CACO-2细胞粘附基因表达

嗜酸乳杆菌NCFM对Caco-2细胞基因表达谱的影响被引量：7: 2009年; 【目的】嗜酸乳杆菌NCFM作为一株具有良好益生功能的模式菌株,采用基因芯片技术对其作用后的宿主细胞基因的变化情况进行分析,在生物、食品等领域具有较大研究价值。【方法】将嗜酸乳杆菌NCFM和Caco-2细胞共同培养2h,提取Caco-2细胞的总RNA,并将RNA反转录成cDNA,与Human Genome U133Plus2.0Array基因表达谱芯片杂交,杂交后进行图像扫描和数据分析,并采用Real-time RTPCR方法对差异表达的基因进行验证。【结果】采用基因芯片方法检测了Caco-2细胞经嗜酸乳杆菌NCFM作用2h后的基因表达变化,发现差异表达基因为508个,其中有473个基因上调,35个基因下调,初步推测Caco-2细胞能诱导多个基因的表达,以发挥嗜酸乳杆菌NCFM的益生功能。并且经Real-time RTPCR验证,表达差异显著的3个免疫调节相关基因CCL2、PTX3和TNFRSF9的确在嗜酸乳杆菌NCFM作用期间高表达。【结论】以上这些结果促进了对嗜酸乳杆菌NCFM益生功能的认识,也为揭示该乳酸菌的作用机理提供了理论基础。; 王明娜张光辉韩希妍姚丽燕周艳秋姜毓君; 关键词：CACO-2细胞基因芯片技术 REAL-TIME PCR

原料乳中沙门氏菌的快速过滤富集及PCR检测被引量：12: 2007年; 尽管国内外以PCR技术为基础对食源性致病菌的检测手段已经基本成熟,但是由于大多数有8～12h的预增菌步骤,从而增加了检测时间和检测成本。建立了对原料乳中沙门氏菌的快速、简单、灵敏PCR检测技术。人工污染沙门氏菌的原乳,先离心脱脂,然后添加Na2EDTA获得澄清乳液,最后通过0.45μm微膜过滤收集菌体。整个PCR检测过程可在6.5h以内完成,且检测灵敏度可达到1～10mL-1。该方法值得推广,应用于原乳中该食源致病菌的日常检测。; 刘伟姜毓君吕琦王明娜闫冰孙大庆; 关键词：沙门氏菌 PCR

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王明娜