李佳
- 作品数：7 被引量：8H指数：1
- 供职机构：东华大学生物科学与技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- N端无半胱氨酸断裂蛋白质内含子的构建
- 2019年
- 在体内或体外对目标蛋白进行标记或修饰,是研究蛋白质结构和功能的重要手段之一。目前的蛋白质修饰手段存在很多不足之处,尤其会对蛋白质的结构和功能产生影响。为了避免或降低这些影响,借助断裂蛋白质内含子反式剪接技术进行修饰是一个有效可行的方法。可是因为天然存在的断裂蛋白质非常少,使该技术的应用受到了限制。因此通过数据库筛选、定点突变、WesternBlot等技术成功获得了2个有活性的体内断裂蛋白质内含子和1个有活性的N端无半胱氨酸的断裂蛋白质内含子。为后续可控的和特异的蛋白N端标记及应用提供了可行的生物学工具。
- 李佳孟清
- 关键词：蛋白质剪接
- 利用搭桥PCR技术对蛋白质内含子HP进行改造(英文)被引量：1
- 2012年
- [目的]利用搭桥PCR技术对蛋白质内含子HP进行改造。[方法]根据搭桥PCR中寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板的原则设计多对引物,通过多次PCR扩增获得目的基因片段,进而实现对蛋白质内含子HP在基因水平上进行多个位点同时定点突变和添加Linker。[结果]搭桥PCR产物克隆经DNA测序分析,证明蛋白质内含子HP内部的4个半胱氨酸成功突变成丝氨酸,几个PCR前体片段也无缝的融合成HP基因片段,而且没有引进任何其他突变;经DNA测序,46bp的DNALinker成功的插入到设计好的HP基因序列中,且没有任何碱基突变和错配。[结论]该研究不仅实现了对蛋白质内含子HP的快速改造,而且扩大了搭桥PCR的应用范围,同时也为蛋白质内含子的基础改造提供了低成本、简捷、高效的方法。
- 李佳林瑛张秀丽扬子江贾秋品孟清
- 关键词：引物设计
- 应用突变的断裂蛋白质内含子标记蛋白质N端被引量：1
- 2014年
- 蛋白质的特异位点修饰可以帮助了解蛋白质的结构与功能.但是,现有的蛋白质特异位点标记方法种类有限,而且存在局限性,所以有必要开发新的蛋白质特异位点标记方法.以谷胱甘肽-S-转移酶(GST)为研究对象,借助蛋白质反式剪接技术,建立了利用新型断裂蛋白质内含子对蛋白质进行N端标记的新方法.在这个方法中,通过简单的重组表达、标记和纯化得到带有荧光基团的小肽,经过蛋白质反式剪接,荧光基团被标记到蛋白质的N端.初步研究结果显示,标记效率可达到12%.
- 戴旭东李佳刘相钦孟清
- 关键词：蛋白质剪接荧光基团
- Euprosthenops australis牵引丝蛋白的原核表达
- 2013年
- 参照GenBank收录的牵引丝蛋白编码序列,经过密码子优化,人工合成3段cDNA序列:NT、CT和4Rep,由Ⅰ型限制性内切酶BsaⅠ和BspMⅠ介导无缝拼接,分别构建4RepCT、NT4RepCT、NT8RepCT和NT12RepCT重组模块.通过改造表达载体和优化培养温度,成功提高了4RepCT的表达量(30 mg/L).另外还首次成功表达NT4RepCT和NT8RepCT重组蛋白模块,表达量分别为21 mg/L和8.5 mg/L.4RepCT表达量的提高及NT4RepCT和NT8RepCT的成功表达证实了融合标签TRX有利于提高蛛丝蛋白的表达水平,为E.australis全长牵引丝蛋白的表达奠定了基础.
- 张秀丽陈格飞林瑛李佳孟清
- 关键词：基因克隆融合蛋白原核表达
- 立体织造打纬阻力的计算被引量：5
- 2013年
- 在织造一般平面织物的打纬过程中,纬纱受到两部分阻力的共同作用:一是纬纱在运动过程中与经纱的摩擦阻力,二是经纱对纬纱的弹性阻力.在三维立体织造过程中,由于存在多层经纱,并同时引入多根纬纱,立体织造的打纬阻力比传统的平面织造的打纬阻力要大得多.由于打纬力必须大于等于打纬阻力才能完成打纬运动,因此,打纬机构的设计需要计算出打纬阻力的范围.基于积分方法计算一般平纹织物打纬阻力,并根据立体织物的组织特性,推导出立体织物打纬阻力的计算方程,为立体织机打纬机构的设计建立了理论基础.
- 吴强李佳陈革
- 关键词：打纬立体织物
- HaV01 Pol内部半胱氨酸对其剪接活性的影响
- 2018年
- 希望获得一个内部不含有半胱氨酸的蛋白质内含子作为标记和修饰的工具。通过定点突变和搭桥PCR技术对HaV01 Pol内部4个半胱氨酸Cys进行突变和替换,然后通过Western Blot检测对应的蛋白质内含子活性。结果发现,位于112位的半胱氨酸突变可以影响HaV01 Pol的剪接活性,其余3个对其剪接活性则没有任何影响,用甘氨酸Gly和苏氨酸Thr替换112Cys后,可以挽救HaV01 Pol的剪接活性。第一次发现一个非保守区的半胱氨酸可以决定蛋白质内含子的活性。通过Gly和Thr替换成功获得了2个没有半胱氨酸的HaV01 Pol蛋白质内含子,为HaV01 Pol进一步改造和应用奠定了基础。
- 李佳孟清
- 关键词：半胱氨酸定点突变
- 悦目金蛛丝蛋白TuSp1重复模块特征被引量：1
- 2013年
- 针对蜘蛛管状腺丝蛋白(TuSp)结构进行克隆和分析,基于悦目金蛛(Argiope amoena,A.amoena)管状腺总RNA,利用简并引物和巢式聚合酶链反应(PCR)技术克隆AaTuSp1编码基因序列1273bp,其包含3个重复单元,每个重复单元编码176个氨基酸,重复单元之间的序列同源性高达97%以上,且富含丙氨酸(Ala)和丝氨酸(Ser),其次是甘氨酸(Gly),组成了一系列PolyT,PolyA,PolyS,SQ和GX模体结构,推测与其独特的力学性能相关.系统进化分析表明,不同于典型蛛丝蛋白MaSp,Flag等,AaTuSp1及近系包卵丝蛋白形成一个独立的进化分支.研究结果为基于TuSp1合成仿生蛛丝提供了新的结构基因蓝图.
- 王金雷陈格飞李佳林瑛孟清
- 关键词：悦目金蛛进化
