张乐祎
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
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- 维隆气单胞菌外膜蛋白AII的植物瞬时表达系统的构建
- 2014年
- 以维隆气单胞菌HBJY01为模板通过PCR技术扩增其外膜蛋白AII(AvompAII)基因片段,将序列正确的AvompAII基因片段与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,yfp)基因的表达载体pCAMBIA1300重组,将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101中用于转染烟草叶片细胞.通过激光扫描共聚焦成像系统检测方法和RT-PCR的方法来检测融合表达AvompAII基因的黄色荧光蛋白的表达与AvompAII基因在烟草叶片中的转录情况.从维隆气单胞菌HBJY01中克隆出大小为996bp的AvompAII基因序列,并成功构建了AvompAII蛋白的植物瞬时表达系统.通过该方法能方便可靠地构建植物瞬时表达系统,并进一步对维隆气单胞菌所引起的水产疾病的发现和实际生产应用提供了实验基础.
- 夏妍赵利峰周天惠张乐祎赵宝华
- 关键词：外膜蛋白黄色荧光蛋白烟草
- 绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达被引量：3
- 2012年
- 以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析。重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP。双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片。通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录。MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础。
- 张亚宁赵利峰张乐祎赵宝华
- 关键词：绵羊肺炎支原体黄色荧光蛋白真核表达
- 中华鳖两株气单胞菌外膜蛋白及IL-8的克隆与表达
- 中华鳖(Chinese sofishell turtle,Pelodiscus sinensis or Trionyx sinensis)是我国的重要经济型水产,其鲜美的肉质和丰富的营养广受国内外消费者的青睐。但近几年中...
- 张乐祎
- 关键词：中华鳖气单胞菌外膜蛋白植物疫苗白介素8趋化性
- 文献传递
- PCR-焦磷酸测序技术检测奶牛乳房炎4种主要致病菌方法的建立被引量：2
- 2012年
- 应用PCR-焦磷酸测序技术(pyrosequencing)一种新型快速检测奶牛乳房炎(bovine mastitis)4种主要致病菌无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)、沙门氏菌(Salmonella sp.)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的方法。根据GenBank中无乳链球菌的sip基因、停乳链球菌的isp基因、沙门氏菌的stn基因和金黄色葡萄球菌的clfa基因的序列信息,分别设计各基因保守区段的PCR扩增引物及焦磷酸测序引物。分别以108株无乳链球菌、100株停乳链球菌、136株沙门氏菌、203株金黄色葡萄球菌,以及多株其他参照菌为模板,轮流使用上述各扩增引物进行PCR扩增目的基因片段。随后采用焦磷酸测序技术针对阳性PCR扩增片段进行核苷酸保守区段的测序分析。最终得到预期的PCR扩增和焦磷酸测序结果,且实验结果具有可靠的重复性。PCR-焦磷酸测序技术适用于上述奶牛乳房炎4种主要致病菌的检测鉴定,具有准确、快速等优点。
- 剧慧栋李月颖张乐祎李秀娟赵宝华徐保红
- 关键词：奶牛乳房炎无乳链球菌停乳链球菌
- 嗜水气单胞菌HBNUAh01外膜蛋白A基因在烟草叶片细胞中的瞬时表达被引量：2
- 2012年
- 【目的】从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)HBNUAh01中克隆外膜蛋白A(outer membrane proteinA,ompA)基因并在烟草(Nicotiana tabacum)叶片细胞中瞬时表达该蛋白。【方法】以嗜水气单胞菌HBNUAh01为模板进行嗜水气单胞菌外膜蛋白A(AhompA)基因片段的PCR扩增,并将其克隆到pEASY-Blunt Simple载体中以进行测序。测序正确的AhompA基因序列与含有黄色荧光蛋白(yellow fluorescentprotein,YFP)基因的表达载体pCAMBIA1300构建重组表达载体。将该重组表达载体转化到农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)GV3101感受态细胞中,随后用阳性转化子转染烟草叶片细胞。使用激光扫描共聚焦成像系统(Confocal Laser Scanning Microscope)检测观察融合表达AhompA基因的黄色荧光蛋白并采用RT-PCR检测AhompA基因在烟草叶片中的转录情况。【结果】从嗜水气单胞菌HBNUAh01中克隆出大小为1032 bp的AhompA基因序列,并在烟草叶片中成功表达AhompA和YFP的融合蛋白。【结论】AhompA基因在烟草叶片细胞中的成功表达为进一步研究利用植物疫苗防治嗜水气单胞菌引起的水产动物疾病奠定了基础。
- 张乐祎孙彩霞张亚宁杨俊青赵宝华
- 关键词：嗜水气单胞菌外膜蛋白黄色荧光蛋白烟草植物疫苗
- 绵羊肺炎支原体Y98标准株P30外膜蛋白与IFN-γ的融合表达及其免疫原性被引量：3
- 2013年
- 以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneonia,MO)标准株Y98的P30外膜蛋白为抗原,同时以细胞因子IFN-γ为佐剂,将两者串联融合表达。小鼠免疫保护试验结果显示,P30重组蛋白的免疫保护率为60%,IFN-γ重组蛋白的免疫保护率为20%,P30-IFN-γ重组蛋白的免疫保护率达到80%。间接ELISA试验证实,经100μL与200μL P30-IFN-γ重组蛋白免疫小鼠的血清中,P30抗体效价分别为1∶32 000与1∶64 000。以上结果证实,所制备的重组蛋白对小鼠实验个体基本安全,且P30-IFN-γ重组蛋白中的细胞因子IFN-γ组分可以调节机体免疫机能,增强P30蛋白的免疫保护效果。
- 张亚宁刘文青赵红艳张乐祎赵宝华
- 关键词：绵羊肺炎支原体P30基因IFN-Γ
