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堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子的克隆和表达被引量：3: 2008年; 本研究扩增和克隆了堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子,并在大肠杆菌中表达出MIF重组蛋白。根据GenBank中的MIF mRNA序列,设计特异引物,采用PCR方法以堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库为模板扩增获得MIF基因,将MIF基因片段连接到原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET28a-MIF,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对表达产物进行Western blot分析。结果从堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库中扩增出MIF基因片段,长度为709bp;经序列分析,扩增片段的核苷酸序列与GenBank中登录的MIF序列的同源性为99.5%;经SDS-PAGE检测表明重组质粒pET(28a)-MIF在大肠杆菌中以包涵体形式表达;Western blot分析证明堆形艾美耳球虫抗血清可与重组表达蛋白特异性结合。本研究结果为进一步研究该基因的功能奠定了基础。; 阎晓菲韩红玉黄兵岳城赵其平姜连连董辉卞庆松张建哲; 关键词：球虫堆形艾美耳球虫巨噬细胞移动抑制因子克隆

堆形艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建及鉴定被引量：4: 2007年; 构建堆形艾美耳球虫（Eimeria acervulina）孢子化卵囊cDNA表达文库,以筛选其功能性基因.用TRI-ZOL Reagent试剂提取堆形艾美耳球虫总RNA,再用Oligo（dT）12-纤维素柱从总RNA中分离mRNA,以mRNA为模板,RT-PCR法反转录合成cDNA第一链,用LD-PCR法扩增合成双链cDNA,经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、CHROMA SPIN-400柱分离去除小于400 bp的片段后,将cDNA与已经SfiⅠ酶切的λTriplEx2载体按一定比例连接,经体外包装,建立堆形艾美耳球虫孢子化卵囊的噬菌体表达文库.随后测定文库容量为4.6×10^6pfu/mL,扩增文库的滴度为4.4×10^10pfu/mL,重组率达到98%,插入片段大小为750-1 000 bp,并从扩增文库中扩增出了堆形艾美耳球虫巨噬细胞游走抑制因子基因片段.; 闫晓菲韩红玉岳城黄兵赵其平姜连连董辉卞庆松张建哲; 关键词：球虫堆形艾美耳球虫孢子化卵囊 CDNA文库

毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建被引量：4: 2008年; 为构建毒害艾美球虫孢子化卵囊cDNA表达文库，用Trizol试剂提取毒害艾美球虫孢子化卵囊总RNA，采用SMART技术，在逆转录酶的作用下将总RNA反转录成第一链cDNA，经LD-PCR扩增合成双链cDNA（ds cDNA）。经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切，过CHROMA SPIN-400^TM柱去除小于400bp的片段，与λTriplEx2^TM噬菌体载体连接，用GigapackⅢGold^TM载体蛋白包装，构建了cDNA噬菌体表达文库。经测定，原始文库容量为4．72×10^6pfu／mL，扩增后的文库容量为2．62×10^10pfu／mL，重组率为97．5％，插入片段为500～1100bp。证实，该文库质量良好，为毒害艾美球虫新基因的筛选、克隆及功能研究奠定了基础。; 卞庆松韩红玉赵其平姜连连董辉闫晓菲张建哲黄兵; 关键词：球虫孢子化卵囊 CDNA文库 SMART技术

巨型艾美耳球虫研究进展被引量：4: 2008年; 巨型艾美耳球虫(Eimeria maximaTyzzer,1929)是鸡的9种球虫之一,其显著特点是卵囊最大,且免疫原性最强。自1929年Tyzzer发现以来,国内外学者对其进行了大量研究,取得显著进展。本文回顾了自发现巨型艾美耳球虫以来,人们对其所进行的形态学、致病性、免疫原性、分子生物学等方面的相关研究进展,以期对该种球虫有较全面的认识。; 张建哲黄兵; 关键词：球虫巨型艾美耳球虫免疫原性

柔嫩艾美耳球虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及应用: 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)蛋白质二硫键异构酶基因EtPDI(克隆号：BW1-E06，Genbank登录号EF552214)，本发明将该基因连接到原核表达载体pGEX-4T-2，构建了原核表达重组...; 黄兵韩红玉林矫矫赵其平董辉姜连连王鑫韩静芳张建哲卞庆松闫晓菲; 文献传递

巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建及筛选: 巨型艾美耳球虫/(Eimeria maxima/)隶属于顶复器门/(Apicomplexa/)、孢子虫纲/(Sporozoasida/)、真球虫目/(Eucoccidiorida/)、艾美耳科/(Eimeriidae/)...; 张建哲; 关键词：球虫巨型艾美耳球虫 CDNA文库基因筛选; 文献传递

巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA文库的构建被引量：1: 2008年; 为构建巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)孢子化卵囊cDNA表达文库,从E.maxima孢子化卵囊中提取总RNA,以总RNA为模板、λTriplex2TM为载体,利用SMARTTM cDNA文库构建试剂盒构建全长cDNA表达文库。经测定构建的E.maxima cDNA表达文库的原始文库容量为1×106 pfu/ml,扩增后的文库滴度为5×1010 pfu/ml,重组率为95%,插入片断主要集中在0.5～1kb之间。根据已知序列设计引物,能从文库中扩增出编码E.maxima免疫球蛋白重链结合蛋白的基因序列片段。结果表明所构建的E.maxima cDNA表达文库质量良好,为克隆、筛选E.maxima的功能性基因奠定了基础。; 张建哲韩红玉姜连连董辉赵其平卞庆松闫晓菲黄兵; 关键词：球虫巨型艾美耳球虫 CDNA文库 SMART技术

柔嫩艾美耳球虫蛋白质二硫键异构酶基因的克隆、表达及应用: 本发明公开了一种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)蛋白质二硫键异构酶基因EtPDI(克隆号：BW1－E06，Genbank登录号EF552214)，本发明将该基因连接到原核表达载体pGEX－4T－2，构建了原核表达重组...; 黄兵韩红玉林矫矫赵其平董辉姜连连王鑫韩静芳张建哲卞庆松闫晓菲; 文献传递

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张建哲