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迟缓爱德华菌HB01外膜蛋白OmpS_2基因的克隆表达及其免疫原性研究被引量：7: 2011年; 目的:构建重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-OmpS2),制备防治鱼类爱德华氏菌病的基因工程疫苗。方法:根据GenBank报道的致病性迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpS2基因(AY078509)序列设计引物,通过PCR扩增得到大小为1284bp的迟缓爱德华菌(E.t.)HB01的外膜蛋白基因OmpS2。将该基因定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),得到重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-OmpS2)。经IPTG诱导后,由SDS-PAGE分析可见Mr在47000的特异蛋白条带。结果:Westernblot检测说明表达的外膜蛋白具有较好的反应原性。将重组菌株BL21(DE3)(pET-28a-OmpS2)制成基因工程疫苗,与嗜水气单胞菌(A.h.)溶血素(Hly)基因工程疫苗联合使用分别免疫小鼠与牙鲆(Paralichthys olivaceus)后,获得了较高的保护率,ELISA实验结果表明两种基因工程疫苗均能产生较高抗体水平。结论:本实验制备的基因工程疫苗能有效的预防鱼类爱德华氏菌病,且保护率高,能够起到免疫预防效果。; 张亚宁李晓玥耿晓娜赵宝华; 关键词：牙鲆腹水病迟缓爱德华菌嗜水气单胞菌免疫原性

牙鲆迟钝爱德华氏菌的分离及其鉴定被引量：12: 2010年; 从患腹水病牙鲆体内分离致病菌,通过生理生化鉴定方法对该菌进行了鉴定;根据GenBank上报道的迟钝爱德华氏菌标准株(ATCC15947)的16S rDNA序列以及致病性迟钝爱德华氏菌所含有的菌毛亚基(Fi mA)基因(AB100170)的核苷酸序列设计了2对引物,对所分离到的6株疑似菌进行PCR扩增,均能够扩增出目的条带,基因片段大小分别为1 399,540 bp.序列分析表明,扩增得到的基因与其参考菌株序列高度同源,同源性分别为98.86%,100%.分子生物学鉴定结果与常规细菌鉴定方法所得结果一致,证明该菌为迟钝爱德华氏菌.将该菌肌肉注射鲫鱼,发病症状与自然死亡的症状相似,并从患病鲫鱼体内分离到该菌,说明所分离的迟钝爱德华氏菌是患病牙鲆的原发病原菌.; 肖颖李晓玥张亚宁赵宝华; 关键词：迟钝爱德华氏菌

绵羊肺炎支原体(Y-98标准株)P30基因真核表达载体构建与P30-IFNγ融合蛋白疫苗研制: 绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneonia,MO)是绵羊养殖过程中的常见病原菌,可以引发绵羊支原体肿炎。该病流行范围广,发病期长,给养羊业造成了巨大的经济损失。　　本文选择P30外膜蛋白为抗原蛋白,同...; 张亚宁; 关键词：绵羊肺炎支原体融合蛋白; 文献传递

中华鳖病原菌菌种的分离鉴定及多重PCR的初步建立被引量：2: 2013年; 对患病中华鳖心脏、肝脏、肠道中分离得到的疑似致病菌株进行常规生理生化鉴定,同时采用分子生物学鉴定方法,设计细菌16srDNA保守区通用引物,进行基因扩增及序列比对,建立并优化多重PCR反应条件.分离鉴定出4种病原菌:迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda,Et)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,Av)、弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii,Cf).多重PCR检测体系敏感性与特异性良好,证明多重PCR是一种能快速准确鉴定多种中华鳖致病菌的方法,且操作简单、灵敏度高、稳定性和重复性好.; 燕晶刘文青高珊珊赵娜张亚宁赵宝华; 关键词：中华鳖多重PCR 迟钝爱德华氏菌嗜水气单胞菌维氏气单胞菌

嗜水气单胞菌HBNUAh01外膜蛋白A基因在烟草叶片细胞中的瞬时表达被引量：2: 2012年; 【目的】从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)HBNUAh01中克隆外膜蛋白A(outer membrane proteinA,ompA)基因并在烟草(Nicotiana tabacum)叶片细胞中瞬时表达该蛋白。【方法】以嗜水气单胞菌HBNUAh01为模板进行嗜水气单胞菌外膜蛋白A(AhompA)基因片段的PCR扩增,并将其克隆到pEASY-Blunt Simple载体中以进行测序。测序正确的AhompA基因序列与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescentprotein,YFP)基因的表达载体pCAMBIA1300构建重组表达载体。将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101感受态细胞中,随后用阳性转化子转染烟草叶片细胞。使用激光扫描共聚焦成像系统(Confocal Laser Scanning Microscope)检测观察融合表达AhompA基因的黄色荧光蛋白并采用RT-PCR检测AhompA基因在烟草叶片中的转录情况。【结果】从嗜水气单胞菌HBNUAh01中克隆出大小为1032 bp的AhompA基因序列,并在烟草叶片中成功表达AhompA和YFP的融合蛋白。【结论】AhompA基因在烟草叶片细胞中的成功表达为进一步研究利用植物疫苗防治嗜水气单胞菌引起的水产动物疾病奠定了基础。; 张乐祎孙彩霞张亚宁杨俊青赵宝华; 关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白黄色荧光蛋白烟草植物疫苗

绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达被引量：3: 2012年; 以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析。重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP。双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片。通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录。MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础。; 张亚宁赵利峰张乐祎赵宝华; 关键词：绵羊肺炎支原体黄色荧光蛋白真核表达

绵羊肺炎支原体和产气荚膜梭菌主要抗原基因克隆表达及其免疫原性: 赵宝华王金锋裴艳涛王琳刘文青王春波张聪敏张亚宁陈立军高洁; 项目所属科学技术领域：该项目为社会公益类项目，属于养殖业中家畜禽、兽医科学技术领域。立项背景：绵羊肺炎支原体和产气荚膜梭菌是导致绵羊患病的主要病原菌。近年来的研究发现这两种病原菌引起疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势，对养...; 关键词：; 关键词：绵羊肺炎支原体基因克隆表达兽医

绵羊肺炎支原体Y98标准株P30外膜蛋白与IFN-γ的融合表达及其免疫原性被引量：3: 2013年; 以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneonia,MO)标准株Y98的P30外膜蛋白为抗原,同时以细胞因子IFN-γ为佐剂,将两者串联融合表达。小鼠免疫保护试验结果显示,P30重组蛋白的免疫保护率为60%,IFN-γ重组蛋白的免疫保护率为20%,P30-IFN-γ重组蛋白的免疫保护率达到80%。间接ELISA试验证实,经100μL与200μL P30-IFN-γ重组蛋白免疫小鼠的血清中,P30抗体效价分别为1∶32 000与1∶64 000。以上结果证实,所制备的重组蛋白对小鼠实验个体基本安全,且P30-IFN-γ重组蛋白中的细胞因子IFN-γ组分可以调节机体免疫机能,增强P30蛋白的免疫保护效果。; 张亚宁刘文青赵红艳张乐祎赵宝华; 关键词：绵羊肺炎支原体 P30基因 IFN-Γ

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张亚宁