吴晓萍
- 作品数：52 被引量：197H指数：9
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 吲哚胺2,3-双加氧酶下调HLA-I类分子的表达
- 2007年
- 目的:探讨人类吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)对细胞表面HLA-I类分子的影响。方法:用脂质体法将含IDO基因的重组质粒pEGFP-IDO转染293T细胞,用Western blot检测IDOGFP在转染细胞中的表达,荧光抗体染色结合流式细胞术检测细胞表面的HLA-I类分子的表达。结果:Western blot证实转染重组质粒的细胞表达IDO。转染空载体的细胞与转染重组质粒的细胞HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为299.46±62.65及42.51±8.19,两者相比有显著性差异(P<0.01);转染重组质粒的细胞,未加色氨酸组与色氨酸组HLA-A,B,C-PE染色的平均荧光强度分别为309.17±34.89及692.12±33.42,两者相比亦有显著性差异(P<0.01)。结论:IDO下调细胞表面HLA-I类分子的表达,色氨酸能够逆转IDO所致的HLA-I类分子的下调。
- 黄官友黄秀艳曾耀英吴晓萍何贤辉唐先高
- 关键词：HLA-I类分子转染色氨酸
- 减少寡聚体形成的重组人碱性成纤维细胞生长因子的改造被引量：1
- 2005年
- 采用PCR突变技术改造人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)cDNA,将扩增的cDNA片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL21(DE3)/pET3c-[Ser69,87]hbFGF,用IPTG诱导表达,其[Ser69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白30％。通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法获得了纯度达98％的[Ser69,87]hbFGF样品。用MTT法测得纯化的[Ser69,87]hbFGF样品与野生型hbFGF促Balb／c 3T3细胞增殖的比活性相当。以野生型hbFGF作对照,分析反复冻融对突变体[Ser69,87]hbFGF形成寡聚体的影响,并在25℃和37℃的条件下分析其寡聚体的形成情况。结果表明,不管是反复冻融还是在25℃和37℃的条件下,突变体[Ser69,87]hbFGF形成的寡聚体都较野生型hbFGF明显减少。
- 冯辉李校堃吴晓萍苏志坚郑青黄亚东
- 关键词：寡聚体重组人碱性成纤维细胞生长因子PCR突变体蛋白质家族
- 骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳技术的建立与优化被引量：6
- 2008年
- 本研究旨在建立和优化人骨髓白血病细胞蛋白质组双向电泳分析方法,以获得分辨率高、重复性好的图谱。提取骨髓中白血病细胞总蛋白质,以等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向分离蛋白,显色后用PDQuest 7.4软件分析电泳图谱,比较不同的实验条件对图谱的影响。结果显示:通过优化样品制备和电泳中的实验环节,获得了蛋白点分离清晰的图谱,平均蛋白点数为780±73,重复实验所得蛋白点匹配率为82±5%。结论:成功建立了人骨髓白血病细胞的蛋白质组双向电泳分析方法,该方法适用于后续各亚型白血病比较蛋白组学研究。
- 肖平曾耀英聂燕芳林蔚吴晓萍
- 关键词：白血病双向电泳蛋白质组
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子的生殖毒性被引量：3
- 2005年
- 目的:研究重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)在破损皮肤表面给药时的生殖毒性。方法:从SD大鼠怀孕第6天起对破损皮肤连续给药10 d,剂量分别为3 600 U/cm2,1 800 U/cm2,900 U/cm2,观察rhaFGF对大鼠的生育能力、胎鼠的生长发育及骨骼发育的影响。结果:大鼠破损皮肤外用相当于有效剂量603、0和15倍的rhaFGF对母体的毒性、胚胎毒性和致畸作用均无明显的影响。结论:在相当于有效剂量60倍的剂量下使用rhaFGF对母体和胎儿是安全的。
- 姚成灿许华郑青赵文吴晓萍黄亚东李校堃
- 关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子生殖毒性皮肤用药
- 重组人酸性成纤维细胞生长因子Ⅰ期临床研究被引量：6
- 2005年
- 目的:确定人体对重组人酸性成纤维细胞生长因子(rhaFGF)的耐受性程度并研究其在人体的药动学特性。方法:将36例深Ⅱ°烧伤患者随机分为5组,分别在创面滴注不同剂量的rhaFGF(25,50,100,200和300 U.cm-2),qd,直至创面愈合,或用至21 d。比较各组创面愈合时间和愈合率,定期测定体温、脉搏、血压、呼吸及血尿常规、肝肾功能。并用ELISA方法测定血清rhaFGF的浓度。结果:除4例发生局部疼痛外,各剂量组均未见明显不良反应;该药很少经表皮创面吸收进入血液,各剂量组在用药后不同时间点均未能在血清中测到rhaFGF;各剂量组创面愈合时间以100 U.cm-2剂量组最短。结论:rhaFGF按剂量25,50,100,200和300 U.cm-2用于烧伤患者是安全的,以100 U.cm-2剂量组创面愈合所需时间最短。推荐Ⅱ期临床试验中使用剂量为100 U.cm-2。
- 许华郑青吴晓萍付小兵曹之舫李校坤
- 关键词：重组人酸性成纤维细胞生长因子创伤耐受性药动学
- 重组hFGF-10腺病毒促进角质形成细胞增殖被引量：3
- 2007年
