王鹏
- 作品数：33 被引量：53H指数：4
- 供职机构：北华大学基础医学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 人早老素15’端390碱基片段的真核表达载体的构建与鉴定
- 2006年
- 目的:构建表达人早老素1N端部分肽段的基因重组质粒。方法:实验于2004-12/2005-01在北京老年医学研究所神经生物研究室完成。参照人早老素1mRNA结构设计合成含适当酶切位点的聚合酶链反应引物,从质粒pBS-Presenilins1扩增其5’端390bp的cDNA片段,插入质粒pGEX-4T-1,转化入大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,使其在大肠杆菌中表达以谷胱甘肽S转移酶为标签的融合蛋白质。用凝血酶定点分解融合蛋白,并应用亲和层析法纯化早老素1N130肽。结果:聚合酶链反应扩增产物约400bp,核酸序列分析结果显示,扩增产物为393bp编码130个氨基酸。重组质粒在原核细胞中表达受异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导呈时间依赖性递增。纯化的目的蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳上表现为单一条带,其表观相对分子质量为13000。每升菌液可收获目的蛋白4.5mg。结论:构建人早老素1N端部分肽段的基因重组质粒,制备了基因重组型早老素1N130肽,并确认其亲水特征。
- 王鹏温玉新何欣于顺李尧华
- 关键词：阿尔茨海默病聚合酶链反应质粒
- α-突触核蛋白功能片段对原代培养大鼠神经元突起的促生长作用
- 2012年
- 目的:研究人α-突触核蛋白(α-Syn)对原代培养大鼠神经元突起的促生长作用,阐明该蛋白质的功能片段,并探讨其作用机制。方法:获取新生Wistar大鼠大脑皮层神经元分组培养,分别加入α-Syn(添加α-Syn组)、α-Syn功能片段N端(添加N端组)、C端(添加C端组)和NAC段(添加NAC段组),对照组不添加功能片段。倒置相差显微镜观察各组神经元突起的长度,Western blotting法、免疫荧光法特异性鉴定各组α-Syn蛋白的表达水平。结果:在生长至1和2h,添加C端组和α-Syn组的神经元突起平均长度长于对照组(P<0.05),而添加NAC段组和N端组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);生长至4h,添加α-Syn组和C端组的神经元突起平均长度明显长于对照组(P<0.01),而添加NAC段组和N端组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting和免疫荧光法检测,N端和C端可以进入神经元,NAC段不能进入神经元。结论:α-Syn在原代神经元生长初期对其突起生长具有促进作用,具有这一功能的片段位于C端,其机制可能是其通过胞膜进入到神经元内,促进微管蛋白聚合形成微管,加速细胞骨架的形成和轴浆转运。
- 王鹏许洁李昕于顺何欣
- 关键词：突触核蛋白神经元突起生长
- 缺血性卒中患者血浆葡萄糖脑苷脂酶和蛋白磷酸酶2A及神经酰胺水平的变化被引量：1
- 2015年
- 目的分析缺血性卒中患者血浆葡萄糖脑苷脂酶(GBA)、蛋白磷酸酶2A(PP2A)及其降解产物神经酰胺的改变。方法回顾性纳入2013年5月至9月武警后勤学院附属医院神经内科急性缺血性卒中住院患者45例,另收集同期年龄和性别相匹配的45名体检中心的健康者为对照组。采集患者和健康受试者静脉血,抗凝分离血浆。采用蛋白质芯片H50和激光解析电离飞行时间质谱方法测试血浆神经酰胺水平。结果缺血性卒中患者血浆GBA和PP2A水平均明显低于对照组,缺血性卒中组和对照组的GBA水平分别为(2.4±0.8)、(13.1±1.4)U/L,差异有统计学意义(P<0.05),而PP2A水平分别为(6.5±2.8)、(14.5±4.7)U/L(P<0.01)。缺血性卒中患者血浆神经酰胺相对量为1.9±0.7,明显低于对照组的12.2±5.0(P<0.01)。结论缺血性卒中患者血浆GBA和PP2A以及神经酰胺水平均降低,提示卒中患者血液中α-突触核蛋白的异常磷酸化。
