李博文
- 作品数：18 被引量：3H指数：1
- 供职机构：新乡学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省教育厅科学技术研究重点项目河南省基础与前沿技术研究计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪外周血单核淋巴细胞PD-L2重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用
- 本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，涉及猪外周血单核淋巴细胞PD-L2重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集猪外周血单核淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD-L2目的基...
- 王选年朱艳平岳锋张艳芳孙国鹏李鹏张万方杨媛王爱国李博文王军李鹏
- 文献传递
- 鸡T细胞表面抑制性受体PD-1及其配体PD-L1基因的克隆及原核表达
- 本研究根据GenBank上鸡PD-1和PD-L1预测序列，设计二者特异性克隆引物，以鸡外周血淋巴细胞提取的总RNA反转录的cDNA为模板，利用PCR技术获得PD-1及其配体PD-Ll全长基因片段。将鸡PD-1和PD-L1...
- 王选年李博文孙国鹏王爱国张艳芳朱艳平银梅
- 关键词：基因克隆原核表达
- 文献传递
- 鸡PD-1胞外区基因的克隆表达及其蛋白生物学活性鉴定被引量：1
- 2014年
- 为研究鸡程序性细胞死亡因子1(PD-1)胞外区的生物学活性,根据GenBank中的鸡PD-1基因序列,经生物信息学比对分析,设计鸡PD-1胞外区特异性克隆引物,扩增目的基因,连接原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET-28a-PD-1,转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,并对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间进行优化,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,应用流式细胞术对所获得重组蛋白的生物学活性进行鉴定。结果显示,成功克隆了鸡PD-1胞外区基因;SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,37℃、0.1mmol/L IPTG诱导4h时,PD-1胞外区融合蛋白表达量最高,以包涵体形式存在;流式细胞术分析结果表明,PD-1胞外区重组蛋白具有一定的生物学活性。
- 李博文孙国鹏王爱国岳锋张艳芳朱艳平银梅杨媛郭东光王选年
- 关键词：胞外区克隆原核表达生物学活性
- 鸡T细胞表面抑制性受体PD-1及其配体PD-L1基因的克隆及原核表达
- 为获得鸡T细胞表面抑制性受体PD-1及其配体PD-L1蛋白，用于制备其单克隆抗体并研究PD-l:PD-Ll通路及其对鸡免疫抑制性疾病诱导T细胞免疫抑制作用。本研究根据GenBank上鸡PD-1和PD-L1预测序列，设计二...
- 王选年李博文孙国鹏王爱国张艳芳朱艳平银梅
- 关键词：克隆技术原核表达
- 猪外周血单核淋巴细胞PD-L1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用
- 本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，涉及猪外周血单核淋巴细胞PD‑L1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集猪外周血单核淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD‑L1目的基...
- 王选年岳锋朱艳平孙国鹏张艳芳李鹏张万方杨媛王爱国李博文王军李鹏
- 文献传递
- 鸡PD-1及其配体PD-L1胞外区基因的克隆表达及多克隆抗体的制备
- PD-1（Programmed cell death1）是免疫球蛋白超家族成员之一，最早在T细胞杂交瘤细胞凋亡调节研究中发现，Ahmed及其同事在LCMV慢性感染小鼠模型中证实PD-1是T细胞表面的一种抑制性受体。PD-...
- 李博文
- 关键词：免疫学活性
- 鸡传染性支气管炎病毒S1基因抗原区的原核表达及鉴定被引量：2
- 2014年
- 本研究以鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)S1基因为研究对象,设计特异性引物扩增S1抗原集中区目的基因,长度为198bp,亚克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,构建重组原核表达质粒pGEX-6P-1-S1,转化至宿主菌Rosetta(DE3)后进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示,表达获得1条特异性蛋白条带,其分子质量大小为33.0ku,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以包涵体形式存在。Western blotting结果显示,重组蛋白能与IBV鸡阳性高免血清反应,被GST标签单抗识别,结果表明该融合蛋白正确表达并具有良好的抗原性。本研究为制备IBV单克隆抗体奠定了抗原基础。
- 朱艳平郭东光岳锋杨媛李冲王爱国李博文阮涛孔令芸王选年
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白原核表达
- 鸡外周血单核淋巴细胞PD-1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用
- 本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，具体涉及鸡外周血单核淋巴细胞PD-1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集雏鸡淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD-1目的基因片段，...
- 王选年孙国鹏王爱国朱艳平张艳芳岳锋李鹏张万方李博文杨媛阮涛王军李鹏
- 文献传递
- 鸡外周血单核淋巴细胞PD-L1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用
- 本发明属于分子病理学与免疫学技术领域，涉及鸡外周血单核淋巴细胞PD‑L1重组质粒的构建、基因丰度实时检测方法及其应用。通过采集雏鸡淋巴细胞的总RNA，将总RNA反转录成cDNA；采用普通PCR扩增PD‑L1目的基因片段，...
- 王选年冯春花孙国鹏王爱国张艳芳朱艳平李鹏岳锋张万方李博文杨媛阮涛王军李鹏
- 文献传递
- SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测鸡PD-1和PD-L1 mRNA方法的建立
- 为建立鸡程序性死亡分子1(PD-1)和及其配体(PD-Ll)SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法，根据GenBank中PD-1,PD-L1的基因序列，以鸡肌动蛋白(p-actin)基因为内参，设计特异性引物...
- 王选年王爱国孙国鹏李博文张艳芳朱艳平银梅
- 关键词：荧光定量检测
- 文献传递
