梁晓梅
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：天津科技大学更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 嗜碱芽孢杆菌电转化方法的优化被引量：1
- 2010年
- 优化了嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus)TCCC11263的电转化条件,电转化条件包括细胞生长状态、电击场强、电击缓冲液组成、质粒DNA浓度。建立了一种适用于B.alcalophilus TCCC11263的电转化体系。结果为:B.alcalophilus TCCC11263培养至OD600为1.0时,电转化效率最高,DNA的转化子数达0.14×103个转化子/μg;用含0.5mol山梨醇、0.5mol甘露醇、10%甘油的电击缓冲液洗涤细胞,在场强21kV/cm、电阻200Ω,电容25μF的电击条件下,加入0.7μg质粒DNA,电转化效率达到1.5×103个转化子/μgDNA。
- 成堃路福平黎明梁晓梅
- 关键词：电转化嗜碱芽孢杆菌
- 低温碱性蛋白酶基因、含有该基因的工程菌及二者的构建方法以及低温碱性蛋白酶
- 本发明涉及一种低温碱性蛋白酶基因、含有该基因的工程菌及二者的构建方法以及低温碱性蛋白酶，低温碱性蛋白酶基因序列描述如SEQ ID No.2，序列特征为：810bp，核酸，单链，线性，DNA。产低温碱性蛋白酶的工程菌由宿主...
- 路福平黎明成堃梁晓梅王建玲王春霞
- 文献传递
- 多功能穿梭载体new pBE2 及其构建方法以及利用该载体构建碱性蛋白酶突变库的方法
- 本发明涉及一种多功能穿梭载体new pBE2及其构建方法以及利用该载体构建碱性蛋白酶突变库的方法，主要结构为LB-P43-SP-MCS-RB；其构建的主要步骤是将pBE2载体大片段分别与P43强启动子、SP的扩增产物连接...
- 路福平黎明梁晓梅王春霞成堃
- 文献传递
- 低温碱性蛋白酶基因、含有该基因的工程菌及二者的构建方法以及低温碱性蛋白酶
- 本发明涉及一种低温碱性蛋白酶基因、含有该基因的工程菌及二者的构建方法以及低温碱性蛋白酶，低温碱性蛋白酶基因序列描述如SEQ ID No.2，序列特征为：810bp，核酸，单链，线性，DNA。产低温碱性蛋白酶的工程菌由宿主...
- 路福平黎明成堃梁晓梅王建玲王春霞
- 文献传递
- α1,2-岩藻糖基转移酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2011年
- 利用PCR方法从幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)基因组DNA中获得α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fuco-syltransferase,α1,2-fuct)基因,得到大小为906 bp的目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET-22b(+)中,得到重组表达载体pET-fuct。将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,25℃,0.1 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达4 h,并用SDS-PAGE分析目的蛋白的表达情况。结果表明,可表达出相对分子质量为33 kD的蛋白,与预期分子量一致,说明α1,2-岩藻糖基转移酶在大肠杆菌BL21中实现表达,应用HPLC法进行酶活检验,酶活达到了13.21 pmol/(mgPr.h)。
- 贾红红李玉刘逸寒王尧梁晓梅路福平
- 关键词：基因克隆原核表达大肠杆菌
- 大肠杆菌—枯草芽孢杆菌穿梭表达载体pBE2R的构建及应用
- 本文构建了一个可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中稳定复制,并可以在枯草芽孢杆菌中表达外源蛋白的穿梭表达载体pBE2R。该穿梭表达载体是以pBE2为基本骨架,引入来自pWB980质粒的P43强启动子,并在其下游引入嗜碱芽孢杆菌...
- 梁晓梅
- 关键词：碱性蛋白酶前肽定向进化
- 文献传递
- 大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭质粒的构建及碱性蛋白酶的表达被引量：6
- 2011年
- 构建了一个可以在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中复制,并可以在枯草芽孢杆菌中表达外源蛋白的穿梭表达载体pBE2R。该穿梭表达载体是以pBE2为基本骨架,引入来自pWB980质粒的P43强启动子,并在其下游引入嗜碱芽孢杆菌碱性蛋白酶信号肽和前肽构建而成。试验结果表明,该穿梭表达载体pBE2R可以在大肠杆DH5α和枯草芽孢杆菌WB600中稳定存在,并可以使外源蛋白在枯草芽孢杆菌进行分泌表达,同时也为碱性蛋白酶定向改造提供了高通量筛选平台。
- 梁晓梅黎明成堃贾红红路福平
- 关键词：穿梭载体碱性蛋白酶信号肽前肽
