王华明
- 作品数：3 被引量：10H指数：1
- 供职机构：中国科学院天津工业生物技术研究所更多>>
- 发文基金：天津市科技计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 粉红黏帚霉糖化酶基因的克隆、表达及酶学性质分析
- 2015年
- 用黑曲霉(Aspergillusniger)G1为宿主菌表达粉红黏帚霉(Gliocladiumroseum)糖化酶。运用PCR技术从粉红粘帚霉中扩增得到一个疑似糖化酶基因序列(约1.8 kb),并将其连接到载体p Gm上组建成重组质粒p Gm-3440。将重组质粒转化到黑曲霉G1菌株中,经amd S筛选及PCR验证获得表达糖化酶的黑曲霉重组工程菌。重组菌的发酵结果显示,糖化酶基因在黑曲霉中得到了分泌表达,用国标法(QB/T 1803-1993)测得重组糖化酶活性达292 U/m L。进一步对其酶学性质进行分析发现,该重组酶最适温度和p H分别为50℃和5.0,该酶的耐热性较差,p H稳定性较好。
- 张亮花尔并王华明
- 关键词：糖化酶分泌表达
- 葡萄穗霉木聚糖酶XYA6205在黑曲霉中的表达及酶学特性分析被引量：1
- 2013年
- 木聚糖酶是涉及半纤维素水解的主要酶,具有重要的应用价值。将葡萄穗霉上可能为木聚糖酶的基因xya6205(含信号肽)克隆到载体pGm上,进而通过原生质体-PEG转化到黑曲霉G1上。得到的目的转化子经过摇瓶培养发酵,SDS-PAGE分析表明,产生了大小为20 kD左右的蛋白条带。DNS法测定1 L发酵液5 d酶活,比活达392 U/mg,其最适温度为50℃,最适pH为5.8,在不同pH缓冲液中处理18 h后,最高仍有83%残余酶活。
- 王红霞王华明张大龙罗成
- 关键词：木聚糖酶黑曲霉酶活
- 葡萄穗霉中β-甘露聚糖酶基因在黑曲霉中的表达及酶学性质被引量：9
- 2016年
- 【目的】以黑曲霉(Aspergillus niger)为宿主菌来表达葡萄穗霉(Stachybotrys chartarum)中的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)基因。【方法】通过对葡萄穗霉全基因组进行比对分析,获得编码β-甘露聚糖酶基因s16942和s331的序列信息,通过设计引物,PCR扩增得到基因s16942和s331,连接到载体pGm上,并转化到黑曲霉中,获得的转化子经过amdS二筛平板复筛,测序验证,得到高效表达此基因的工程菌株G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331。【结果】SDS-PAGE检测结果显示,G1-pGm-s16942和G1-pGm-s331表达的蛋白分子量大小分别约为48 kDa和60 kDa,且阴性对照中没有此条带。粗酶液的酶学性质表明,G1-p Gm-s16942表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为60°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达521 U/mL;G1-p Gm-s331表达的β-甘露聚糖酶的最适反应温度为50°C,最适反应pH为7,粗酶液的酶活最高达84 U/mL。【结论】本研究首次将葡萄穗霉的β-甘露聚糖酶基因转化到黑曲霉中并成功表达,并且具有较高的活性。
- 杨家兴王华明路福平
- 关键词：Β-甘露聚糖酶黑曲霉重组蛋白表达