- 张明华宋亚光王鹏杨巍巍李昕李旭冉于顺
- 关键词：卒中血浆葡萄糖脑苷脂酶蛋白磷酸酶2A神经酰胺
- 突变型α-突触核蛋白对大鼠原代培养神经元突起生长作用研究被引量：1
- 2012年
- 目的观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其突变体A30P和A53T对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,揭示突变体A30P和A53T在帕金森病的发病机制中的作用。方法取大鼠大脑皮质神经元分组培养,在细胞外添加A30P、A53T和α-Syn,培养1 h、2 h和4 h后固定,比较A30P、A53T与α-Syn对神经元突起生长的影响。神经元突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法、单克隆抗体阻断实验鉴定各蛋白作用的特异性。结果添加α-Syn组的神经元培养至1、2和4 h时,其突起的平均长度大于对照组和添加A30P、A53T组(P<0.05)。A30P、A53T组和对照组的神经元突起长度差异无统计学意义(P>0.05)。增加蛋白的含量,浓度越高,α-Syn组神经元突起的平均长度与添加A30P和A53T组差异越大(P<0.01)。Western blotting和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn可以从培养基进入到神经元内,并均匀分布在胞体和突起。而A30P和A53T组,并未发现。结论α-Syn在原代神经元生长初期对其突起生长具有促进作用,突变体A30P和A53T,无促神经元突起生长作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关。
- 王鹏许洁李昕何欣李尧华于顺
- 关键词：突触核蛋白突起生长
- 基础医学科研团队建设与管理模式探讨被引量：1
- 2015年
- 现代医学的发展随着生物工程、计算机网络等现代科技的蓬勃发展而日新月异,传统的各门类学科研究也进入到相互依托、交叉融合和综合演变的阶段,医学的发展也由单一线性发展模式向结构式的网络发展[1]。在此背景下,客观上要求科研人员必须放弃＂闭门修行＂的科研思维方式而积极开展团队合作研究,通过不断整合各方面科技资源、形成合力来完成研究目标。
- 于顺王鹏陈敏何欣
- 关键词：科研团队
- 缺血性卒中患者血浆磷酸化α-突触核蛋白水平及磷酸化形成比例的改变被引量：2
- 2014年
- 目的：分析缺血性卒中患者血浆磷酸化α-突触核蛋白（α-Syn）水平以及α-Syn磷酸化形成比例的改变。方法回顾性分析2013年5-9月武警后勤学院附属医院神经内科急性缺血性卒中住院患者45的临床资料，另收集同期年龄和性别相匹配的45名健康者为对照组。利用双抗体夹心的酶联免疫吸附（ELISA）法测定血浆中的磷酸化α-Syn水平。另将基因重组α-Syn加入血浆，计算磷酸化α-Syn占总α-Syn的比例。结果缺血性卒中患者血浆磷酸化α-Syn水平明显高于对照组[（0.0472±0.0042）μmol/L比（0.0312±0.0043）μmol/L]；缺血性卒中患者血浆α-Syn磷酸化形成比例高于对照组[（0．1170±0．0176）μmol /（100μmo·h）比（0．0364±0．0098）μmol/（100μmol·h）]。受试者工作特征（ROC）曲线分析结果显示，血浆磷酸化α-Syn水平变化判定缺血卒中的特异度和敏感度分别为0．88和0．81，曲线下面积（AUC）为0．91，cut-off值为0.060 mol/L，AUC 95％CI：0．889～0．961；血浆α-Syn磷酸化形成比例改变判定缺血卒中的特异度和敏感度分别为0．84和0．81，AUC为0．90，cut-off值为0．055 mol/L，AUC 95％CI：0．898～0.971。结论缺血性卒中患者血浆磷酸化α-Syn水平和血浆α-Syn磷酸化形成比例较健康者增高。
- 张明华杨巍巍李昕李旭冉王鹏于顺
- 关键词：卒中Α-突触核蛋白血浆磷酸化