- 目的:构建重组人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)腺病毒,并观察其对角质形成细胞增殖的影响,为探索新的皮肤组织工程种子细胞的来源奠定基础。方法:用PCR方法扩增得到人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)基因片段,与穿梭载体pAdTrack-CMV连接,获得的重组质粒pAdTrack-CMV-hFGF-10经PmeI线性化后,通过电转法导入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAdEasy-hFGF-10,经酶切鉴定后转染HEK-293细胞,在HEK-293细胞中包装并扩增腺病毒。用重组腺病毒感染HaCat细胞,Western blotting检测培养上清中的重组hFGF-10。MTT法检测重组腺病毒对角质形成细胞增殖的影响。结果:成功构建了含hFGF-10基因的重组腺病毒,可高效感染HaCat细胞,培养上清与hFGF-10抗体呈阳性反应。重组腺病毒对角质形成细胞的增殖具有促进作用。结论:制备出的重组腺病毒感染HaCat细胞后分泌表达hFGF-10,并可促进HaCat细胞的增殖。
- 吴晓萍曾耀英
- 关键词：成纤维细胞生长因子10腺病毒细胞增殖HACAT细胞
- 人内皮抑素在毕赤酵母中的组成型表达及其活性检测被引量：4
- 2005年
- 为获得大量具有生物学活性的重组人内皮抑素(Endostatin),在毕赤酵母中进行组成型表达的研究。将由毕赤酵母偏爱密码子组成的Endostatin cDNA插入组成型载体pGAPZαA中,构建表达载体pGAPZαA-ENDO,并转化到毕赤酵母X-33中。重组菌株在甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP)启动子的调控作用下,进行组成型表达Endostatin蛋白。重组人Endostatin产量达到102mg/L。Western blot显示:表达蛋白能与兔抗Endostatin的多克隆抗体特异性结合。纯化后的重组Endostatin具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞增殖的活性。利用毕赤酵母组成型表达系统能获得大量具有生物活性的Endostatin蛋白。
- 梁丽敏李校坤苏志坚黄亚东吴晓萍郑青
- 关键词：重组人内皮抑素毕赤酵母组成型表达
- 重组hFGF-10腺病毒对HaCat细胞影响的蛋白质组学研究
- 2010年
- 研究重组腺病毒导入人成纤维细胞生长因子10(hFGF-10)对HaCat细胞蛋白质组的影响,由鉴定的差异蛋白质推测hFGF-10对HaCat细胞作用的可能机制。采用双向凝胶电泳结合串联飞行时间质谱技术,对空载体腺病毒Ad感染细胞和重组腺病毒rAd-hFGF-10感染细胞的总蛋白图谱上的差异蛋白点进行鉴定,并通过半定量RT-PCR和Westernblotting在转录和翻译水平对差异蛋白进行确证。结果显示,获得了蛋白质分离效果较好的双向凝胶电泳图谱,鉴定了4种与细胞凋亡、细胞骨架调控、蛋白质降解等相关的差异蛋白质,并在转录和翻译水平确证了差异蛋白质VDAC2在导入目的基因hFGF-10的HaCat细胞中表达上调,提示VDAC2可能在hFGF-10的生物学功能中发挥作用。
- 吴晓萍曾耀英
- 关键词：腺病毒蛋白质组学细胞凋亡
- 抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定被引量：7
- 2005年
- 目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因。再将两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 96h ,SDS PAGE电泳检测融合蛋白的表达 ,并用Western blot杂交检测融合蛋白的免疫原性。利用肝素亲和层析纯化融合蛋白 ,同时检测融合蛋白的抑菌和促3T3Bal/b细胞分裂活性。结果 :筛选出能表达相对分子质量约为 19kD融合蛋白的重组转化株 ,SDS PAGE电泳检测显示甲醇诱导 96h后 ,融合蛋白表达量达到最高 ,且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应。融合蛋白没有抑菌活性 ,而裂解产物则具有抑菌活性。此外 ,融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤维细胞生长因子相比没有明显的降低。结论 :获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,并在毕赤酵母中实现了表达。融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性。
- 苏志坚吴晓萍郑青黄亚东庞实锋冯雅李校堃
- 关键词：抗菌肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白毕赤酵母
- 重组人碱性成纤维细胞生长因子突变体[Ser^(69,87)]的表达、纯化及其稳定性研究被引量：3
- 2005年
- 目的:对野生型人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF)进行突变改造以提高其稳定性。方法:采用PCR突变方法,将hbFGFcDNA第6 9位和87位的Cys密码子突变为Ser密码子,所得的突变片断插入表达载体pET3c的表达框架中,构建了表达菌株BL2 1(DE3) /pET3c [Ser69,87]hbFGF ,IPTG诱导表达。通过离子交换、肝素亲和两步层析的方法分离纯化突变体蛋白[Ser69,87]hbFGF。MTT法测定重组蛋白的促分裂活性。并对突变体蛋白的抗蛋白酶水解能力、热稳定性及其酸碱稳定性进行了检测。结果:所构建的表达菌株,其[Ser69,87]hbFGF的表达量占菌体总蛋白的30 %以上。经两步层析纯化,获得了纯度达98%的突变体[Ser69,87]hbFGF。纯化的样品促Balb/c 3T3细胞增殖的活性与野生型hbFGF相当。突变体[Ser69,87]hbFGF抗胰蛋白酶水解的能力较野生型hbFGF强;热稳定性和酸碱稳定性也较野生型hbFGF高。结论:突变体[Ser69,87]hbFGF的生物学活性与野生型hbFGF相当,其稳定性明显高于野生型hbFGF。
- 吴晓萍冯辉李校堃苏志坚郑青黄亚东
- 关键词：人碱性成纤维细胞生长因子突变体稳定性
