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许凤: 作品数：10 被引量：18H指数：3; 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金湖南省科技计划项目长沙市科技计划项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>

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HCMV pp65原核表达重组菌株及其构建方法: 本发明公开了一种含有HCMV pp65基因片段的工程菌，其分泌表达的重组pp65蛋白作为抗原具有良好的反应原性，可以用于免疫动物制备相应的抗原诊断单克隆抗体，也为开发ELISA快速诊断抗体试剂盒提供基础；同时重组抗原可作...; 刘如石许凤邱义兰邱果李桑何赛郑姣黄雄军; 文献传递

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究被引量：1: 2014年; 人类巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。; 邱果许凤邱义兰廖旻晶李烨刘胜姿李桑刘如石; 关键词：人巨细胞病毒 PP65蛋白杂交瘤细胞单克隆抗体

一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其制备方法: 本发明公开了一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin融合蛋白，以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得能稳定分泌抗人β-ac...; 刘如石吴俊文邱义兰许凤刘胜姿李小曼; 文献传递

戊型肝炎病毒研究新进展被引量：5: 2011年; 戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是引起全球多地区大规模流行和散发病例的急性病毒性肝炎的病原体,发展中国家尤为突出;我国是戊型肝炎(hepatitis E,HE)流行的高发区.HE是一种人畜共患病,猪是人HEV病毒的主要储库,因而HE已成为一个全球性的的公共卫生问题.对HEV的病毒学和基因组特征、临床表征、流行病学、主要抗原表位以及HEV诊断试剂和疫苗研制的进展进行了综述.; 吴俊文刘胜姿李烨许凤吴莎莎邱义兰刘如石; 关键词：戊型肝炎病毒人畜共患病流行病学诊断试剂疫苗

人β-actin蛋白原核表达及其单克隆抗体制备: 2012年; 为获得分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin蛋白,以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得1株能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞,命名为2B4。采用间接ELISA和Western blot方法对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为43 kDa,可溶于8 mol/L尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105,腹水的抗体效价为1×107;间接ELISA结果表明,杂交瘤细胞在体外传20代或液氮冻存3个月后,分泌的抗体效价不变;37℃保存24 h后,抗体的效价开始下降。Western blot结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白,与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。; 吴俊文许凤熊璎珞鲁健邱义兰刘胜姿李烨刘如石; 关键词：原核表达电洗脱单克隆抗体 Β-ACTIN

宏基因组学在胃肠道微生物研究中的应用被引量：3: 2012年; 动物胃肠道中普遍存在大量共生微生物群,对于它们的研究一直受制于纯培养技术。随着分子生物学的快速发展及其在微生物学及生态学上的应用,针对未培养微生物研究的一门新型学科——宏基因组技术应运而生并迅速发展。通过提取胃肠道粘膜表面以及内容物中微生物DNA,构建总DNA文库的方法,利用基因组学的研究策略,来研究胃肠道中微生物遗传组成及群落功能。宏基因组技术在胃肠道微生物研究中广泛的应用,对于医学、生态学、生物能源利用等领域的研究具有重大的价值。; 吴莎莎卢向阳许源许凤吴俊文田云方俊刘如石; 关键词：宏基因组胃肠道微生物

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备方法及其应用: 本发明公开了一种高特异性和高亲和力的抗Pp65单克隆抗体，其由抗Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株8D6所产生，所述细胞株8D6保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：C201476。本发明杂交瘤细胞株分泌的...; 刘如石邱义兰许凤廖旻晶邱果李桑李烨刘胜姿; 文献传递

人巨细胞病毒pp65蛋白的原核表达及活性鉴定被引量：3: 2013年; 以病毒全基因组为模板,通过PCR技术扩增HCMV pp65基因编码序列,其产物连接到pMD18-T质粒,酶切并回收目的片段后克隆到表达载体pTO-T7,然后将重组质粒pTO-T7-pp65转化大肠杆菌ER2566,大量表达后将重组蛋白进行质谱法分析鉴定,再利用Western blot以及间接ELISA进行重组蛋白的活性及抗原性鉴定.结果显示:通过SDS-PAGE鉴定可知,大肠杆菌可能表达出了重组蛋白,质谱分析结果说明了重组蛋白为pp65蛋白,具有极高可信度,其相对分子质量约为63 kD,从Western blot和间接ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)的结果可知,pp65蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性与免疫原性,为制备相应的抗原诊断单克隆抗体打下了基础,同时也为开发HCMV IgG快速诊断ELISA试剂盒提供了可选原料.; 许凤邱义兰邱果李桑何赛郑姣李小曼刘如石; 关键词：免疫反应性免疫原性

一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞及其制备方法: 本发明公开了一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin融合蛋白，以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得能稳定分泌抗人β-ac...; 刘如石吴俊文邱义兰许凤刘胜姿李小曼

沼气池污泥微生物总DNA提取方法的比较被引量：6: 2011年; 沼气发酵系统是一个复杂的生态系统,其污泥微生物超过99%是不可培养的。为了优化沼气池纤维素的转化效率、沼气的产率和开展污泥微生物多样性研究,本研究采用化学裂解法、溶菌酶裂解法和QIAampDNA Stool Mini Kit提取了沼气池污泥样品中微生物的总DNA,对三种方法的DNA得率、纯度、大片段提取效果以及是否含有PCR反应抑制剂进行了研究,最后对16S rRNA基因V3区的扩增产物进行了PCR变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)分析。与化学裂解法和QIAamp DNA Stool Mini Kit法相比,溶菌酶裂解法得到的DNA量大、片段长、片段分布广、PCR扩增效率高;同时PCR-DGGE图谱显示,溶菌酶裂解法可更好地展示沼气池污泥中微生物的多样性。该结果为进一步提高沼气池中纤维素的转化效率和沼气生产优势菌种的质和量打下了一定的前期基础。; 张琳熊格生吴莎莎卢向阳吴俊文许凤颜亨梅刘如石; 关键词：总DNA提取 PCR-DGGE 微生物多样性

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