- 抗人血红蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的运用杂交瘤技术制备抗血红蛋白(hemoglobin,Hb)单克隆抗体,为进一步探讨Hb在帕金森病中的发病机制及早期诊断中的意义奠定基础。方法用重组人Hb作为抗原免疫Balb/c小鼠,并将其脾细胞与同系骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤,经3次有限稀释法及酶联免疫吸附试验法筛选获得抗人Hb单克隆抗体杂交瘤株5B1。腹腔注射于免疫抑制Balb/c小鼠产生腹水,并利用Dot blotting、酶联免疫吸附实验,免疫共沉淀、Western blotting法及免疫组织化学染色法进一步测定抗体效价,获得一特异性抗Hb单克隆抗体。结果成功制备出1株高亲和力、特异性好的抗Hb单克隆抗体。结论制备的单克隆抗体对Hb具有特异性(包括人血、猴及小鼠),为进一步研究Hb在帕金森病(Parkinson's disease,PD)中的作用提供了有力的特异性工具。
- 李旭颖李昕李旭冉杨巍巍于兰王鹏于顺
- 关键词：血红蛋白单克隆抗体帕金森病
- Alpha-突触核蛋白寡聚体致帕金森病小鼠模型的行为学变化被引量：4
- 2016年
- 目的观察家族型帕金森病(PD)alpha-突触核蛋白(α-Syn)突变体A53T和A30P寡聚体导致小鼠PD模型的行为学变化,探讨α-Syn寡聚体在体内的神经毒性作用。方法制备野生型α-Syn、家族型突变体A53T和A30P的聚集体,对C57BL/6小鼠进行纹状体注射。培养至第30、60天,进行爬杆实验、悬吊实验、滚轴实验和平衡木实验评估行为学改变。免疫组织化学方法检测黑质多巴胺能神经元改变。结果实验鼠纹状体α-Syn寡聚体注射后30 d出现PD样运动障碍表现,纹状体注射30 d和60 d后,各组小鼠的爬杆实验结果均与对照组无差异(P>0.05)。注射30 d后,野生型α-Syn寡聚体组小鼠平衡木实验、悬挂实验、滚轴实验与对照组无差异(P>0.05);A53T和A30P组小鼠平衡木时间比对照组长(P<0.05),滚轴上时间比对照组小鼠缩短(P<0.05),悬挂评分比对照组明显降低(P<0.01),与野生型α-Syn寡聚体组相比有统计学差异(P<0.05)。注射60 d后,野生型α-Syn寡聚体组小鼠平衡木实验平均通过时间比对照组小鼠长(P<0.05)、悬挂实验评分较对照组小鼠降低(P<0.05);A53T和A30P组小鼠各项行为学评估与对照组小鼠差异显著(P<0.01)、与野生型α-Syn寡聚体组相比有差异(P<0.05)。A53T和A30P组小鼠黑质多巴胺能神经元数目下降(P<0.05)。结论纹状体注射α-Syn突变体A53T和A30P寡聚体,模型小鼠出现PD样行为学改变和黑质多巴胺能神经元减少。
- 王鹏历春王海鹏盖晓东
- 关键词：帕金森病寡聚体
- α-突触核蛋白促进大鼠原代培养神经元突起生长被引量：9
- 2009年
- 目的研究人α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)对神经元突起生长的作用。方法原代培养新生大鼠大脑皮质神经元,细胞外添加α-Syn蛋白,测定不同时间神经元突起的长度;观察添加不同浓度的α-Syn蛋白后神经元突起的生长情况。结果α-Syn处理组神经元突起的平均长度在培养1h、2h和4h时均明显大于对照组,α-Syn的这一作用可被其特异性单克隆抗体阻断;向培养基中添加不同浓度的α-Syn后,神经元突起的长度随α-Syn浓度的增加而增加。结论α-Syn具有促进神经元突起生长的作用,并且呈明显的量-效关系。
- 刘光伟王鹏李尧华李昕何欣于顺
- 关键词：Α-突触核蛋白神经元突起
- 低温液体灌注产生亚低温的进展被引量：4
- 2007年
- 低温对脑损伤的保护作用已被众多动物实验所证实,在临床方面,尤其是发现轻度和中度低温的保护作用之后,应用逐渐增多。近年来,亚低温被用于治疗新生儿缺氧性脑病、心肺复苏后脑保护、脑外伤及脑卒中等领域。目前临床及实验中所应用的低温方式主要为全身亚低温,如降温毯、冰袋等,这些方式降温效率低,不易迅速实现亚低温,而且全身低温可伴有多种并发症,如心律紊乱、凝血功能障碍等。低温液体或自体血液灌注是目前最有效的降温方式,而且局部动脉内灌注低温液体更可以快速实现局部亚低温。介入技术的进步使得快速局部动脉内低温液体灌注成为可能。我们详细回顾相关动物实验及临床应用文献,介绍低温液体灌注产生亚低温的研究进展。
- 王鹏吉训明
- 关键词：亚低温脑损伤神经介入低温灌注
